可活化白介素12多肽及其使用方法技术

本公开的特征在于作为感兴趣的细胞因子的条件活性变体的融合蛋白。在一个方面，本发明专利技术的全长多肽具有降低或最小的细胞因子受体活化活性，即使其含有功能性细胞因子多肽。例如通过裂解将阻断部分例如空间阻断多肽按顺序连接到所述活性细胞因子的接头来活化后，所述细胞因子可结合其受体并影响信号传导。述细胞因子可结合其受体并影响信号传导。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可活化白介素12多肽及其使用方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2018年5月14日提交的美国临时申请62/671,225、2018年11月6日提交的美国临时申请号62/756,504和2018年11月6日提交的美国临时申请号62/756,515的权益。以上申请的全部教义以引用的方式并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有已以ASCII格式电子版形式提交且特此以引用的方式整体并入的序列表。2019年5月14日创建的所述ASCII拷贝名为105365
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0022_SL.txt且大小为232,520字节。

技术介绍

[0005]从较少定向分化的前体发育成成熟的免疫活性淋巴样细胞、其后续抗原驱动的免疫应答以及对这些和不必要的自身反应性应答的抑制高度依赖于细胞因子并受其调节，所述细胞因子(包括白介素
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2[IL
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2]、IL
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4、IL
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7、IL
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9、IL
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15和IL
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21)利用共同γ链(γc)家族中的受体(Rochman等人,2009)以及包括IL
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12、18和23的家族成员。IL
‑
2为Treg细胞的胸腺发育所必要，并且严格调节成熟外周Treg和抗原活化的常规T细胞的几个关键方面。由于IL
‑
2在体外具有强大的T细胞生长因子活性，所以已对其进行了广泛的研究，部分原因是这种活性提供了一种直接增强例如癌症和AIDS
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HIV患者中的免疫力的潜在手段，或提供了一种对抗不必要的应答(例如移植排斥和自身免疫性疾病)的靶标。虽然用IL
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2进行的体外研究为这些研究提供了有力的依据，但是IL
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2在体内的功能显然要复杂得多，如在IL
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2缺陷型小鼠中首次说明的那样，其中在不缺乏免疫力的情况下观察到快速致死性自身免疫综合征(Sadlack等人,1993,1995)。后来在分别消融编码IL
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2Rα(Il2ra)和IL
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2Rβ(Il2rb)的基因时，得到了类似的观察(Suzuki等人,1995；Willerford等人,1995)。
[0006]本专利技术涉及用于治疗癌症和其他依赖于免疫上调或下调的疾病的条件活性和/或靶向细胞因子。例如，一些细胞因子的抗肿瘤活性是熟知且已描述的，并且一些细胞因子已经在人体内用于治疗目的。诸如白介素
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2(IL
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2)和干扰素α(IFNα)的细胞因子在患有不同类型肿瘤的患者中表现出了积极的抗肿瘤活性，所述肿瘤诸如肾转移癌、毛细胞白血病、卡波西氏肉瘤(Kaposi sarcoma)、黑色素瘤、多发性骨髓瘤等。其他细胞因子如IFNβ、肿瘤坏死因子(TNF)α、TNFβ、IL
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1、4、6、12、15和CSF对一些类型的肿瘤表现出了一定的抗肿瘤活性，并因此成为进一步研究的对象。

技术实现思路

[0007]本文提供了治疗性蛋白、编码所述蛋白的核酸以及使用所述蛋白和核酸治疗疾病或病症的组合物和方法，所述疾病或病症诸如增殖性疾病、肿瘤性疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫性疾病、感染性疾病、病毒性疾病、过敏反应、寄生虫反应、移植物抗宿主疾病等。
[0008]本专利技术的特征在于作为IL
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12的条件活性变体的融合蛋白。在一个方面，本专利技术的全长多肽具有降低或最小的IL
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12受体活化活性，即使其含有功能性IL
‑
12多肽。在例如通
过裂解将阻断部分(例如空间阻断多肽)依次连接到活性细胞因子的接头来活化后，IL
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12或其功能片段或突变蛋白可结合其受体并影响信号传导。如果需要的话，全长多肽可包括还提供额外有利特性的阻断多肽部分。例如，全长多肽可含有还延长血清半衰期和/或将全长多肽靶向所期望细胞因子活性位点的阻断多肽部分。或者，全长融合多肽可含有与阻断多肽部分不同的血清半衰期延长元件和/或靶向结构域。优选地，融合蛋白含有至少一种能够延长体内循环半衰期的元件或结构域。优选地，在所期望体内位置酶促去除此元件(例如，肿瘤微环境中的蛋白酶裂解)，从而恢复与天然存在的有效载荷分子基本类似的有效载荷分子(例如IL2或IFNa)的药代动力学特性。融合蛋白靶向所期望细胞或组织。如本文所述，通过还与所期望靶标结合的阻断多肽部分的作用或通过靶向结构域来实现靶向。识别优选靶标上的靶标抗原(例如，肿瘤特异性抗原)的结构域可通过可裂解或不可裂解的接头连接到细胞因子。如果通过不可裂解的接头连接，则靶向结构域可进一步有助于将细胞因子保留在肿瘤中，并且可将其视为保留结构域。靶向结构域不一定需要直接连接至有效载荷分子，但可直接连接至融合蛋白的另一个元件。如果靶向结构域通过可裂解的接头连接，则这点尤其正确。
[0009]在一个方面，提供了一种融合多肽，其包含IL
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12多肽或其功能片段或突变蛋白；以及阻断部分，例如空间阻断结构域。阻断部分直接或通过接头融合至IL
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12多肽，并且可通过在融合位点或接头处或附近或在阻断部分中裂解(例如，蛋白酶介导的裂解)融合多肽来与IL
‑
12多肽分离。例如，当IL
‑
12多肽通过含有蛋白酶裂解位点的接头融合到阻断部分时，IL
‑
12多肽在蛋白酶介导的接头裂解后从阻断部分释放并可结合其受体。接头被设计成例如在肿瘤微环境中在所期望细胞因子活性的位点处裂解，从而避免脱靶细胞因子活性并降低细胞因子治疗的总体毒性。
[0010]阻断部分还可用作血清半衰期延长元件。在一些实施方案中，融合多肽还包含单独的血清半衰期延长元件。在一些实施方案中，融合多肽还包含靶向结构域。在各种实施方案中，血清半衰期延长元件为水溶性多肽，诸如任选的分支或多臂聚乙二醇(PEG)、全长人血清白蛋白(HSA)或保留与FcRn结合的片段、Fc片段或直接结合到FcRn或结合到人血清白蛋白的纳米抗体。
[0011]除了血清半衰期延长元件外，本文所述的药物组合物优选地包含至少一个或多个靶向结构域，所述靶向结构域与一个或多个靶抗原或单个靶抗原上的一个或多个区域结合。本文设想，本专利技术的多肽构建体例如在疾病特异性微环境中或在受试者的血液中在蛋白酶裂解位点处裂解，并且一个或多个靶向结构域将结合至靶细胞上的靶抗原。至少一种靶抗原涉及疾病、病症或病状和/或与疾病、病症或病状相关。示例性靶抗原包括与增殖性疾病、肿瘤性疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫性疾病、感染性疾病、病毒性疾病、过敏反应、寄生虫反应、移植物抗宿主疾病或宿主抗移植物疾病相关的那些抗原。
[0012]在一些实施方案中，靶抗原为细胞表面分子，诸如蛋白质、脂质或多糖。在一些实施方案中，靶抗原是在肿瘤细胞、病毒感染的细胞、细菌感染的细胞、受本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合多肽，其具有下式：[A]
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[L1]
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[D]or[A]
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[L1]
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[D]
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[L2]
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[B]or[B]
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[L1]
‑
[A]
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[L1]
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[D]其中A是白介素12(IL
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12)多肽；B是半衰期延长元件；L1和L2各自独立地是多肽接头，其中L1是蛋白酶可裂解的多肽接头并且L2是任选地蛋白酶可裂解的多肽接头；D是IL
‑
12阻断部分；并且所述融合多肽是减弱的IL
‑
12受体激动剂，但在(i)裂解所述L1蛋白酶可裂解的多肽接头后或者(ii)在L2为蛋白酶可裂解的多肽接头时裂解L1和L2二者后，所产生的所述融合多肽的所述含有IL
‑
12多肽的片段为具有与天然存在的IL
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12多肽相当的效力和半衰期的IL
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12受体激动剂。2.一种融合多肽，所述融合多肽包含以下每一种中的至少一种：a)白介素12(IL
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12)多肽[A]；b)IL
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12阻断部分[D]；和c)蛋白酶可裂解的多肽接头[L]；并且其中所述IL
‑
12多肽和所述IL
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12阻断部分通过所述蛋白酶可裂解的多肽接头可操作地连接，并且所述融合多肽具有减弱的IL
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12受体活化活性，其中所述融合多肽的所述IL
‑
12受体活化活性比含有通过裂解所述蛋白酶可裂解的多肽接头而产生的所述IL
‑
12多肽的所述多肽的所述IL
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12受体活化活性小至少约10倍。3.如权利要求2所述的融合多肽，其中[A]为所述融合多肽的N端。4.如权利要求1至3中任一项所述的融合多肽，其中[A]具有下式：[A1]
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[L3]
‑
[A2]或[A2]
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[L3]
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[A1]，其中A1为IL
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12p40亚基多肽；A2为IL
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12p35亚基多肽；并且L3为任选地蛋白酶可裂解的多肽接头。5.如权利要求4所述的融合多肽，其中[A]具有式[A1]
‑
[L3]
‑
[A2]，并且L3不是蛋白酶可裂解的。6.如权利要求1至5中任一项所述的融合多肽，其中含有所述裂解的多肽的片段的所述IL
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12多肽的所述激动剂活性与所述未裂解的融合多肽的所述激动剂活性相比增加至少10倍。7.如权利要求6所述的融合多肽，其中所述激动剂活性使用HEK Blue报告基因细胞测定来评定。8.如权利要求1至7中任一项所述的融合多肽，其中每种蛋白酶可裂解的多肽接头独立地包含能够被选自由以下组成的组的蛋白酶裂解的序列：激肽释放酶、凝血酶、糜酶、羧肽酶A、组织蛋白酶G、组织蛋白酶L、弹性蛋白酶、PR
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3、颗粒酶M、钙蛋白酶、基质金属蛋白酶(MMP)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、ADAM金属蛋白酶、纤溶酶原活化剂、组织蛋白酶、半胱天冬酶、类胰蛋白酶和肿瘤细胞表面蛋白酶。9.如权利要求8所述的融合多肽，其中每种蛋白酶可裂解的多肽独立地包含同一蛋白
酶的两个或更多个裂解位点或被不同蛋白酶裂解的两个或更多个裂解位点，或者所述蛋白酶可裂解的多肽中的至少一种包含两种或更多种不同蛋白酶的裂解位点。10.如权利要求1至9中任一项所述的融合多肽，其中IL
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12阻断部分抑制所述融合多肽对所述IL
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12受体的活化。11.如权利要求1至10中任一项所述的融合多肽，其中所述IL
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12阻断部分非共价结合至所述IL
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12多肽。12.如权利要求1至11中任一项所述的融合多肽，其中所述IL
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12阻断部分结合所述IL
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12p40亚基多肽。13.如权利要求1至11中任一项所述的融合多肽，其中所述IL
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12阻断部分结合所述IL
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12p35亚基多肽。14.如权利要求1至11中任一项所述的融合多肽，其中所述IL
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【专利技术属性】
技术研发人员：W，
申请(专利权)人：狼人治疗公司，
类型：发明
国别省市：