犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用。所述疫苗包含融合蛋白以及医药学上可接受的载剂，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:2所示序列。本发明专利技术提供的所述疫苗安全性高，免疫原性好，能够在动物体内产生较强的体液免疫，免疫后的动物能够抵御强毒攻毒，并且还可以使用生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，具有质控容易、批次间稳定、生产成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】
犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用
本专利技术涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，属于动物免疫药物

技术介绍
犬腺病毒（CanineAdenovirus，CAV）感染引起的传染性疾病称为犬腺病毒病（CanineAdeno，CA）。CA是对包括犬在内的多种哺乳动物的一种致病性强、感染范围广、高度接触性传染病。CAV常与犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）、犬副流感病毒（CPIV）等混合感染，增加了临床症状的复杂性。根据血凝抑制作用和中和作用的不同，CAV分为犬I型腺病毒（Canineadenovirustypel，CAV-1）和犬II型腺病毒（Canineadenovirustype2，CAV-2）两个血清型。CAV-1能引起以传染性犬肝炎和狐狸脑炎为特征的全身性感染，且能导致眼睛损伤，能感染犬、狐、狼、貉、黑熊、负鼠和臭鼬等动物，临床表现为嗜睡、体重减轻、肠炎、肝炎、肺炎、弥漫性血管内凝血及猝死等。CAV-2的感染与传染性喉气管炎、肠炎都有关，可感染犬、猫和猪等多种哺乳动物，临床表现为持续高热、流鼻涕、眼角出现眼屎、咳嗽、扁桃体炎、肺炎和喉气管炎等。在我国CAV感染十分普遍，其中犬不分品种、年龄和性别均可发生，大大增加了人类感染动物源性疾病的潜在风险。CAV属腺病毒科哺乳动物腺病毒属，为双股线状DNA病毒。CAV-1基因组全长约为31kb左右，CAV-2基因组全长约为32.2kb左右，两者同源性约为70％左右，基因水平仅约有56.6％的相关性。CAV基因组包含E1～E4基因和L1～L5基因，共编码15种多肽，其中占总蛋白量90％以上的最主要的结构性蛋白包括五邻体、六邻体、纤突和核衣壳蛋白。六邻体是CAV的主要抗原蛋白，含有型特异性抗原表位和中和抗原表位，能刺激机体产生中和抗体以及组合型特异性抗体。纤突的远端部分为腺病毒型特异性抗原，纤突的基部为亚群特异性抗原。纤突顶端为一个4nm直径的球形物（又叫knob），这是病毒感染细胞时结合于细胞受体的部分，血凝素也在球部，CAV-1和CAV-2在血凝方面的差别和纤突结构有关，在和红细胞发生凝集时，两者可能使用不同的或不完全相同的RBC表面受体。纤突蛋白和某些非结构蛋白均系糖基化蛋白。另外纤突蛋白可阻断腺病毒大分子合成，抑制毒增殖。疫苗免疫是控制CAV传播的有效措施之一。近几年我国新研制并批准了多个不同毒株生产的CAV相关兽用弱毒活疫苗。其中，CAV-1弱毒苗的使用大大减少了犬传染性肝炎的发病数量，但该疫苗免疫后会引起犬的蓝眼病，并且犬的排泄物中依旧带毒，该弱毒经犬传代后有返强的可能，因此存在一定局限性。而CAV-2弱毒苗虽然能够对CAV-1提供交叉保护，但疫苗中所含毒株均为弱毒株，免疫动物后存在散毒的风险，且免疫后需要一段时间才能产生抗体，不能快速建立对病毒的抵抗能力。鉴于此，业界亟需发展出一种高效安全的CAV基因工程亚单位疫苗。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，以克服现有技术中的不足。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种融合蛋白，其具有SEQIDNO:2所示序列或者与SEQIDNO:2的全长序列95％以上相同的序列。即，本专利技术实施例提供的融合蛋白的氨基酸序列可以是原始序列，增加或截短的序列。本专利技术实施例还提供了用于编码所述融合蛋白的编码基因。在一些实施方式中，所述的编码基因具有SEQIDNO:1所示序列或者与SEQIDNO:1的全长序列95％以上相同的序列。本专利技术实施例还提供了一种重组基因载体，其包含所述融合蛋白的编码基因。在一些实施方式中，所述重组载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBacdual等，并优选采用pFastBac1。本专利技术实施例还提供了一种重组杆状病毒，其包含所述融合蛋白的编码基因。本专利技术实施例还提供了一种宿主细胞，其包含所述融合蛋白的编码基因。在一些实施方式中，所述宿主细胞选自昆虫细胞，例如Sf9细胞系，优选的，所述Sf9细胞系包括但不限于Sf9、HighFive或Sf21细胞，更优选为Sf9细胞。本专利技术实施例还提供了一种免疫组合物，其特征在于包括：所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。在一些实施方式中，所述医药学上可接受的载剂包括但不限于MONTANIDEISA206VG、MONTANIDEISA201VG、MONTANIDEISA15VG、液体石蜡、樟脑油、植物细胞凝集素之中的任意一种或者两种以上的组合，优选为MONTANIDEISA201VG。本专利技术实施例还提供了一种融合蛋白的制备方法，其包括：将所述融合蛋白的编码基因克隆到穿梭载体中，获得含有目的基因的重组穿梭载体；将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，并分离获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒；以所述重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞，并获得重组杆状病毒；将所述重组杆状病毒接种昆虫细胞并进行培养，之后分离获得所述融合蛋白。在一些实施方式中，所述穿梭载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBacdual等，优选为pFastBac1。在一些实施方式中，所述昆虫细胞可以选自Sf9细胞系，例如Sf9、HighFive或Sf21细胞等，优选为Sf9细胞，但不限于此。本专利技术实施例还提供了一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，其包括：采用前述的任一种方法制备融合蛋白，并将所述融合蛋白与医药学上可接受的载剂混合。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备犬腺病毒检测试剂，在生产用于在受试动物中诱导针对犬腺病毒抗原的免疫反应的药剂，或者，在生产用于预防动物受犬腺病毒感染的药剂中的用途。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备犬腺病毒基因工程亚单位疫苗中的用途。本专利技术实施例提供了一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗，其包含前述的任一种免疫组合物。进一步的，所述疫苗还可包含医药学上可接受的载剂。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于检测动物受犬腺病毒感染的试剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于在受试动物中诱导针对犬腺病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于预防动物受犬腺病毒感染的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了一种诱导针对犬腺病毒抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向受试动物施用所述犬腺病毒基因工程亚单位疫苗。本专利技术实施例还提供了一种保护受试动物免受犬腺病毒感染的方法，所述方法包括向受试动物施用所述犬腺病毒基因工程亚单位疫苗。本专利技术实施例还提供了一种适用于在受试动物中产生针对犬腺病毒感染的免疫反应的疫苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.融合蛋白，其具有SEQ ID NO:2所示序列。/n

【技术特征摘要】
1.融合蛋白，其具有SEQIDNO:2所示序列。


2.用于编码权利要求1所述融合蛋白的编码基因。


3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于：它具有SEQIDNO:1所示序列。


4.包含权利要求2或3所述编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或宿主细胞。


5.一种重组基因载体，其特征在于：所述重组基因载体包含权利要求2或3所述的编码基因，并且所述重组基因载体包括pFastBac1、pVL1393或pFastBacdual。


6.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞包含权利要求1所述融合蛋白的编码基因，并且所述宿主细胞为昆虫细胞，所述昆虫细胞包括Sf9、HighFive或Sf21细胞。


7.一种免疫组合物，其特征在于包括：权利要求1所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。


8.如权利要求7所述的免疫组合物，其特征在于：所述医药学上可接受的载剂包括MONTANIDEISA206VG、MONTANIDEISA201VG、MONTANIDEISA15VG、液体...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文龙，孔迪，滕小锘，
申请(专利权)人：苏州世诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32