一种高效液相色谱法测定美沙拉秦有关物质的方法技术

本发明专利技术一种高效液相色谱法测定美沙拉秦有关物质的方法，所述色谱条件如下：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂(Gemimi C

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法测定美沙拉秦有关物质的方法
本专利技术涉及有关物质的高效液相检测方法，具体涉及美沙拉秦有关物质的检测方法，属于医药

技术介绍
美沙拉秦为非甾体抗炎药物，用于溃疡性结肠炎、克罗恩病(节段性回肠炎)急性发作期的治疗。考虑其肠溶片携带、使用方便，我国药企参考德国Dr.FalkPharmaGmbH(德国霍克大药厂)进口的美沙拉秦肠溶片—商品名为莎尔福(Salofalk)开发了美沙拉秦肠溶片。美沙拉秦作为一种合成药物，其原料药合成过程中，易产生一系列工艺杂质以及降解杂质，为有效将各杂质检测出来，故展开有关物质检测。我国要求必检的杂质如下表：杂质代号杂质名称杂质A对氨基酚杂质B3-氨基酚杂质C2-氨基酚杂质D3-氨基苯甲酸杂质K苯胺杂质F3-氨基水杨酸杂质E4-氨基水杨酸杂质G2，5-二羟基苯甲酸杂质L2-氯苯甲酸杂质H水杨酸杂质N5-硝基水杨酸因现执行的美沙拉秦原料药内控标准存在以下缺陷：(1)洗脱能力：不能将杂质H有效洗脱出来；(2)分离能力：美沙拉秦、杂质A、杂质F间的分离度达不到要求；杂质D与杂质K间的分离度达不到要求；(3)峰型情况：杂质A、B、C、D、E、F、G的峰形较差(对称因子均较小)，峰易产生分裂。
技术实现思路
本专利技术提供一种美沙拉秦肠溶片的有关物质检测方法，通过改变色谱条件来进行方法摸索，将各项有关物质有效分离，并且控制空白溶剂不干扰有关杂质测定。为了实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案。一种美沙拉秦杂质的检测方法，采用高效液相色谱法测定杂质。采用C18为柱填充剂，用有机相和缓冲盐溶液按照一定的比例配制成流动相，采用梯度洗脱的方式进行洗脱。柱温选择为35℃，流动相流速为1.1ml/min，检测波长为230nm，进样体积为10μl。本专利技术所述缓冲盐溶液为磷酸盐缓冲液，流动相采用流动相A与流动相B梯度洗脱。流动相A的配制为磷酸盐缓冲液-TABH溶液-甲醇-水(250:50:260:440)；流动相B的配制为磷酸盐缓冲液-TABH溶液-甲醇-水(250:50:500:200)。磷酸盐缓冲液配制为取磷酸氢二钾4.35g，加水溶解至1000ml，用磷酸调节pH值至7.2。TABH溶液配制为取10％四丁基氢氧化铵水溶液80ml，加水稀释至200ml，用硫酸溶液(1→2)调节pH值至7.5。梯度洗脱方式如下：其中待测美沙拉嗪为原料药或制剂粉末。所述测定样品配制方法为将美沙拉嗪原料药或美沙拉嗪制剂研成的细粉用流动相超声溶解。测定溶液中美沙拉嗪的浓度为0.4mg/ml。本次专利技术提供了一种高效液相色谱法测定美沙拉秦肠溶片有关物质的方法。此方法通过优化高效液相色谱条件，使得各相邻杂质间得到有效分离，并且控制空白溶剂不干扰有关杂质测定。本专利技术的有关物质的测定条件进行了方法学验证，分离度、检测灵敏度均符合要求。本专利技术检测方法保证药物质量的可控性，从而确保用药安全。附图说明图1为美沙拉秦原料药EP的有关物质HPLC色谱图，图2为美沙拉秦延释片USP34的有关物质HPLC色谱图，图3为美沙拉秦肠溶片国家标准YBH03582010黑龙江天宏药业有限公司提出的有关物质HPLC色谱图，图4为美沙拉秦原料药USP34的有关物质HPLC色谱图，图5为美沙拉秦肠溶片进口标准JX20080236(Dr.FalkPharmaGmbH提出)的有关物质HPLC色谱图，图6为自拟条件(等度)的有关物质HPLC色谱图，图7为自拟条件(梯度)的有关物质HPLC色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明。下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。条件1：美沙拉秦原料药EP(有关物质系统1)采用色谱柱为C8柱(250×4.6nm，5μm)，采用梯度洗脱方式：流动相A(取2.2g高氯酸和1.0g磷酸，加水稀释至1000ml)；流动相B(取1.7g高氯酸和1.0g磷酸，加乙腈稀释至1000ml)，检测波长为220nm，流速为1.25ml/min，进样体积为10μl。梯度洗脱方式如下：美沙拉秦定位溶液：取美沙拉秦5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理10min使溶解，加50％甲醇稀释至刻度，即得。另取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质L、杂质N各5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理10min使溶解，加50％甲醇稀释至刻度，分别作为以上杂质定位溶液。其中杂质A、杂质C、定位溶液应临用新制。杂质K：取杂质适量，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，即得。混合溶液：分别取上述溶液各1ml置同一25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合溶液(临用新制)。为考察本品色谱条件能否将各杂质有效洗脱出来，主峰与杂质、各杂质峰间能否有效分离，空白梯度峰是否干扰杂质测定。取流动相A、美沙拉秦定位溶液及各杂质定位溶液、混合溶液各10μl，分别进样，记录色谱图。上述溶液进样的HPLC图谱见图1，色谱条件筛选结果见表1。表1为美沙拉秦原料药EP的有关物质HPLC色谱图筛选结果采用本色谱条件，美沙拉秦与杂质C不能有效分离，杂质D和杂质K不能有效分离，本条件不适合检测。且实验过程中发现杂质A溶液放置过程中逐渐变红，故杂质A的50％甲醇溶液不稳定。故杂质A、混合溶液需临用新制。条件2：美沙拉秦延释片USP34的检测条件采用色谱柱为C18柱(4.6mm×3.3cm×3μm)，流动相(取辛烷磺酸钠4.3g加水1L使溶解，用磷酸调节pH值至2.15，脱气，滤过，即得)，检测波长为230nm，流速为2ml/min，进样体积为20μl，柱温为30±2℃，溶剂为甲醇-0.1mol/L盐酸溶液(3:7)。美沙拉秦定位溶液：取美沙拉秦5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，加溶剂稀释至刻度，即得。另取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质L、杂质N各5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂适量，超声处理10min使溶解，加溶剂稀释至刻度，分别作为以上杂质定位溶液。其中杂质A定位溶液应临用新制。杂质K：取杂质适量，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，即得。混合溶液：分别取上述各物质各4mg，置同一1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测美沙拉嗪特定杂质的方法，其特征在于采用高效液相色谱法检测，色谱条件如下：/n色谱柱：C

【技术特征摘要】
1.一种检测美沙拉嗪特定杂质的方法，其特征在于采用高效液相色谱法检测，色谱条件如下：
色谱柱：C18；
流动相A：体积比磷酸盐缓冲液-TABH溶液-甲醇-水混合溶液＝250:50:260:440，
流动相B：体积比磷酸盐缓冲液-TABH溶液-甲醇-水混合溶液＝250:50:500:200，
洗脱方式：梯度洗脱，流程如下：



流速：1.1ml/min；
柱温：35℃；
检测波长：230nm；
进样体积：10μl
检测器：紫外检测器。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钾缓冲液溶液，用磷酸调pH7.2。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述所述磷酸盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓金明，吴海英，
申请(专利权)人：浙江爱生药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33