谷胱甘肽用于活动性结核病的鉴别与诊断制造技术

本发明专利技术涉及谷胱甘肽应用于活动性结核病的鉴别与诊断，并提供一种诊断试剂，本发明专利技术特别涉及一种新的结核病诊断方法，即采用谷胱甘肽作为生物标志物，检测尿液中谷胱甘肽的含量，并以特定的含量的量值作为诊断指标，低于该指标即判断为阳性。

【技术实现步骤摘要】
谷胱甘肽用于活动性结核病的鉴别与诊断
本专利技术涉及一种诊断试剂，特别涉及一种谷胱甘肽(Glutathione)应用于活动性结核病的鉴别与诊断。
技术介绍
结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,M.tb)感染引发的一种严重威胁人类健康的慢性传染性疾病，是全球十大死亡原因之一，也是单一传染源导致死亡的主要原因。全球将近四分之一的人感染结核分枝杆菌，并长期处于潜伏感染状态，其中5％～10％可能会在一生中发生活动性结核病。从结核分枝杆菌潜伏感染发展到活动性疾病对结核病的传播构成了持久的威胁。从地域上看，2018年大多数结核病病例是在东南亚地区(44％)，其中中国占全球患病人数9％，仅次于印度(27％)。因此对结核感染状态的快速准确诊断是结核病防控的重要组成部分之一。然而由于结核分枝杆菌的自身的细胞壁较厚、脂肪酸含量较高、细胞内寄生等生物学特点，结核病早期以及快速诊断的灵敏度和检出率均较低，一直未有突破进展。尤其是在卫生管理不善和医疗水平薄弱的国家和地区，仍然有将近一半的病原学阴性的结核病人无法得到科学、合理和快速有效的诊断，甚至贻误病情、导致耐药和传播。因此，如何实现结核病患者的早期和快速诊断、研发可用于结核病早期诊断的、新的特异性生物标识物成为我国和世界性的重大公共卫生领域亟需解决的关键科学问题。目前结核病毒诊断方法有：(一)病原学检查：痰涂菌检查和痰结核菌检查是诊断肺结核“金指标”，简便易行，准确性较高，痰中查出结核菌，就能确诊患了结核病。一般初次就诊要查三个痰标本，即夜间痰、清晨痰和即时痰，结果可信度高，并可以培养结核菌做药敏试验。但诊断率低，培养结核菌需耗费6-8周，周期过长，应用受到限制。(二)X射线检查：胸部X线检查可以早期发现结核病，而且可以确定病灶的部位、性质、范围，了解发病情况及用于治疗效果的判断，并且开展方便，病人乐于接受。胸部CT可以发现较小的或隐蔽部位的病变，可以弥补一般X线检查的不足。但检查价格相对，且容易与其他肺部疾病混淆，需要专业医生进行确诊。(三)肺结核病免疫学诊断：1.结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)试验，该试验阳性是常用的感染过结核菌的证据之一，但是假阳性率高，容易误诊。2.血或痰结核抗体检测，血中或痰中抗体阳性也有助于诊断，但易出现假阳率，不能区分潜伏感染和活动性结核。3.BACTEC法，通过检测结核分枝杆菌的代谢物进行诊断，一般两周可分离出分枝杆菌，但菌量的数量会影响阳性结果出现的时间。4.聚合酶链反应(PCR)，优点是敏感性可达98％-100％，缺点是特异性较差。5.γ-干扰素释放试验(IGRA)，虽然敏感性和特异性均较高，但价格昂贵针难以实现高通量检测。(四)其他检查：只能作为辅助诊断，不能作为诊断依据。1.纤维支气管镜检查，可以直接观察或间接判断支气管、肺内病变，并且有活组织检查、灌洗、录像、拍摄气管内照片等功能，对于诊断和鉴别诊断特别有用。2.胸腔镜和纵隔镜检查，均可用于观察胸腔、纵隔内肿大淋巴结，并可取出活组织检查以利诊断和鉴别诊断。3.超声波检查，主要用于胸腔积液的诊断和鉴别诊断。目前的结核病诊断的分子标识研究，主要有结核分枝杆菌和宿主两个方向，但尚不能满足结核诊断的需求。本实验对活动性肺结核患者和潜伏感染患者进行无创性代谢组学分析，在代谢组水平上寻找可用于结核诊断的相关分子标识，并对结核诊断的分子标识研究提供路径。谷胱甘肽(Glutathtion)是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽，参与许多重要的解毒反应，并具有氧化还原缓冲作用，以防止氧化损伤，调节体内的氧化还原信号。有研究证实，谷胱甘肽可通过形成S-亚硝基硫酮而成为一氧化氮的载体分子，从而抑制结核分枝杆菌的生长，但其作为生物标志在结核病诊断方面尚未有研究。目前常用的结核病诊断标准一般是细菌学，就是痰查抗氮杆菌阳性或者是痰培养阳性，还有就是通过分子生物学检查，如PCR或者是T-SPOT检查，如果是阳性，考虑确诊结核病。本专利技术在现有技术的基础上，采用生物标志物方法，意外发现一种新的生物标志物，即谷胱甘肽，由于谷胱甘肽是人们非常熟悉的物质，检测方法异常简便，费用低廉。为此，本专利技术提供一种新的结核病诊断方法，即采用谷胱甘肽作为生物标志物，检测尿液中谷胱甘肽的含量，并以特定的含量的量值作为诊断指标，低于该指标即判断为阳性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供谷胱甘肽作为生物标志物在结核病诊断中的应用。本专利技术首次发现，谷胱甘肽能够作为诊断活动性结核或潜伏结核感染的生物标志物，并且进一步发现其具有良好的敏感性和特异性。本专利技术更加详细的技术方案描述如下：本专利技术提供谷胱甘肽在制备结核病诊断的试剂中的应用。本专利技术进一步提供谷胱甘肽在制备结核病诊断的医疗器械中的应用。所述的诊断结核病以谷胱甘肽作为诊断分子标记物。本专利技术提供一种试剂组合，该试剂组合的使用可以直接或间接从尿液中提取分离出谷胱甘肽，进一步检测谷胱甘肽含量，并将谷胱甘肽含量作为作为诊断指标，以确定尿液提供者是否患有结核病，即本专利技术提供一种试剂组合，该试剂组合以谷胱甘肽作为检测目标，并以其作为生物标志物用于诊断结核病。为此，本专利技术进一步提供本专利技术所述的试剂组合在制备诊断结核病试剂盒的应用。本专利技术所述的生物标志物谷胱甘肽，为已知化合物，可以根据任何一种现有方法提取或检测，所述方法包括任何一种谷胱甘肽的检测方法，如现有文献中报道的：酶循环法，比色法，荧光法，色谱法，高效毛细管电泳法，流式细胞仪法，亚硝基铁氰化钠法，四氧嘧啶法，DTNB法等，优选采用色谱法，更优选采用高效液相色谱法，最优选采用超高效液相色谱和质谱连用的方法。本专利技术所述应用包括用于区分活动性结核病患者、结核潜伏感染以及非活动性肺结核非潜伏感染者。本专利技术所述的结核病为肺结核或肺外结核。本专利技术所述体液为尿液。具体的，本专利技术的试剂盒，包括任何一种可以用于提取分离谷胱甘肽的试剂，本专利技术的试剂盒包括任何一种现有的检测谷胱甘肽的试剂盒，如：谷胱甘肽分析试剂盒上海晶抗生物，上海纪宁科研用谷胱甘肽检测试剂盒，谷胱甘肽检测试剂盒-通蔚，默克谷胱甘肽检测试剂盒，GlutathioneAssay试剂盒(Fluorometric)，谷胱甘肽试剂盒gshelisakit等。优选的，本专利技术试剂盒中包括含有谷胱甘肽标准对照品，还包括检测方法说明书，检测标准的参考数值，有机或无机试剂，溶剂的配制方法等。本专利技术的技术方案是经过研究得到的，研究方法如下：1.技术方案1.1研究对象和方法1.1.1研究对象研究对象及纳入标准研究对象中，活动性结核来自北京市胸科医院的确诊的肺结核住院患者，诊断标准依据《中华人民共和国卫生行业标准(WS288—2017)肺结核诊断》标准，且病原学检测阳性即：痰涂片或痰培养至少1项为阳性，无既往结核病史(问诊及X射线胸片检查无陈旧性结核病灶)，初次抗结核治疗，用药少于7天；潜伏感染者为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.谷胱甘肽在制备结核病诊断的试剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.谷胱甘肽在制备结核病诊断的试剂中的应用。


2.谷胱甘肽在制备结核病诊断的医疗器械中的应用。


3.根据权利要求1或2任何一项权利要求所述的应用，其中所述结核病诊断是以谷胱甘肽作为诊断分子标记物。


4.一种试剂组合，该试剂组合的使用可以直接或间接从体液中提取分离出谷胱甘肽，进一步检测谷胱甘肽含量，并将谷胱甘肽含量作为诊断指标，以确定体液提供者是否患有结核病。


5.根据权利要求4所述的试剂组合，其中所述体液为尿液。


6.根据权利要求4所述的试剂组合，为一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：金奇，郑建华，刘立国，邓佳珩，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11