本发明专利技术属于生物检测技术领域,具体涉及一种肝癌循环肿瘤细胞标志物及其应用,本发明专利技术从肿瘤脂代谢活性异常的角度对循环肿瘤细胞(CTCs)进行功能鉴定,由于脂代谢相关信号通路分子在癌症进展中表达相对稳定,可以避免肝癌循环肿瘤细胞的漏检,从而提高监测的精确性,能更好的反映CTCs的生物学行为。同时,本发明专利技术的引物和探针(逆转录引物、锁式探针)可用于肝癌细胞APOB和/或ALB的mRNA检测,具有设计简单,原位杂交中检测信号强,无干扰等特点,原位锁式探针杂交实验表明,本发明专利技术的引物和探针可用于临床肝癌患者血液样本的CTCs鉴定,具有高特异性和高敏感性的特点,而且不局限于血液样本的使用。本的使用。本的使用。
【技术实现步骤摘要】
一种肝癌循环肿瘤细胞标志物及其应用
[0001]本专利技术属于生物检测
,具体涉及一种肝癌循环肿瘤细胞标志物及其应用。
技术介绍
[0002]循环肿瘤细胞(Circulatingtumor cells,CTCs)是从原位实体瘤或转移瘤部位自发或者因临床诊疗操作而脱落并释放到血液循环的稀有细胞。近年来,作为一种有望替代传统组织活检的“液体活检”技术的标志物之一,CTCs的计数已被报道和转移性乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌和肝癌等癌症的转移、复发、无进展生存期、总生存期等预后显著相关。“液体活检”最大的优势在于可连续取样、微创、方便、便捷,并能克服传统组织活检难以连续取样、转移灶取样困难和出血风险等技术困境,因此,具有广阔的临床应用前景。然而,血液中存在大量的血细胞,大概109个红细胞或106个白细胞中仅存在一个CTC,导致血细胞成为CTCs检测的主要干扰。因此,准确鉴定CTCs是计数和下游分析的主要技术瓶颈。鉴于大部分实体瘤细胞均来源于上皮,目前临床上用于表征CTCs的技术平台主要依赖于上皮细胞来源的标志物[如上皮细胞黏附分子(Epithelial cell adhesion molecules,EpCAM),细胞角蛋白(CKs)]的检测以实现对CTCs的分离和鉴定。然而,大量研究表明,上皮间质转化(epithelial
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mesenchymal transition,EMT)在肿瘤细胞转移级联起始步骤中扮演着重要的角色,该过程导致细胞的极性消失,形态改变,侵袭能力增强,同时,细胞上皮标志物表达下调甚至消失。已有研究表明,CTCs是肿瘤复发和转移的重要驱动因素之一,显然,EMT这一动态变化的生物进程使得CTCs标志物具有不确定性,单独依赖上皮标志物来鉴定CTCs可能会导致大部分间质型CTCs漏检,而这些间质型标志物可能具有重要的临床意义。例如,有研究表明,间质表型CTCs侵袭性较上皮表型CTCs强,并且和临床化疗耐药相关。因此,有必要开发一种在癌症进展中表达相对稳定,在白细胞和CTCs中表达差异明显的CTCs新型生物标志物。
[0003]代谢重编程是肿瘤的十大特征之一,继糖代谢和谷胺酰胺代谢异常之后,近年来,脂代谢异常和肿瘤的发生、发展、侵袭、转移表型的关联也被逐渐揭示。高脂代谢可以给细胞增殖活动提供能量,生物膜合成的原材料和脂质信号分子。研究发现,肝细胞癌的脂代谢重编程主要表现为脂质从头合成、脂质摄取、胆固醇合成和脂肪酸β氧化活动显著增加等。脂代谢相关的酶和转录调节因子在癌细胞中过表达,已经作为癌症药物治疗的有效靶标被广泛应用。而高转移潜能细胞由于其恶性表型特征,对脂质有更高的需求。因此,脂代谢异常分子可能是具有功能活性CTCs的一个有用的生物标志物。
技术实现思路
[0004]为了克服上述现有技术的不足,本专利技术提出了一种肝癌循环肿瘤细胞标志物,所述标志物为脂代谢相关信号通路分子,可为肝癌循环肿瘤细胞的鉴定或预后预测提供新的方法,能更好的反映CTCs的生物学行为。
[0005]为了实现上述目的,本专利技术所采用的技术方案是:
[0006]本专利技术提供一种肝癌循环肿瘤细胞标志物,所述标志物为脂代谢相关信号通路分子。
[0007]优选地,所述脂代谢相关信号通路分子为APOB和/或ALB。
[0008]本专利技术提供一种新型的肝癌循环肿瘤细胞标志物,以脂代谢相关信号通路分子(APOB和/或ALB)作为肝癌循环肿瘤细胞标志物,从肿瘤脂代谢活性异常的角度对循环肿瘤细胞(CTCs)进行功能鉴定,能更好的反映CTCs的生物学行为,而且脂代谢相关信号通路分子(APOB和/或ALB)在癌症进展中表达相对稳定,可以避免肝癌循环肿瘤细胞的漏检,提高监测的精确性。
[0009]需要说明的是,从原理上而言,本专利技术的脂代谢相关信号通路分子除了可以作为肝癌循环肿瘤细胞的标志物外,还可以作为其他癌症的循环肿瘤细胞的标志物。所述脂代谢相关信号通路分子优选APOB和/或ALB。
[0010]本专利技术还提供了上述的肝癌循环肿瘤细胞标志物在制备肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测产品中的应用。
[0011]优选地,在制备肝癌循环肿瘤细胞鉴定产品时,所述肝癌循环肿瘤细胞标志物为APOB和/或ALB。
[0012]优选地,在制备肝癌循环肿瘤细胞预后预测产品时,所述肝癌循环肿瘤细胞标志物为APOB。
[0013]本专利技术还提供了一种肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测产品,所述产品以脂代谢相关信号通路分子为检测指标。
[0014]本专利技术还提供了一种肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测产品,所述产品包括用于检测肝癌循环肿瘤细胞中的脂代谢相关信号通路分子的引物。
[0015]优选地,所述脂代谢相关信号通路分子为APOB和/或ALB。
[0016]优选地,所述产品采用原位锁式滚环扩增技术,所述引物包括逆转录引物、锁式探针和检测探针。
[0017]进一步地,所述逆转录引物包括如SEQ ID NO:1
‑
3所示的核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:4
‑
9所示的核苷酸序列,所述锁式探针包括如SEQ ID NO:14
‑
16所示的核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:17
‑
22所示的核苷酸序列,所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:27
‑
29所示。
[0018]更进一步地,所述引物还包括检测CD45(白细胞标志物)的逆转录引物和锁式探针,所述逆转录引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10
‑
13,所述锁式探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:23
‑
26。
[0019]本专利技术还提供了一种以脂代谢相关信号通路分子为检测指标的肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测方法,包括以下步骤(如图1所示):
[0020]A.从患者外周静脉采血5
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10毫升于抗凝采血管中(无需有创的病理活检);
[0021]B.将采集的血液样本通过离心法去除血浆,加入RosetteSep
TM
试剂室温下混匀30分钟;
[0022]C.通过密度梯度离心法富集外周血CTCs,制成细胞甩片后,利用原位滚换扩增技术将用于鉴定CTCs的脂代谢相关信号通路分子靶基因扩增,使待检信号得以放大;
[0023]D.利用共聚焦显微镜扫描样本区域,获得病人的CTCs信息:癌患者外周血CTCs的APOB和/或ALB呈阳性,细胞核Hoechst染色呈阳性,CD45表达则呈阴性。
[0024]优选地,上述检测方法中,所述脂代谢相关信号通路分子为APOB和/或ALB。
[0025]本专利技术利用原位锁式滚环扩增技术,对肝细胞癌患者外周血CTCs的脂代谢标志物进行检测,从而实现CTCs的鉴定或预后预测。肝细胞癌标本实验的验证结果表明,该方法可以实现对CTC表达的标志物在RNA水平的定性和定量本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种肝癌循环肿瘤细胞标志物,其特征在于,所述标志物为脂代谢相关信号通路分子。2.根据权利要求1所述的一种肝癌循环肿瘤细胞标志物,其特征在于,所述脂代谢相关信号通路分子为APOB和/或ALB。3.权利要求1或2任一项所述的肝癌循环肿瘤细胞标志物在制备肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,在制备肝癌循环肿瘤细胞鉴定产品时,所述肝癌循环肿瘤细胞标志物为APOB和/或ALB。5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,在制备肝癌循环肿瘤细胞预后预测产品时,所述肝癌循环肿瘤细胞标志物为APOB。6.一种肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测产品,其特征在于,所述产品以脂代谢相关信号通路分子为检测指标。7.一种肝癌循环肿瘤细胞鉴定和/或预后预测产品,其特征在于,所述产品包括用于检测肝癌循环肿瘤细胞中的脂代谢相关信号通路分子的引物。8.根据权利要求6或7...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈书坤,郑磊,孙春霞,何叶,
申请(专利权)人:南方医科大学南方医院,
类型:发明
国别省市:
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