一种猪口服接种疫苗缓释佐剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种猪口服接种疫苗缓释佐剂及其制备方法与应用。所述疫苗缓释佐剂按质量百分数计，由60～80％聚合物和20～40％抗原组成；或者由45～80％聚合物、18～27％抗原和2～28％免疫助剂组成。该疫苗缓释佐剂可经口免疫猪群，经口免疫猪群后，携载抗原到达肠道后才开始逐渐释放抗原，为所包载的抗原提供有效的保护，防止抗原在胃部被分解而失效，实现可控递送抗原，延长在肠道的暴露时间，充分发挥抗原的功效，有效防止抗原在消化道内易被快速酵解和清除的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种猪口服接种疫苗缓释佐剂及其制备方法与应用
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种猪口服接种疫苗缓释佐剂及其制备方法与应用。
技术介绍
近年来抗生素的用量不断大幅增长，主要是由于青霉素、四环素和氯四环素等抗生素作为饲料添加剂被畜牧业大量使用，其主要的目的是为了提高牲畜产量，而非治疗疾病。由于抗生素的过度使用，抗生素耐药性在世界各地频繁发生。畜牧养殖行业面临着同样的问题，对于动物重大传染性疾病的暴发，抗生素预防或口服药物治疗的有效性逐年下降。以养猪业为例，猪只个体一旦出现临床症状，不仅要对表现出症状的猪用药，还需要立即采取口服之外的方式应用大量的抗菌素对整个猪群进行药物治疗。然而，大多菌株对如青霉素、四环素、红霉素等抗菌素产生抗性，可选择的抗菌素越来越少。通过大量使用抗菌素来彻底清除猪群所携带的微生物以控制相应疾病发生的措施并不可取。需要同时对猪群从各种用药途径大剂量给予抗菌素，致病微生物才能得到根除，但这种方法对于生产应用不切实际。另一方面，彻底清除病菌的猪群缺乏相应的免疫力，极易被后来混养的病菌携带猪传染，引发这些洁净猪发病，造成重大经济损失。因此，控制动物疫病的主要途径要靠加强饲养管理，同时及时对猪群进行免疫疫苗接种。口服疫苗具有先天性的优势。灌服免疫是进行大规模疫苗接种时最方便的途径，避免了注射免疫，操作方便，避免了猪只产生应激反应，减少抗生素的使用和药物残留，促进绿色养殖，促进食品安全。然而口服免疫需要疫苗在胃肠道的苛刻条件下是稳定的，另外为了达到免疫效果，疫苗的使用量也大大高于其他免疫途径。因此需要使用疫苗助剂以增加疫苗的稳定性和效率，提高疫苗在肠道内的保留时间，以提高猪群抵抗致病微生物的抵抗能力。
技术实现思路
为解决现有技术的缺点和不足之处，本专利技术的首要目的在于提供一种猪口服接种疫苗缓释佐剂。本专利技术的另一目的在于提供上述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂的制备方法。采用聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶、抗原及免疫助剂混合，制备方法简单。本专利技术的再一目的在于提供上述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂在生物医药领域中的应用。本专利技术目的通过以下技术方案实现：一种猪口服接种疫苗缓释佐剂，按质量百分数计，由60～80％聚合物和20～40％抗原组成；或者由45～80％聚合物、18～27％抗原和2～28％免疫助剂组成；所述各组成的质量百分数之和为100％；所述聚合物为聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶；所述抗原为猪回肠炎活疫苗、猪繁殖与呼吸综合症灭活疫苗、猪支原体肺炎灭活疫苗、猪伪狂犬灭活疫苗、猪口蹄疫灭活疫苗、猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗、猪链球菌双价灭活疫苗和副猪嗜血杆菌病灭活疫苗中的至少一种；所述免疫助剂为革兰氏阴性菌内毒素、磷酸铝、聚肌苷酸和花生油中的至少一种。优选地，所述革兰氏阴性菌内毒素为革兰氏阴性杆菌内毒素，具体为大肠杆菌内毒素、变形杆菌内毒素、痢疾杆菌内毒素、肺炎杆菌内毒素、布氏杆菌内毒素、流感嗜血杆菌内毒素、副流感嗜血杆菌内毒素、百日咳杆菌内毒素和副百日咳杆菌内毒素中的至少一种。优选地，所述猪口服接种疫苗缓释佐剂，按质量百分数计，由76～80％聚合物和20～23％抗原组成。优选地，所述聚2-乙烯基吡啶的分子量为20～63kDa，优选为50～57kDa，最优选为52kDa；所述聚4-乙烯基吡啶的分子量为27～65kDa，优选为60～62kDa，最优选为60kDa。所述分子量均指重均分子量，其中kDa＝1000g/mol。优选地，所述免疫助剂为聚肌苷酸和花生油中的至少一种。上述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂的制备方法，包括以下步骤：将聚合物乙醇溶液、抗原水溶液混合均匀后，或者将聚合物乙醇溶液、抗原水溶液和免疫助剂混合均匀后，在4～40℃下孵育0.5～4小时，去除溶剂，得到猪口服接种疫苗缓释佐剂。优选地，所述聚合物乙醇溶液的浓度为0.01～0.05g/mL，抗原水溶液的浓度为1～2mg/mL。优选地，所述免疫助剂为革兰氏阴性菌内毒素、磷酸铝和聚肌苷酸中的至少一种时，以水溶液形式加入，所述水溶液的浓度为0.05～2g/mL。优选地，所述聚合物乙醇溶液、抗原水溶液和免疫助剂混合均匀的方式为：在搅拌状态下以恒定流速向聚合物乙醇溶液中加入抗原水溶液和免疫助剂，或是以恒定流速向抗原水溶液中加入聚合物乙醇溶液和免疫助剂，所述恒定流速为0.5～5mL/min。优选地，所述混合均匀和孵育可通过微流控技术同时进行，通过微流控技术控制流速，在混合过程中孵育，在微流控芯片上利用微液滴形成技术，连续生产尺寸均一、单分散性好的纳米胶束；所述流速为5～50μL/h。优选地，所述聚合物乙醇溶液、抗原水溶液混合均匀和孵育同时进行的方式为：采用具有双进样口蛇形通道的微流控芯片作为聚合物、抗原自组装形成纳米胶束的场所，微流控系统控制聚合物乙醇溶液、抗原水溶液的流速，连续生产尺寸均一、单分散的纳米胶束。优选地，所述聚合物乙醇溶液、抗原水溶液和免疫助剂混合均匀和孵育同时进行的方式为：采用具有三进样口蛇形通道的微流控芯片作为聚合物、抗原和免疫助剂自组装形成纳米胶束的场所，微流控系统控制聚合物乙醇溶液、抗原水溶液和免疫助剂的流速，连续生产尺寸均一、单分散的纳米胶束。优选地，所述孵育的温度为25℃，时间为3h。优选地，所述去除溶剂指去除乙醇和水，由于制得的猪口服接种疫苗缓释佐剂可分散在水中，因此可不用全部去除水；所述去除溶剂的方法为：将产物混合液经0.45μm滤膜过滤，收集滤液，通过高效液相层析纯化并收集纳米胶束，-40～5℃冷冻干燥6～24小时，即得猪口服接种疫苗缓释佐剂。优选地，所述猪口服接种疫苗缓释佐剂可以干粉形态保存，也可以保存于水中，即分散在水中进行保存。上述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂在生物医药领域中的应用。所述应用为：在药物制备中的应用，优选为在制备猪口服接种疫苗药物中的应用。本专利技术的技术原理是：所述聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶本身不溶于水，但在水溶液中，在抗原及免疫助剂的存在下，聚集形成约55nm的纳米胶束，并在形成胶束的过程中将抗原及免疫助剂负载在聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶纳米胶束上。当该疫苗缓释佐剂经口给予猪群后，迅速经过食管进入胃部酸性环境，聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶疫苗缓释佐剂维持纳米胶束形态；当该疫苗缓释佐剂进入小肠的近中性环境时，聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶基疫苗缓释佐剂所形成的纳米胶束逐渐瓦解，抗原被逐渐释放出来，并可持续性地提高肠淋巴细胞M细胞对抗原的摄取、转运，不断地激活T细胞和B细胞，继而激发肠道黏膜免疫应答作用，从而产生强有力的T细胞杀伤效应，诱导细胞因子分泌，产生长效记忆性T细胞反应。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：(1)本专利技术所述猪群口服接种高分子疫苗缓释佐剂的合成工艺简便易行，易于产品工艺质量控制，有利于工业化生产。(2)本专利技术所述疫苗佐剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪口服接种疫苗缓释佐剂，其特征在于，按质量百分数计，由60～80％聚合物和20～40％抗原组成；/n或者由45～80％聚合物、18～27％抗原和2～28％免疫助剂组成；/n所述各组成的质量百分数之和为100％；/n所述聚合物为聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶；/n所述抗原为猪回肠炎活疫苗、猪繁殖与呼吸综合症灭活疫苗、猪支原体肺炎灭活疫苗、猪伪狂犬灭活疫苗、猪口蹄疫灭活疫苗、猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗、猪链球菌双价灭活疫苗和副猪嗜血杆菌病灭活疫苗中的至少一种；/n所述免疫助剂为革兰氏阴性菌内毒素、磷酸铝、聚肌苷酸和花生油中的至少一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪口服接种疫苗缓释佐剂，其特征在于，按质量百分数计，由60～80％聚合物和20～40％抗原组成；
或者由45～80％聚合物、18～27％抗原和2～28％免疫助剂组成；
所述各组成的质量百分数之和为100％；
所述聚合物为聚2-乙烯基吡啶或聚4-乙烯基吡啶；
所述抗原为猪回肠炎活疫苗、猪繁殖与呼吸综合症灭活疫苗、猪支原体肺炎灭活疫苗、猪伪狂犬灭活疫苗、猪口蹄疫灭活疫苗、猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗、猪链球菌双价灭活疫苗和副猪嗜血杆菌病灭活疫苗中的至少一种；
所述免疫助剂为革兰氏阴性菌内毒素、磷酸铝、聚肌苷酸和花生油中的至少一种。


2.根据权利要求1所述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂，其特征在于，所述聚2-乙烯基吡啶的分子量为20～63kDa，或者为50～57kDa；所述聚4-乙烯基吡啶的分子量为27～65kDa，或者为60～62kDa。


3.根据权利要求1所述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂，其特征在于，所述猪口服接种疫苗缓释佐剂，按质量百分数计，由76～80％聚合物和20～23％抗原组成；
所述革兰氏阴性菌内毒素为大肠杆菌内毒素、变形杆菌内毒素、痢疾杆菌内毒素、肺炎杆菌内毒素、布氏杆菌内毒素、流感嗜血杆菌内毒素、副流感嗜血杆菌内毒素、百日咳杆菌内毒素和副百日咳杆菌内毒素中的至少一种；
所述免疫助剂为聚肌苷酸和花生油乳化佐剂中的至少一种。


4.权利要求1～3任一项所述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将聚合物乙醇溶液、抗原水溶液混合均匀后，或者将聚合物乙醇溶液、抗原水溶液和免疫助剂混合均匀后，在4～40℃下孵育0.5～4小时，去除溶剂，得到猪口服接种疫苗缓释佐剂。


5.根据权利要求4所述一种猪口服接种疫苗缓释佐剂的制备方法，其特征在于，所述聚合物乙醇溶液的浓度为0.01～0.05g/mL，抗原水溶液的浓度为1～2mg/mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坤，殷盼超，张明鑫，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44