一种抗菌肽化合物及抗菌肽提取物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种抗菌肽类化合物，其具有式(I)所示结构。本发明专利技术还提供了以该化合物为主要成分的提取物的制备方法及其在抗细菌、真菌方面的用途。本发明专利技术所述化合物结构新颖，提取物制备工艺简单，耗能低，产品纯度高，所得抗菌肽化合物和提取物具有良好的抗菌作用。。。

【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽化合物及抗菌肽提取物及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于工业微生物
，涉及一种抗菌肽化合物及提取物，及其制备方法和用途。
技术背景
[0002]在食品、医药和畜牧养殖行业，由于传统抗生素的大量使用，导致了大量耐药性菌株的出现及药物残留，对人类健康造成了极大的威胁。而且随着人们健康消费意识的提升，迫切需要开发不易产生耐药性且无残留、无安全隐患的新型天然抗菌物质。天然来源的抗菌肽成为近年来研究的热点，并在食品、医药和畜牧养殖行业具有广泛的应用。
[0003]抗菌肽来源于多种生物，是自然界生物体内天然防卫系统的组成部分。抗菌肽是一种具有多种生物活性的小分子多肽，不仅用于革兰氏阴性菌，而且也作用于真菌、昆虫和某些病毒、肿瘤。与抗生素相比，对人和动物正常细胞无伤害，无副作用，无残留，在国家发布限抗令后，有希望成为新一代抗菌剂，是替代抗生素的最佳选择。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种新的抗菌肽化合物及抗菌肽提取物，并提供制备方法，以及在抗细菌、真菌等方面的用途。
[0005]为实现本专利技术目的，本专利技术提供了一种新的抗菌肽化合物A，其结构式如式(I)，分子量为1556Da，多肽序列为
[0006]Leu
‑
Val
‑
Dhb
‑
Orn
‑
Val
‑
Val
‑
Val
‑
Lys
‑
Val
‑r/>Leu
‑
Lys
‑
Tyr
‑
Leu
‑
Thr
‑
ol
[0007][0008]专利技术人将本专利技术的抗菌肽的全序列结构经蛋白数据库进行检索比较未发现有相同的多肽。
[0009]本专利技术同时提供了以化合物A为主要成分的一种抗菌肽提取物，其他活性成分为化合物A的类似物，氨基酸组成与权利要求1所述化合物基本相同，仅在于个别氨基酸与部分修饰位置的不同，抗菌肽类似物分子量范围在1542
‑
1602Da之间。
[0010]本专利技术提供的抗菌肽提取物的制备方法，包括下述步骤：
[0011]1)取侧孢短芽孢杆菌CGMCC No.16337发酵液，调pH至2.5
‑
3.5，加入助滤剂过滤得到抗菌肽滤液；
[0012]2)将抗菌肽滤液调pH至5.5
‑
6.5，将滤液通过大孔树脂吸附，再以解析剂进行解
析，得到抗菌肽解析液；
[0013]3)将解析液经过脱色树脂柱脱色，得到脱色液；
[0014]4)将脱色液浓缩至小体积，调溶液pH至2.5
‑
3.5，加入沉淀剂，过滤，取沉淀物，加溶剂溶解，得到溶解液；
[0015]5)将溶解液浓缩得到抗菌肽提取物。
[0016]本专利技术提供的抗菌肽A的制备方法，包括下述步骤：
[0017]1)取侧孢短芽孢杆菌CGMCC No.16337发酵液，调pH至2.5
‑
3.5，加入助滤剂过滤得到抗菌肽滤液；
[0018]2)将抗菌肽滤液调pH至5.5
‑
6.5，将滤液通过大孔树脂吸附，再以解析剂进行解析，得到抗菌肽解析液；
[0019]3)将解析液经过脱色树脂柱脱色，得到脱色液；
[0020]4)将脱色液浓缩至小体积，调溶液pH至2.5
‑
3.5，加入沉淀剂，过滤，取沉淀物，加溶剂溶解，得到溶解液；
[0021]5)将溶解液浓缩得到抗菌肽提取物，再经ODS制备色谱，0.5
‰‑1‰
三氟乙酸
‑
乙腈，25％
‑
35％乙腈梯度洗脱，液相检测，收集出峰时间在12.5min的色谱峰洗脱液，浓缩干燥，得到抗菌肽A。
[0022]对上述任意制备方法，进一步优选如下：
[0023]其中步骤2)中所述的树脂为XR925CS、XR925J、D312、HD
‑
2树脂中的任意一种。
[0024]其中步骤2)中所述的解析剂为70
‑
80％乙醇、丙酮或甲醇的水溶液。
[0025]其中步骤3)中所述的脱色树脂为XRTS
‑
3、TS
‑
4、D304中的任意一种。
[0026]其中步骤4)中所述沉淀剂为氯化钙、氯化钠、硫酸钠、硫酸铵、硫酸镁中的任意一种。沉淀剂加量为溶液体积的5
‑
15％。
[0027]其中步骤4)中所述的溶剂为70
‑
80％乙醇、丙酮或甲醇的水溶液。
[0028]在一个实施方式中，显示了抗菌肽化合物A及抗菌肽提取物的抗菌活性。化合物A及抗菌肽提取物除了对金黄色葡萄球菌有特别突出的抗菌活性，还对枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、蜡状芽孢杆菌、痢疾志贺氏菌、大肠埃希菌、肠炎沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、镰刀菌、小麦根腐病、苹果腐烂病、立枯丝核菌、黄瓜灰霉病等均有明显的抗菌活性，因此可广泛应用于饲料添加剂、保鲜剂、化妆品和医药产品。特别地，抗菌肽化合物A及抗菌肽提取物可以与药学上可接受的载体混合制备临床上可接受的注射剂、口服制剂、透皮吸收制剂、粘膜吸收制剂。
[0029]本专利技术的有益效果：
[0030]本专利技术所提供抗菌肽化合物结构新颖、活性作用强，提取物功效成分明确，可广泛应用于饲料添加剂、保鲜剂、化妆品和医药产品。
[0031]本专利技术抗菌肽化合物及提取物制备工艺简单，耗能低，产品纯度高，有效去除了微生物发酵代谢中产生的色素、多糖、杂蛋白等，得到的抗菌肽化合物及提取物具有显著的抗细菌、真菌的作用。
附图说明
[0032]图1抗菌肽发酵液的HPLC色谱图
[0033]图2抗菌肽提取物的HPLC色谱图
[0034]图3抗菌肽提取物质谱图
[0035]图4抗菌肽A的HPLC色谱图
具体实施方式
[0036]下述实施例及实验例仅用于证实本专利技术，不应理解为对本专利技术的限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
[0037]本专利技术所使用的侧孢短芽孢杆菌Brevibaclluslaterosporus CGMCC No.16337抗菌肽发酵液为华北制药集团新药研究开发有限责任公司生产。树脂XR925CS、XR925J、HD
‑
2、D312，为上海逊尔科技有限公司生产；XRTS
‑
3、XRTS
‑
4、D315、D304，上海逊尔科技有限公司生产；高效液相色谱仪为岛津LC
‑
2010A；INVOA 500型核磁共振波谱仪，Varian公司；Q Exactive(Thermo Fisher),Easy
‑
nLC 1000(Thermo Fisher)。
[0038本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽化合物A，其特征在于：所述化合物A，如式（I）所示，该抗菌肽来源于侧孢短芽孢杆菌Brevibaclluslaterosporus CGMCC No.16337，分子量为1556a，多肽序列为 Leu
‑
Val
‑
Dhb
‑
Orn
‑
Val
‑
Val
‑
Val
‑
Lys
‑
Val
‑
Leu
‑
Lys
‑
Tyr
‑
Leu
‑
Thr
‑
ol，式(I)。2.一种抗菌肽提取物，其特征在于，以化合物A为主要成分，其他成分为化合物A的类似物，分子量在1542
‑
1602Da之间，其制备方法包括下述步骤：1）取侧孢短芽孢杆菌CGMCC No.16337发酵液，调pH至2.5
‑
3.5，加入助滤剂过滤得到抗菌肽滤液；2）将抗菌肽滤液调pH至5.5
‑
6.5，将滤液通过大孔树脂吸附，再以解析剂进行解析，得到抗菌肽解析液；3）将解析液经过脱色树脂柱脱色，得到脱色液；4）将脱色液浓缩至小体积，调溶液pH至2.5
‑
3.5，加入沉淀剂，过滤，取沉淀物，加溶剂溶解，过滤得到溶解液；5）将溶解液浓缩得到抗菌肽提取物。3.根据权利要求1所述抗菌肽A的制备方法，其特征在于包括下述步骤：1）取侧孢短芽孢杆菌CGMCC No.16337发酵液，调pH至2.5
‑
3.5，加入助滤剂过滤得到抗菌肽滤液；2）将抗菌肽滤液调pH至5.5<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽红，任风芝，张雪霞，郄丽萍，段银箫，朱京童，封玉彬，王哲，米文强，孔德清，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：