一种冬虫夏草的成分分析方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种冬虫夏草的成分分析方法及应用，包括以下步骤：S1、待测样品制备：取冬虫夏草干品，将整个虫体进行包埋冷冻制片得到待测样品；S2、质谱分析：利用TOF‑SIMS对待测样品的化学成分进行全成分原位分析与成像。采用本发明专利技术方法，可实现冬虫夏草虫体中的氨基酸类、单糖类、核苷类、甾醇类、鞘脂类、磷脂类、甘油酯类、脂肪酸类、有机酸类、酚类等十几种主要类别化学成分的鉴定(可实现106个化合物的鉴定)。

【技术实现步骤摘要】
一种冬虫夏草的成分分析方法与应用
本专利技术涉及中药
，具体涉及一种冬虫夏草的成分分析方法与应用。
技术介绍
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌侵染蝙蝠蛾科昆虫幼虫而形成的幼虫尸体与真菌子座的干燥复合体。始载于公元8世纪的《月王药诊》，具有治疗肺部疾病的功效。冬虫夏草的主要化学成分包括氨基酸、核苷类、甾醇类、多糖类和甘露醇等。现代医学研究表明，冬虫夏草具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和保护肝肾等广泛的药理作用。随着人类对冬虫夏草野生资源的过度采挖，野生冬虫夏草资源越来越少，市场价格越来越高。近些年，于室内以冬虫夏草菌感染蝙蝠蛾幼虫已成功地繁育了冬虫夏草，以满足冬虫夏草巨大的市场需求。在产品质量上，冬虫夏草繁育品是否完全等同于野生品？二者在化学成分上又有哪些异同？如何选择繁育品冬虫夏草的采收期？为了研究这些科学问题，中国学者已采用多种分析技术和方法对冬虫夏草繁育品和野生品的化学成分进行了分析和比较研究。然而，仍未取得理想的效果。基于此，开发一种能够实现冬虫夏草全成分分析的方法，对于冬虫夏草质量控制具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种冬虫夏草的成分分析方法，能够实现冬虫夏草的全成分分析，对实现冬虫夏草质量控制具有重要意义。本专利技术还提出一种具有上述方法的应用。根据本专利技术的第一方面实施方式的冬虫夏草的成分分析方法，包括以下步骤：S1、待测样品制备：取冬虫夏草干品，将整个虫体进行包埋冷冻制片得到待测样品；S2、质谱分析：利用二次离子飞行时间质谱仪(TOF-SIMS)对待测样品的化学成分进行全成分原位分析与成像。根据本专利技术的一些实施方式，所述包埋冷冻制片处理包括包埋操作、冷冻处理操作和切片操作。根据本专利技术的一些实施方式，所述包埋操作为双层包埋；优选地，所述双层包埋包括以下步骤：S01、对冬虫夏草干品虫体软化处理后，将虫体完整浸入基质中，实现虫体表面基质包裹；S02、待基质凝固后，浸入OCT冷冻包埋剂中并进行冷冻处理，即得。根据本专利技术的一些实施方式，所述基质选自明胶溶液或羧甲基纤维素(CMC)溶液。根据本专利技术的一些实施方式，所述明胶溶液中明胶的质量百分数为5～15％；优选为10％。根据本专利技术的一些实施方式，所述羧甲基纤维素溶液中羧甲基纤维素的质量百分数为2％～5％；优选为4％。根据本专利技术的一些实施方式，所述OCT冷冻包埋剂的用量以完全覆盖所述虫体为宜。根据本专利技术的一些实施方式，所述冷冻处理为将浸入OCT冷冻包埋剂中的虫体置于容器中，再将容器置于冷冻剂中；优选地，所述冷冻剂选自液氮、异戊烷、戊烷或正己烷的至少一种。根据本专利技术的一些实施方式，所述冷冻处理的时间为1～3min；优选为2min。根据本专利技术的一些实施方式，所述切片操作具体为将包埋后的样品，置于-15～-25℃下平衡20～40min后，再在-15～-25℃下进行切片；优选地，平衡温度为-20℃，平衡时间为30min；切片温度-20℃。根据本专利技术的一些实施方式，所述切片的厚度为5～20μM；优选为10μM。根据本专利技术的一些实施方式，所述质谱检测过程中使用的参数包括：模式：聚束模式(Bunchedmode)初级离子：选自Bi1+、Bi3+或Bi3++能量：20～35keV束流：0.3～1pA，采集面积为100×100μm2～50×25mm2；采集图像像素范围为32×32pixel2～1024×1024pixel2横向分辨率约3～8μm次级离子种类：正离子和负离子，测量次级离子的质量范围为0～2058amu。根据本专利技术的一些实施方式，质谱测试过程中重复次数至少为3次。根据本专利技术实施方式的分析方法，至少具有如下有益效果：采用本专利技术方法，可实现冬虫夏草虫体中的氨基酸类、单糖类、核苷类、甾醇类、鞘脂类、磷脂类、甘油酯类、脂肪酸类、有机酸类、酚类等十几种主要类别化学成分的鉴定(可实现106个化合物的鉴定)。与现有冬虫夏草化学成分的分析方法相比，本专利技术方法的优势在于：1)无需采用溶剂或水对冬虫夏草进行提取，避免提取过程造成成分损失等；2)既可实现对冬虫夏草虫体的化学成分直接进行原位、全成分分析，也可对冬虫夏草虫体中的任一成分或某类成分或全成分进行直观的化学成像；3)通过化学成像判别不同冬虫夏草个体的化学成分在含量上的相对差异，在冬虫夏草繁育品和野生品的全成分质量控制及指导冬虫夏草繁育品采收期的选择等领域中具有良好的应用前景。根据本专利技术的第二方面实施方式的应用，上述方法在冬虫夏草全成分质量控制或冬虫夏草繁育品采收期选择指导中的应用。根据本专利技术实施方式的应用，至少具有如下有益效果：本专利技术方法具有良好的应用前景。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1为本专利技术实施例中制得的TOF-SIMS分析的冬虫夏草虫体的纵切样品的实物图；图2为本专利技术实施例测得的冬虫夏草虫体的TOF-SIMS分析质谱图((A)正模式；(B)负模式)；图3为本专利技术实施例测定的繁育品和野生品冬虫夏草中磷脂类(A)、甘油单酯类(B)和甘油二酯类(C)成分的非参数统计分析结果图(*p<0.05,***p<0.001)；图4为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分氨基酸类化学成分的质谱成像图；图5为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分单糖类化学成分的质谱成像图；图6为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分核苷类化学成分的质谱成像图；图7为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分鞘氨醇类化学成分的质谱成像图；图8为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分脂肪类化学成分的质谱成像图；图9为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分甾醇类化学成分的质谱成像图；图10为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分有机酸类化学成分的质谱成像图；图11为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分甘油二酯类化学成分的质谱成像图；图12为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分甘油单酯类化学成分的质谱成像图；图13为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分磷脂类化学成分的质谱成像图；图14为本专利技术实施例测得的繁育品和野生品冬虫夏草中部分腺苷类化学成分的质谱成像图。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。本专利技术的实施例一为：一种冬虫夏草的成分分析方法，包括以下步骤：1.待测样品制备取冬本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：包括以下步骤：/nS1、待测样品制备：取冬虫夏草干品，将整个虫体进行包埋冷冻制片得到待测样品；/nS2、质谱分析：利用TOF-SIMS对待测样品的化学成分进行全成分原位分析与成像。/n

【技术特征摘要】
1.一种冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、待测样品制备：取冬虫夏草干品，将整个虫体进行包埋冷冻制片得到待测样品；
S2、质谱分析：利用TOF-SIMS对待测样品的化学成分进行全成分原位分析与成像。


2.根据权利要求1所述的冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：所述包埋冷冻制片处理包括包埋操作、冷冻处理操作和切片操作。


3.根据权利要求2所述的冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：所述包埋操作为双层包埋。


4.根据权利要求3所述的冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：所述双层包埋包括以下步骤：
S01、对冬虫夏草干品虫体软化处理后，将虫体完整浸入基质中，实现虫体表面基质包裹；
S02、待基质凝固后，浸入OCT冷冻包埋剂中并进行冷冻处理，即得。


5.根据权利要求3所述的冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：所述基质选自明胶溶液或羧甲基纤维素溶液。


6.根据权利要求5所述的冬虫夏草的成分分析方法，其特征在于：所述明胶溶液中明胶的质量百...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜志宏，白丽萍，卢敬光，刘倩宝，杨子峰，钟南山，
申请(专利权)人：澳门科技大学，
类型：发明
国别省市：澳门;82