一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，该试剂盒包括表达S1蛋白的LMH细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。本发明专利技术试剂盒具有良好的特异性；该试剂盒不仅能用于QX型鸡传染性支气管病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群QX型鸡传染性支气管病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。

【技术实现步骤摘要】
一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒
本专利技术涉及一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，属于生物技术检测领域。
技术介绍
传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)属于冠状病毒科Coronaviridae)，冠状病毒属,根据临床可分为呼吸型、生殖道型、肾型、肠型、腺胃型和变异型等。该病以咳嗽、气管啰音和打喷嚏为主要特征，是对我国养鸡业危害最为严重的病毒性传染病之一，该病几乎在世界范围内所有的养鸡国家存在，在我国的流行呈上升趋势。IBV血清型众多，变异迅速，IBV不同毒株间自然重组可以产生新的毒株，进而导致新的基因型或血清型的出现。流行病学表明，近年来我国依然以QX型IBV或与QX型IBV的重组毒占主流。然目前尚无针对QX型IBV血清学抗体检测的快速方法及其试剂盒。因此开发一种高效、准确的针对QX型IBV血清学检测方法尤为重要。S蛋白位于病毒粒子最表层的囊膜上，主要是构成病毒纤突。S蛋白同时包含有S1和S2两个亚基，都属于糖蛋白，介导病毒感染敏感细胞。S1亚基高度变异，而且主要形成S蛋白的外功能区及形成其外部球状结构，在介导病毒感染细胞中具有重要作用。因此，本专利技术克隆表达QX型IBV的S1，并利用表达S1蛋白检测针对QX型IBV的抗体对QX型IBV的流行病学检测，为临床上疫苗使用提供指导性意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，本专利技术的原理和最核心的关键技术是构建了QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因真核表达质粒，并将转染该质粒的表达S1蛋白的LMH细胞作为抗原建立试剂盒，检测QX型鸡传染性支气管病毒特异性抗体。本专利技术的目的是这样实现的，一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括表达S1蛋白的LMH细胞、FITC标记的羊抗鸡抗体、样品稀释液、洗涤液；所述表达S1蛋白的LMH细胞，是转染S1蛋白真核表达质粒的表达QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白的LMH细胞；所述表达S1蛋白的LMH细胞，通过下述步骤得到：(1)、QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白真核表达质粒构建：以pcDNA3.1真核表达载体以及QX型鸡传染性支气管病毒的RNA反转录的cDNA为模板，以SEQIDNO.1-2的序列为引物PCR扩增出线性化pcDNA3.1载体，以SEQIDNO.3、SEQIDNO.4的序列为引物PCR扩增出QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因SEQIDNo.5；随后利用重组酶ExnaseTMII将线性化的pcDNA3.1载体以及QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因的PCR产物进行快速体外重组克隆，重组克隆经序列验证后，命名为pcDNA3.1-IBV-34-S1；并用IFA验证S1蛋白在LMH细胞中的表达；其中：SEQIDNO.1为：上游引物：GAATTCTGCAGATATCCAGCACAGTG；SEQIDNO.2为：下游引物：GCTCGGTACCAAGCTTAAGTTTAAACG；SEQIDNO.3为：上游引物：AGCTTGGTACCGAATGTTGGGGAAGTCACTGT；SEQIDNO.4为：下游引物：ATATCTGCAGAATTTAACGATGTGAGCTATTGG；SEQIDNO.5为：ATGTTGGGGAAGTCACTGTTTTTAGTGACCATTTTGTGTGCACTATGTAGTGCAAATTTGTTTGATTTTGCCAATAATTATGTGTACTACTACCAAAGTGCCTTTAGGCCTCCTACTGGATGGCATCTGCAAGGGGGTGCTTATGCAGTAGTGAATTCTACTAATTACACTAGTAATGCTGGTTCTGCAAGTGGGTGCACTGTTGGTGTTATTAAGGACGTTTATAATCAAAGTGCGGCTTCTATAGCTATGACAGCACCTCCTCAGGGTATGGCTTGGTCTAAGTCACAATTTTGTAGTGCACACTGTAACTTTTCTGAAATTACAGTTTTTGTCACACATTGTTATAGTAGTGGTACAGGGTCTTGTCCTCTAACAGGCCTGATTGCACGTGATCATATTCGTATTTCAGCAATGAAAAATGGTTCTTTATTTTATAATTTAACAGTTAGCGTATCTAAATACCCTAGATTTAAGTCTTTTCAATGTGTTAACAACTTCACATCTGTTTATTTAAATGGTGATCTTGTTTTTACTTCTAATAAAACTACTGATGTTACGTCAGCAGGTGTGTATTTTAAAGCAGGTGGACCTGTAAACTATAGTGTTATGAAAGAATTTAAGGTTCTTGCTTACTTTGTTAATGGTACAGCACCAGATGTAATTTTGTGTGACAATTCCCCTAAGGGTTTGCTAGCCTGTCAATATAATACTGGCAATTTTTCAGACGGCTTTTATCCTTTTACTAATAGTACTTTAGTTAGGGACAAGTTCATTGTCTATCGTGAAAGTAGTGTTAATACTACTTTGACGTTAACTAATTTCACTTTTACTAATGTAAGTACTGCACAGCCTAATAGTGGTGGTGTTAGTACTTTTCATCTATATCAAACACAAACAGCTCAGAGTGGTTATTATAATTTTAATTTGTCATTTCTGAGTCAGTTTGTGTATAAGGCAAGTGATTTTATGTATGGGTCTTATCATCCTAGGTGTTCTTTTAAACCAGAAACCATTAATAGTGGTTTATGGTTTAATTCTTTGTCAGTTTCTCTTACTTATGGACCCCTACAGGGAGGGTGTAAGCAATCTGTTTTTAGTGGTAAGGCAACGTGTTGTTATGCCTACTCTTATAATGGCCCTAGGGCATGTAAAGGTGTTTATTCAGGTGAATTAAGCAAGACTTTTGAATGTGGATTGCTGGTTTATGTTACTAAGAGTGATGGCTCTCGTATACAGACTAGAACAGAGCCCTTAGTATTAACGCAACACAATTATAATAATATTACTTTAGATAAGTGTGTTGACTATAATATATATGGCAGAGTAGGCCAAGGTTTTATTACTAATGTGACTGATTCTGCTGCTAATTCTAGTTATTTAGCAGATGGTGGGTTAGCTATTTTAGATACTTCGGGTGCCATAGATGTCTTTGTTGTACAGGGCAGCTATGGTCTTAATTATTACA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括表达S1蛋白的LMH细胞、FITC标记的羊抗鸡抗体、样品稀释液、洗涤液；/n所述表达S1蛋白的LMH细胞，是转染S1蛋白真核表达质粒的表达QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白的LMH细胞；所述表达S1蛋白的LMH细胞，通过下述步骤得到：/n（1）、QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白真核表达质粒构建：以pcDNA3.1真核表达载体以及QX型鸡传染性支气管病毒的RNA反转录的cDNA为模板，以SEQIDNO.1、SEQIDNO.2的序列为引物PCR扩增出线性化pcDNA3.1载体，以SEQIDNO.3、SEQIDNO.4的序列为引物PCR扩增出QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因SEQIDNo.5；随后利用重组酶Exnase TMII将线性化的pcDNA3.1载体以及QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因的PCR产物进行快速体外重组克隆，重组克隆经序列验证后，命名为pcDNA3.1-IBV-S1；并用IFA验证S1蛋白在LMH细胞中的表达；/n其中：/nSEQ ID NO.1为：/n上游引物：GAATTCTGCAGATATCCAGCACAGTG；/nSEQ ID NO.2为：/n下游引物：GCTCGGTACCAAGCTTAAGTTTAAACG；/nSEQ ID NO.3为：/n上游引物：AGCTTGGTACCGAATGTTGGGGAAGTCACTGT；/nSEQ ID NO.4为：/n下游引物：ATATCTGCAGAATTTAACGATGTGAGCTATTGG；/nSEQ ID NO.5为：/nATGTTGGGGAAGTCACTGTTTTTAGTGACCATTTTGTGTGCACTATGTAGTGCAAATTTGTTTGATTTTGCCAATAATTATGTGTACTACTACCAAAGTGCCTTTAGGCCTCCTACTGGATGGCATCTGCAAGGGGGTGCTTATGCAGTAGTGAATTCTACTAATTACACTAGTAATGCTGGTTCTGCAAGTGGGTGCACTGTTGGTGTTATTAAGGACGTTTATAATCAAAGTGCGGCTTCTATAGCTATGACAGCACCTCCTCAGGGTATGGCTTGGTCTAAGTCACAATTTTGTAGTGCACACTGTAACTTTTCTGAAATTACAGTTTTTGTCACACATTGTTATAGTAGTGGTACAGGGTCTTGTCCTCTAACAGGCCTGATTGCACGTGATCATATTCGTATTTCAGCAATGAAAAATGGTTCTTTATTTTATAATTTAACAGTTAGCGTATCTAAATACCCTAGATTTAAGTCTTTTCAATGTGTTAACAACTTCACATCTGTTTATTTAAATGGTGATCTTGTTTTTACTTCTAATAAAACTACTGATGTTACGTCAGCAGGTGTGTATTTTAAAGCAGGTGGACCTGTAAACTATAGTGTTATGAAAGAATTTAAGGTTCTTGCTTACTTTGTTAATGGTACAGCACCAGATGTAATTTTGTGTGACAATTCCCCTAAGGGTTTGCTAGCCTGTCAATATAATACTGGCAATTTTTCAGACGGCTTTTATCCTTTTACTAATAGTACTTTAGTTAGGGACAAGTTCATTGTCTATCGTGAAAGTAGTGTTAATACTACTTTGACGTTAACTAATTTCACTTTTACTAATGTAAGTACTGCACAGCCTAATAGTGGTGGTGTTAGTACTTTTCATCTATATCAAACACAAACAGCTCAGAGTGGTTATTATAATTTTAATTTGTCATTTCTGAGTCAGTTTGTGTATAAGGCAAGTGATTTTATGTATGGGTCTTATCATCCTAGGTGTTCTTTTAAACCAGAAACCATTAATAGTGGTTTATGGTTTAATTCTTTGTCAGTTTCTCTTACTTATGGACCCCTACAGGGAGGGTGTAAGCAATCTGTTTTTAGTGGTAAGGCAACGTGTTGTTATGCCTACTCTTATAATGGCCCTAGGGCATGTAAAGGTGTTTATTCAGGTGAATTAAGCAAGACTTTTGAATGTGGATTGCTGGTTTATGTTACTAAGAGTGATGGCTCTCGTATACAGACTAGAACAGAGCCCTTAGTATTAACGCAACACAATTATAATAATATTACTTTAGATAAGT...

【技术特征摘要】
1.一种基于S1蛋白的检测流行QX型鸡传染性支气管病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括表达S1蛋白的LMH细胞、FITC标记的羊抗鸡抗体、样品稀释液、洗涤液；
所述表达S1蛋白的LMH细胞，是转染S1蛋白真核表达质粒的表达QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白的LMH细胞；所述表达S1蛋白的LMH细胞，通过下述步骤得到：
（1）、QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白真核表达质粒构建：以pcDNA3.1真核表达载体以及QX型鸡传染性支气管病毒的RNA反转录的cDNA为模板，以SEQIDNO.1、SEQIDNO.2的序列为引物PCR扩增出线性化pcDNA3.1载体，以SEQIDNO.3、SEQIDNO.4的序列为引物PCR扩增出QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因SEQIDNo.5；随后利用重组酶ExnaseTMII将线性化的pcDNA3.1载体以及QX型鸡传染性支气管病毒S1蛋白基因的PCR产物进行快速体外重组克隆，重组克隆经序列验证后，命名为pcDNA3.1-IBV-S1；并用IFA验证S1蛋白在LMH细胞中的表达；
其中：
SEQIDNO.1为：
上游引物：GAATTCTGCAGATATCCAGCACAGTG；
SEQIDNO.2为：
下游引物：GCTCGGTACCAAGCTTAAGTTTAAACG；
SEQIDNO.3为：
上游引物：AGCTTGGTACCGAATGTTGGGGAAGTCACTGT；
SEQIDNO.4为：
下游引物：ATATCTGCAGAATTTAACGATGTGAGCTATTGG；
SEQIDNO.5为：
ATGTTGGGGAAGTCACTGTTTTTAGTGACCATTTTGTGTGCACTATGTAGTGCAAATTTGTTTGATTTTGCCAATAATTATGTGTACTACTACCAAAGTGCCTTTAGGCCTCCTACTGGATGGCATCTGCAAGGGGGTGCTTATGCAGTAGTGAATTCTACTAATTACACTAGTAATGCTGGTTCTGCAAGTGGGTGCACTGTTGGTGTTATTAAGGACGTTTATAATCAAAGTGCGGCTTCTATAGCTATGACAGCACCTCCTCAGGGTATGGCTTGGTCTAAGTCACAATTTTGTAGTGCACACTGTAACTTTTCTGAAATTACAGTTTTTGTCACACATTGTTATAGTAGTGGTACAGGGTCTTGTCCTCTAACAGGCCTGATTGCACGTGATCATATTCGTATTTCAGCAATGAAAAATGGTTCTTTATTTTATAATTTAACAGTTAGCGTATCTAAATACCCTAGATTTAAGTCTTTTCAATGTGTTAACAACTTCACATCTGTTTATTTAAATGGTGATCTTGTTTTTACTTCTAATAAAACTACTGATGTTACGTCAGCAGGTGTGTATTTTAAAGCAGGTGGACCTGTAAACTATAGTGTTATGAAAGAATTTAAGGTTCTTGCTTACTTTGTTAATGGTACAGCACCAGATGTAATTTTGTGTGACAATTCCCCTAAGGGTTTGCTAGCCTGTCAATATAATACTGGCAATTTTTCAGACGGCTTTTATCCTTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶建强，路浩，尹朝憬，武佳妍，谢菁，张建军，邵红霞，秦爱建，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32