一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，包括基础培养基和添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾。本发明专利技术提供的一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，在基础培养基中添加醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾，各组分协同作用，在脐带间充质干细胞的诱导培养过程中能有效促进细胞因子的分泌，提高细胞培养液中细胞因子的含量，为脐带间充质干细胞因子产品在美容护肤领域的应用提供保障。本发明专利技术还提供了一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法，采用本发明专利技术的诱导培养基，以传代培养的脐带间充质干细胞为诱导对象，整个过程易于操作，节约成本，便于商业化的生产各种细胞因子产品。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基及培养方法
本专利技术涉及干细胞领域，尤其涉及一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基及培养方法。
技术介绍
间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。间充质干细胞最早在骨髓中发现，因其具有多项分化潜能、造血支持、促进干细胞植入、免疫调节和自我复制等特点而日益受到人们的关注。骨髓间充质干细胞已经在临床上得到广泛应用，目前研究表明脐带来源的间充质干细胞也将有更大的应用潜能。人脐带间充质干细胞，表达多种干细胞的特有标志，具有分化潜力大，增殖能力强，免疫原性低，取材方便，无道德伦理问题限制，易于工业化制备等特征。人脐带间充质干细胞培养上清液含有大量的细胞生长因子，如表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、角质细胞生长因子(KGF)、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)等，细胞因子对促进成纤维细胞的代谢和胶原蛋白的形成发挥着重要的作用，能够有效的促进皮肤细胞的新陈代谢，促进表皮细胞的生长、分化和修复。细胞因子的获取方法为将脐带间充质干细胞经培养后直接使用脐带间充质干细胞培养液，可以减少在反复操作过程中，有效成分的流失，但是脐带间充质干细胞的体外扩增是在补充有胎牛血清或补充有人的自体血清或基本等同相似的血清的培养基中进行。牛血清、人血清或其它动物血清可能含有血液传播的病原体，牛血清还会激发抗异性生物质蛋白抗体的产生，异型生物质蛋白可激发受体患者的免疫应答，增加了细胞因子产品的安全隐患，并且由于培养液中细胞因子的含量较低，为实现相应的效果，往往需要进行大量的细胞培养，该过程费时费力，因此有必要对培养基进行改进，以诱导脐带间充质干细胞分泌更多的细胞因子，降低生产成本，提高细胞因子产品的安全性。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，有效促进脐带间充质干细胞分泌细胞因子，提高细胞培养液中细胞因子的含量。本专利技术的目的之二在于提供一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法。本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，包括基础培养基和添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾。进一步地，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚45.3-50.5μg/mL、葡甲胺78.5-90.0ng/mL、右旋糖苷23.8-28.2μg/mL、甘草酸二钾1-5mg/mL。进一步地，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚47.5μg/mL、葡甲胺84.5ng/mL、右旋糖苷25.8μg/mL、甘草酸二钾3mg/mL。进一步地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。进一步地，所述基础培养基中DMEM和F12的体积比为1:1。本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法，包括以下步骤：取传代培养的脐带间充质干细胞接种于上述的培养基中进行诱导培养。进一步地，所述培养基中脐带间充质干细胞的接种密度为1-2×105个/mL。进一步地，诱导培养过程在37℃，5％CO2的条件下进行。进一步地，所述脐带间充质干细胞为传代培养至P3-P5代的细胞。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术提供一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，在基础培养基中添加醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾，各组分协同作用，在脐带间充质干细胞的诱导培养过程中能有效促进细胞因子的分泌，提高细胞培养液中细胞因子的含量，为脐带间充质干细胞因子产品在美容护肤领域的应用提供保障。2、本专利技术还提供了一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法，采用本专利技术的诱导培养基，以传代培养的脐带间充质干细胞为诱导对象，整个过程易于操作，节约成本，便于商业化的生产各种细胞因子产品。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。实施例1至3中用于诱导培养的脐带间充质干细胞通过下述方法制备得到：(1)采集健康、足月分娩的人胎儿脐带组织在超净台中剪成1-2cm的小段，用生理盐水充分清洗；(2)将脐带组织的小段剪开，去除静脉血管，只保留羊膜和血管之间的白色结缔组织华通氏胶；(3)将华通氏胶剪成约1-2mm3体积大小的组织块，用生理盐水清洗3次，接种于面积55mm2的无菌培养皿中，加入10mLlonza12-725F培养基，置于37℃，5％CO2中进行培养；(4)细胞贴壁后第二天进行半量换液，弃去未贴壁细胞，每隔3天换液一次，细胞融合度达到80％后去除组织块，用0.25％胰酶消化，将消化后的细胞作为P0代细胞按照1:3的比例进行传代培养。实施例1一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，由基础培养基DMEM/F12(DMEM和F12的体积比为1:1)，添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾组成，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚47.5μg/mL、葡甲胺84.5ng/mL、右旋糖苷25.8μg/mL、甘草酸二钾3mg/mL。一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法，包括以下步骤：取传代培养至P3代的脐带间充质干细胞用PBS清洗后，将细胞接种于T75培养瓶中的上述诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基中，细胞的接种密度为1.5×105个/mL，在37℃，5％CO2的培养箱中进行诱导培养，连续培养3天。实施例2一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，由基础培养基DMEM/F12(DMEM和F12的体积比为1:1)，添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾组成，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚45.3μg/mL、葡甲胺78.5ng/mL、右旋糖苷23.8μg/mL、甘草酸二钾1mg/mL。一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法，包括以下步骤：取传代培养至P4代的脐带间充质干细胞用PBS清洗后，将细胞接种于T75培养瓶中的上述诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基中，细胞的接种密度为1.0×105个/mL，在37℃，5％CO2的培养箱中进行诱导培养，连续培养3天。实施例3一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，由基础培养基DMEM/F12(DMEM和F12的体积比为1:1)，添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾组成，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚50.5μg/mL、葡甲胺90.0ng/mL、右旋糖苷28.2μg/mL、甘草酸二钾5mg/mL。一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养方法，包括以下步骤：取传代培养至P5代的脐带间充质干细胞用PBS清洗后，将细胞接种于T75培养瓶中的上述诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾。/n

【技术特征摘要】
1.一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加在基础培养基中的醋酸棉酚、葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二钾。


2.根据权利要求1所述诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，其特征在于，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚45.3-50.5μg/mL、葡甲胺78.5-90.0ng/mL、右旋糖苷23.8-28.2μg/mL、甘草酸二钾1-5mg/mL。


3.根据权利要求1所述诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，其特征在于，以培养基终浓度计，各组分的用量为：醋酸棉酚47.5μg/mL、葡甲胺84.5ng/mL、右旋糖苷25.8μg/mL、甘草酸二钾3mg/mL。


4.根据权利要求1所述一种诱导脐带间充质干细胞因子分泌的培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏爽，梁杰，
申请(专利权)人：夏爽，
类型：发明
国别省市：山东;37