多配体蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟热病毒复制中的应用制造技术

本发明专利技术公开了多配体蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟热病毒复制中的应用。所述的多配体蛋白聚糖4的siRNA序列通过降低多配体蛋白聚糖4的表达水平进而达到抑制犬瘟热病毒复制的作用。实验证明，SDC4 siRNA转染对细胞毒性低，不会影响细胞正常存活与增殖，并且能够明显抑制SDC4的表达水平，病毒复制水平也明显下降。因此，本发明专利技术的提出为犬瘟热的防控提供了一种新的、有效的技术手段。有效的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
多配体蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟热病毒复制中的应用


[0001]本专利技术涉及一种siRNA序列在抑制病毒复制中的应用，特别涉及多配体蛋白聚糖4 siRNA序列在抑制犬瘟热病毒复制中的应用。本专利技术属于生物


技术介绍

[0002]犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV) 感染犬所引起的急性、高度接触性传染病。自1809年首次报道以来,该病已呈世界性分布，给养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业造成巨大危害。CDV属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)。尽管CDV依据H 基因氨基酸序列相似度小于95％区分为亚洲1
‑
4型(Asia
‑1‑
4)，美洲1
‑
5型 (America
‑1‑
5)，南美1
‑
3型(South America
‑1‑
3),非洲1
‑
2型(Africa
‑1‑
2)，欧洲野生动物型(European Wildlife)，北极型(Arctic
‑
like)及岩石型(Rockborn
‑
like) 17个不同基因亚型，但公认只有一个血清型。
[0003]CDV感染造成犬临床表现为高热、腹泻、免疫抑制及脑炎等症状，与麻疹病毒相似，可引起高致死率，CDV感染脑部形成亚急性硬化性泛脑炎(SSPE)，多灶性脱髓鞘病变等，犬星形胶质细胞是犬瘟热病毒感染中枢神经系统的靶细胞，但其具体机制不清楚。多配体蛋白聚糖4(syndecan
‑
4，SDC4)是一种跨膜(I 型)硫酸乙酰肝素蛋白聚糖，是调节一系列信号转导的各种细胞因子和趋化因子的受体(Kaneider等，2005)。本专利技术专利技术人在前期对CDV感染星形胶质细胞转录组信息分析基础上，发现在感染细胞中SDC4表达升高，因此，本研究以SDC4 为研究对象，观察RNA干扰(RNA interfering，RNAi)抑制SDC4表达对CDV 感染星形胶质细胞的影响，并进一步研究其作用机制，以期为CDV的防控提供理论依据。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种犬瘟热病毒的抑制剂。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：
[0006]本专利技术专利技术人在前期对犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)感染星形胶质细胞转录组信息分析基础上，发现在CDV感染细胞中SDC4表达升高，因此，本专利技术以SDC4为研究对象，观察RNA干扰(RNA interfering，RNAi)抑制 SDC4表达对CDV感染星形胶质细胞的影响，通过Western Blot和qRT
‑
PCR方法检测，结果显示，与对照组相比，si
‑
SDC4组SDC4表达受到抑制，病毒复制水平也明显下降。
[0007]在上述研究的基础上，本专利技术提出了多配体蛋白聚糖4(syndecan
‑
4，SDC4) 的siRNA序列在制备抑制犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)复制药物中的应用。
[0008]其中，优选的，所述的多配体蛋白聚糖4(syndecan
‑
4，SDC4)的siRNA序列如下所示：
[0009]5’
GCAACAUCUUUGAGAGGACTT3
’
；
[0010]5’
GUCCUCUCAAAGAUGUUGCTT3
’
。
[0011]其中，优选的，所述的多配体蛋白聚糖4的siRNA序列能够抑制犬瘟热病毒在星形胶质细胞中的复制。
[0012]其中，优选的，所述的多配体蛋白聚糖4的siRNA序列通过降低多配体蛋白聚糖4的表达水平进而达到抑制犬瘟热病毒复制的作用。
[0013]相较于现有技术，本专利技术的有益效果是：
[0014]本专利技术提出了一种新的可用于抑制犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV) 复制的靶点——多配体蛋白聚糖4(syndecan
‑
4，SDC4)，并针对该靶点设计了 siRNA序列，实验证明，SDC4 siRNA转染对细胞毒性低，不会影响细胞正常存活与增殖，并且能够明显抑制SDC4的表达水平，病毒复制水平也明显下降。因此，本专利技术的提出为犬瘟热的防控提供了一种新的、有效的技术手段。
附图说明
[0015]图1为星形胶质细胞转染后细胞活力检测；
[0016]图2为CDV感染星形胶质细胞si
‑
SDC4抑制结果；
[0017]si
‑
SDC4：1
‑
60小时CDV感染SDC4抑制星形胶质细胞检测结果；si
‑
NC： 1
‑
60小时CDV感染对照星形胶质细胞检测结果；
[0018]图3为星形胶质细胞SDC4分子抑制后降低CDV复制水平；
[0019]图4A为RNAi抑制24h后，qRT
‑
PCR检测SDC4/GAPDH结果；
[0020]图4B为干扰60h后qRT
‑
PCR检测CDV结果(与阴性siRNA相比下降3.97 倍，*，p<0.05)。
具体实施方式
[0021]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随具体实施例的描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。
[0022]实施例1
[0023]1材料和方法
[0024]1.1病毒、细胞及主要试剂和仪器
[0025]病毒Snyder Hill(ATCC：VR
‑
1587TM)，星形胶质细胞为本专利技术人所在实验室制备。DMEM培养基和LipofectamineTM 2000均购自Invitrogen；CCK
‑
8细胞活力检测试剂盒购自美伦生物公司；阴性对照NC、SDC4 siRNA购自吉玛基因公司。
[0026]1.2方法
[0027]1.2.1细胞培养及转染
[0028]星形胶质细胞常规使用含10％v/vFBS的DMEM培养液，在5％CO2、37℃培养箱培养。转染前1d，胰酶消化对数生长期的细胞，接种细胞于含10％FBS的 DMEM培养基的24孔板，每孔0.5mL(约7
×
104细胞)，使细胞在转染日约为 70％融合度。参照LipofectamineTM2000制备Lipo 2000
‑
si本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多配体蛋白聚糖4(syndecan
‑
4，SDC4)的siRNA序列在制备抑制犬瘟热病毒(Canine distempervirus,CDV)复制药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的多配体蛋白聚糖4(syndecan
‑
4，SDC4)的siRNA序列如下所示：5
’
GCAACAUCUUUGAGAGGACTT 3<...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜骞，曲连东，刘家森，郭东春，杨鸣发，康洪涛，田进，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：