一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括位于底板上的试剂条，该试剂条从加样端开始依次为样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫上包被有生物素化幽门螺杆菌抗原B；所述荧光微球结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A；所述硝酸纤维素膜靠近荧光微球结合垫的一端设包被有亲和素的检测线；所述硝酸纤维素膜靠近吸水垫的一端设包被有羊抗鼠IgG的质控线。本发明专利技术完成检测信号的三重放大，提高了试剂的灵敏度。本发明专利技术实现了从尿液中对幽门杆菌抗体进行检测，具有取样方便、完全无创、检测灵敏度高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于生物检测的
，具体涉及一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
幽门螺旋杆菌感染的诊断方法分为侵入性和非侵入性两大类，侵入式检查是基于内窥镜和胃粘膜活检而完成，胃镜下取胃粘膜组织进行检查，检查方法有快速尿素酶实验，直接涂片、组织学检查、细菌培养和分子生物学检测（幽门螺旋杆菌分型和基因突变检测）；非侵入性幽门螺旋杆菌检测方法有尿素呼气实验、粪便幽门螺旋杆菌抗原检测和幽门螺旋杆菌血清学抗体试验。HP（幽门螺杆菌）感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的病因，更是胃癌的主要致病因素。因此，HP是迄今为止引发胃部恶性肿瘤最重要风险因子，其中腺癌是最常见类型，约占90%。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构（WHO/IARC）将HP定为Ⅰ类致癌原。而在我国，幽门螺杆菌的感染率约为60%。目前市场上常见的是检测血清（或血浆）中的幽门螺旋杆菌抗体，但是由于检测样本的特殊性，导致这种检测手段必须在医院完成，并不适用于普遍性筛查。对于年纪较小的儿童而言，采血会产生一定的抗拒心理，加大采样的难度。研究资料表明，在尿液样本中同样存在幽门螺杆菌抗体，且与血清检测相比具有高度的一致性。而检测尿液中的幽门螺旋杆菌抗体，与血液检测相比，其最大的优势在于检测样本的易获得性，且可以随时随地取样并进行检测，实现家庭自测，方便用于幽门螺杆菌的普遍性筛查。尿液幽门螺杆菌抗体检测的难点，在于尿液中的抗体含量极低，约为血清中含量的百分之一左右。因此，对于尿液检测，对试剂提出了极高的反应灵敏度。目前对于幽门螺杆菌抗体的检测，只能用于血液样本的检测，而没有尿液检测的产品。时间分辨荧光免疫分析法是目前与化学发光、电化学发光并驾齐驱的三种超敏免疫分析方法之一。其原理是采用较长荧光半衰期的稀土离子作标记物，由于这种标记物Stokes位移大(＞150nm)且荧光寿命比本底物质荧光寿命高5～6个数量级，因此，测定时只要延缓测量时间，待本底物质的荧光充分衰减后再测定标记物的信号就可有效地消除各种非特异性荧光的干扰，获得很高的灵敏度。时间分辨荧光微球(TimeResolvedFluorescentMicrosphere)是采用时间分辨荧光染料与苯乙烯一起发生共聚而制备出来的一种特殊的功能微球，每个微球中可包裹成千上万个荧光分子，大大提高了荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度。荧光微球能够用于免疫检测是因为其表面带有功能基团（羧基或羰基），能够和抗原（抗体）进行偶联形成化学键，从而得到复合物用于检测。和胶体金的结合机制（静电吸引）的产物相比，化学键的结合产物的稳定性高，而且能降低位阻效应。更为重要的是由于微球包埋的稀土离子已经过了螯合，无需解离增强步骤，因此从根本上解决了传统的DELFIA法（时间荧光分辨法）只能在液相中而不能在固相界面反应的问题，从而解决了将时间分辨荧光应用于免疫层析平台的技术瓶颈。将时间分辨荧光微球代替代胶体金作为示踪物，在此基础上开发出相应的免疫层析产品，其灵敏度高于普通胶体金或有色乳胶免疫层析方法1-3个数量级。时间分辨荧光法和胶体金法的区别：1、抗体的标记原理不同：胶体金是通过静电作用使带正电荷的胶体金分子和带负电荷的标记抗体相结合，荧光时间分辨是通过活化功能基团，用共价键的方式将活化基团和标记抗体相结合，相比较胶体金法而言，抗原与示踪物的结合更为牢固，检测灵敏度与特异性更好；2、检测结果的表达：胶体金法的检测结果是可视的，不需要借助仪器，时间分辨荧光法的结果虽然不能直接目测，但只需要使用一个简单的荧光设备（如便携式荧光验钞笔），即可肉眼观察到检测结果；目前幽门螺杆菌抗体的快速检测产品为ELISA或胶体金方法，而没有采用时间分辨荧光微球方法。目前的幽门螺杆菌抗体检测，多为间接法（即标记抗人IgG/IgM，包被幽门螺杆菌抗原）；双抗原夹心法（即标记幽门螺杆菌抗原A，包被幽门螺杆菌抗原B），而没有将此两种方法进行结合的检测产品。目前专利技术专利申请说明书CN201910395518.2公开了一种基于磁分离与量子点标记幽门螺杆菌快速检测方法和试剂盒，虽然该专利申请也涉及时间分辨标记幽门螺杆菌快速检测方法，但该专利申请存在如下缺陷：1.该专利申请检测的是幽门螺杆菌抗原，其只能检测现状感染，无法检测既往感染，存在一定的局限性。2.该专利申请检测的物质为粪便样本，粪便样本的取样对于使用者的接受度较低，且粪便样本在检测时需要经过预处理。3.该专利申请需要用到专用医疗器械设备，因此仅能在专业的医疗机构使用，不适用于大规模普查，也不适用于家庭检测，存在一定的局限性。传统的金标渗滤法检测尿液幽门螺杆菌抗体，检测过程复杂，对于操作人员的操作要求较高，容易产生人工操作误差，影响准确率。目前市场上经国家权威机构批准上市的幽门螺旋杆菌抗体检测试剂盒（包含国产与进口产品），没有以尿液为检测样本的产品。国内对于尿液检测幽门螺旋杆菌的产品开发目前仍处于空白阶段。如何提高检测灵敏度、简化检测流程，避免人工操作误差，提高检测准确率以满足尿液检测幽门螺杆菌抗体的要求成为了本领域的技术难题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，其实现了从尿液中对幽门杆菌抗体进行检测，具有取样方便、完全无创、检测灵敏度高的优点。无需专用的设备，操作方法简单，能满足大规模的普查筛查的需要。为此，本专利技术还提供该尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：在本专利技术的一方面，提供一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，包括位于底板上的试剂条，该试剂条从加样端开始依次为样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫上包被有生物素化幽门螺杆菌抗原B；所述荧光微球结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A；所述硝酸纤维素膜靠近荧光微球结合垫的一端设包被有亲和素的检测线；所述硝酸纤维素膜靠近吸水垫的一端设包被有羊抗鼠IgG的质控线。作为本专利技术的优选方案，所述时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A均包被在玻璃纤维膜上形成所述荧光微球结合垫。作为本专利技术的优选方案，所述试剂盒包括盒座和盒盖，所述试剂条固定于所述盒座与所述盒盖之间；所述盒盖与所述盒座上设有相配合的卡扣连接部件。作为本专利技术的优选方案，所述盒盖上设有加样孔和结果显示窗口；所述加样孔贯穿所述盒盖并对应于试剂条的样品垫区域；所述结果显示窗口贯穿所述盒盖并对应于试剂条的检测线和质控线区域。此外，本专利技术还提供该尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒的制备方法，包含以下步骤：步骤一，制备荧光微球结合垫：取标记好的抗人IgG时间分辨荧光微球100-200uL，标记好的幽门螺杆菌抗原A时间分辨荧光微球100-200uL混合均匀后喷在玻璃纤维膜上，干燥过夜；步骤二，制备硝酸纤维素膜：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，其特征在于，包括位于底板上的试剂条，该试剂条从加样端开始依次为样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫上包被有生物素化幽门螺杆菌抗原B；所述荧光微球结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A；所述硝酸纤维素膜靠近荧光微球结合垫的一端设包被有亲和素的检测线；所述硝酸纤维素膜靠近吸水垫的一端设包被有羊抗鼠IgG的质控线。/n

【技术特征摘要】
1.一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，其特征在于，包括位于底板上的试剂条，该试剂条从加样端开始依次为样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫上包被有生物素化幽门螺杆菌抗原B；所述荧光微球结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A；所述硝酸纤维素膜靠近荧光微球结合垫的一端设包被有亲和素的检测线；所述硝酸纤维素膜靠近吸水垫的一端设包被有羊抗鼠IgG的质控线。


2.如权利要求1所述的一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，其特征在于，所述时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A均包被在玻璃纤维膜上形成所述荧光微球结合垫。


3.如权利要求1或2所述的一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括盒座和盒盖，所述试剂条固定于所述盒座与所述盒盖之间；所述盒盖与所述盒座上设有相配合的卡扣连接部件。


4.如权利要求3所述的一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖上设有加样孔和结果显示窗口；所述加样孔贯穿所述盒盖并对应于试剂条的样品垫区域；所述结果显示窗口贯穿所述盒盖并对应于试剂条的检测线和质控线区域。


5.根据权利要求1-4任一项所述的一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
步骤一，制备荧光微球结合垫：取标记好的抗人IgG时间分辨荧光微球100-200uL，标记好的幽门螺杆菌抗原A时间分辨荧光微球100-200uL混合均匀喷在玻璃纤维膜上，干燥过夜；
步骤二，制备硝酸纤维素膜：在检测线包被1-2mg/mL的亲和素，在质控线包被1-2mg/mL的羊抗鼠IgG，干燥过夜；
步骤三，制备样品垫：将生物素化的幽门螺杆菌抗原B加入至样品垫处理液中，混合均匀后，涂布在玻璃纤维表面，干燥过夜；
步骤四，制备试剂条：在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫一端压住荧光微球结合垫一端0.5～1mm，荧光微球结合垫另一端压住硝酸纤维素膜一端0.5～1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤...

【专利技术属性】
技术研发人员：郜恒骏，金杰，张小燕，李晶，
申请(专利权)人：上海芯超生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31