一种免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽制造技术

本申请属于生物医药技术领域，具体涉及一种免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽。该多肽命名为I1T7肽，为7肽结构，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，具体为：INWYKFT。本申请中，发明专利技术人利用MOE软件构建了一个D型7肽库，对免疫检点中人的CTLA4（PDB：1I85）进行了虚拟筛选，筛选过程中，利用蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽


[0001]本申请属于生物医药
，具体涉及一种免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽。

技术介绍

[0002]免疫检查点是指在能免疫细胞上表达、并调节免疫激活程度的一系列分子泛称，它们对防止自身免疫（免疫功能发生异常，对正常细胞发动攻击）作用的发生起着重要作用，尤其是在肿瘤免疫治疗中起着非常重要的作用。另一方面，人体的免疫功能在受到激发时会活化，但通常不会过度活化，其主要原因即在于“免疫检查点分子”的重要功能之一就是类似汽车的刹车系统，在免疫系统活化时能够及时“刹车”，以使免疫系统的活化保持在正常的范围之内。
[0003]免疫检查点分子的表达和功能异常是很多疾病发生的重要原因之一，比如免疫检查点分子过度表达或功能过强，免疫功能受到抑制，机体的免疫力就低下，人就容易发生肿瘤等疾病；反之，免疫检查点分子的免疫抑制功能如果太差，机体的免疫功能也会异常。
[0004]在肿瘤细胞中，肿瘤细胞会表达一些特殊物质来激活免疫检查点，而后者一旦被激活，就如同踩下“刹车”，使抗原不能被提呈至T细胞，阻断了肿瘤免疫环中的提呈抗原过程，从而抑制T细胞的免疫功能，肿瘤细胞就能逃脱监视、存活下来。现有技术中，已经发现的常用的免疫检查点分子有：CTLA
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4 （细胞毒T淋巴细胞相关抗原
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4，cytotoxic T lymphocyte
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associated antigen
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4，又称CD152）、PD1 （程序性细胞死亡蛋白1, programmed death 1）等。基于这些免疫检查点分子的深入研究，为相关分子药物设计奠定了较好理论基础。
[0005]多肽药物的筛选和设计是肿瘤的免疫治疗中一种重要的技术思路，并且在部分肿瘤的免疫治疗中取得了一定进展。但由于多肽药物多为小分子物质，在体内容易降解，半衰期通常几秒钟或者几分钟，这一缺陷导致其实际技术效果较为有限。因此，设计新的、具有较长半衰期的多肽药物对于改善免疫治疗的治疗方法具有十分重要的技术意义。

技术实现思路

[0006]通过利用相关肽库，本申请目的在于一种免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽，从而为相关肿瘤防治、免疫治疗奠定一定技术基础。
[0007]本申请所采取的技术方案详述如下。
[0008]一种免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽，该多肽命名为I1T7肽，为7肽结构（具有7个氨基酸残基），具体为（由N端至C端）：INWYKFT（异亮氨酸
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天冬酰胺
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色氨酸
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酪氨酸
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赖氨酸
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苯丙氨酸
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苏氨酸）；各个氨基酸残基为L型氨基酸或者D型氨基酸；当各氨基酸均为L型氨基酸时，进一步氨基酸序列表示（如SEQ ID No.1所示）为，L型：Ile
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Asn
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Trp
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Tyr
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Lys
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Phe
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Thr；当各氨基酸均为D型氨基酸时，进一步氨基酸序列表示（如SEQ ID No.2所示）为，
D型：DIL
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DSG
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DTR
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DTY
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DLY
‑
DPN
‑
DTH。
[0009]所述免疫治疗中用于阻断CTLA4的7肽在制备抗肿瘤药剂中的应用。
[0010]多肽药物在免疫治疗中具有良好的应用前景，但实际应用中，多肽序列所决定构型是确保其应用效果的基本前提，因此，相关多肽序列的筛选仍是最为重要和最为基本的多肽药物研发工作基础。而另一方面，由于天然L型氨基酸存在半衰期短的缺陷，因此，如何延长多肽药物的半衰期也是现有多肽药物研发的重点方向。针对上述缺陷，现有技术一方面通过序列改造来进一步从根本上改善多肽药物疗效，另一方面通过对现有多肽序列结构改造来延长其半衰期从而改善其应用效果。
[0011]对于多肽序列结构的改造，现有技术一方面是通过对特定位点单个或多个氨基酸改造方式（例如偶联一定基团）来降低其生物降解速率，另一方面，采用D型氨基酸在部分多肽结构改进中也是一种较为常用的改造方式。但由于多肽结构序列不同，因此，改造后多肽效果均需进一步实验后才能加以确定。
[0012]受限于现有人工合成蛋白序列技术难度、以及合成成本等影响，目前人工合成50个以上氨基酸序列蛋白仍有较大困难，因此现有技术仍然多是进行小分子多肽的筛选和研究工作。基于这一现有技术实际情况，同时结合防降解的因素，本申请中，专利技术人利用Molecular Operating Environment（MOE）软件构建了一个D型7肽库，对免疫检点中人的CTLA4（PDB：1I85）进行了虚拟筛选，筛选过程中，利用蛋白
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蛋白对接技术原理，以CTLA4结合口袋作为多肽对接的位点，初步筛选确定了一个结合能最高的D型7肽结构，将该肽命名为I1T7，其能量值为
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53.2832，具有阻断homo CTLA4与B7
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2（即CD86）的结合的能力（亲和性或者说为阻断性），具有潜在的抗肿瘤应用效果。
附图说明
[0013]图1为 D型7肽库的设计过程，其中：A，D型氨基酸界面；B，D型肽库运行界面；C，获得的D型7肽库；图2为1I85晶体结构示意图，其中：A，CTLA4和B7
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2（即CD86）结构（彩色视图下红色的为homo CTLA4）； B，MOE中的QuickPrep Panel对homo CTLA4的结构进行优化设置；C，优化后的homo CTLA4；图3为CTLA4与I1T7相互作用模式图，其中：A，CTLA4与I1T7相互作用界面及重要相互作用；B，I1T7与CTLA4氨基酸残基之间的相互作用模式。
具体实施方式
[0014]下面结合实施例对本申请做进一步的解释说明。
[0015]实施例1需要说明的是，本申请所请求保护的多肽为利用相关软件和数据库筛选获得，因此本实施例首先就相关软件及数据库等背景情况简要说明如下。
[0016]筛选软件：MOE软件（Molecular Operating Environment），购自上海大库数据中心，版本号：MOE 2016.0802。
[0017]虚拟7肽库构建：MOE软件中，Protein Builder模块下，选择ACDEFGH的D型氨基酸（主要是为避免重复），构建3D结构；随后在Protein design模块下，选择Residue Scan，
Display选项设置为All Residues，每一个位点选择20种D型氨基酸，Site Limit分别设置为7，进行多位点同时突变，同时勾选Properties选项，计算每一个多肽的稳定性；最后，多肽库生成后，去除重复的七肽，构建获得库容本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫治疗中用于阻断PDL1 的7肽，其特征在于，该多肽命名为I1T7肽，为7肽结构，氨基酸序列为: 异亮氨酸
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天冬酰胺
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色氨酸
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酪氨酸
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赖氨酸
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苯丙氨酸
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苏氨酸；各氨基酸为L型氨基酸或者D型氨基酸。2.如权利要求1所述免疫治疗中用于阻断PDL1 的7肽，其特征在于，各氨基酸均为L型氨基酸时，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，具体为：L型：Ile
‑
Gln
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【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：