抗DKK2抗体、包含该抗DKK2抗体的组合物及其用途制造技术

本公开涉及人源化的并且CMC特性改善的抗DKK2抗体，包含所述抗体的组合物，以及使用所述抗体或所述组合物来治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
抗DKK2抗体、包含该抗DKK2抗体的组合物及其用途
本公开涉及人源化的并且CMC(化学、制造和控制)特性改善的抗DKK2抗体，包含所述抗体的组合物，以及使用所述抗体或所述组合物来治疗疾病的方法。
技术介绍
这部分的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。癌症是全世界的主要健康问题。每年，世界各地有数千万人被诊断为癌症，并且超过一半的患者最终死于癌症。在美国，所有男性中约一半和所有女性中约三分之一将在其一生中的某一时间被诊断患有癌症，并且四分之一的死亡是由癌症引起的(Jemal等人,CACancerJ.Clin.,2002,52:23-47；Howlader等人,SEERCancerStatisticsReview,1975-2010,NationalCancerInstitute)。最常被发现的人类癌症包括由器官和实体组织产生的癌症，例如，结肠癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌和子宫内膜癌。结肠癌影响西半球二十分之一的人(Henderson,NatureCellBiology,2000,2(9):第653-60页)。在全球范围内，每年有100万新患者被诊断为结肠癌，并且其中一半死于该疾病(Liu等人,Cell,2002,108(6):第837-47页)。在过去几十年中，癌症治疗和诊断方面取得了显著进步。癌症的治疗选择包括手术、化学疗法、放射疗法和免疫疗法。最近的免疫疗法治疗，旨在刺激免疫系统，特别吸引了大量的研究。尽管免疫疗法可以是高度有效的，但无论肿瘤的起源器官是什么，只有一部分患者通常对疗法有反应。显然需要该领域的新发现以提高免疫疗法的功效和特异性。Wnt信号传导控制多种细胞过程，包括细胞命运决定、分化、极性、增殖和迁移。分泌蛋白的Wnt家族结合几类受体，例如低密度脂蛋白受体相关(LRP)蛋白5和6(LRP5/6)，从而导致几种不同的细胞内信号传导级联的激活，包括Wnt/β-联蛋白、Wnt/钙和Wnt/Jnk通路。Wnt与LRP5/6的结合通过阻断多蛋白复合物的功能特异性激活Wnt/β-联蛋白通路，所述多蛋白复合物引发β-联蛋白的降解，导致β-联蛋白在细胞质和细胞核中的积累。核β-联蛋白与Lef/TCF家族转录因子的成员复合并激活基因表达。可能由干细胞功能改变引起的病理状态，例如退行性疾病和癌症，通常与Wnt/β-联蛋白通路活性的变化相关。事实上，Wnt/β-联蛋白通路的过度激活被认为诱导干细胞的过早衰老和老化相关的干细胞功能丧失(Brack等人,Science,2007,第317卷第5839期第807-810页；Liu等人,Science,2007,第317卷第5839期第803-806页)。在癌症中，Wnt/β-联蛋白通路的过度激活，其通常与其它细胞生长调节基因的突变结合，可导致异常细胞生长(Reya和Clevers,Nature,2005,434(7035):843-50)。因此，许多正在进行的研究集中在Wnt/β-联蛋白通路作为癌症中的潜在治疗靶标(Breuhahn等人,Oncogene,2006,25:3787-3800；Greten等人,BrJCancer,2009,100:19-23)。特别地，包括癌症基因组测序项目在内的几个研究揭示，超过80％的结肠癌具有腺瘤性结肠息肉病(adenomatosispolyposiscoli)(APC)基因的突变或甚至丧失，所述基因是Wnt/β-联蛋白通路的主要抑制基因(Kinzler和Vogelstein,Cell.1996年10月18日；87(2):159-70.Review；Sjoblom等人,Science,2006年10月13日；314(5797):268-74；Mann等人,ProcNatlAcadSciUSA,1999.96(4):第1603-8页)。APC和蛋白质如GSK3β和轴蛋白(Axin)形成标记β-联蛋白降解的复合物。APC中的突变破坏这种复合物，并导致细胞质β-联蛋白水平提高及其核易位。由于β-联蛋白是Wnt信号传导的最重要的衔接子，因此它促进致癌因子响应于Wnt配体的表达。Wnt信号传导也受许多分泌的多肽拮抗剂调节。这些拮抗剂包括四种分泌的Dickkopf(DKK)蛋白(Monaghan等人,MechDev,1999.87:45-56；Krupnik等人,Gene,1999.238:301-13)。在这四种DKK蛋白中，已经证明DKK1、DKK2和DKK4通过以高亲和力直接结合至Wnt共同受体LRP5/6(Mao等人,Nature,2001.411:321-5；Semenov等人,CurrBiol,2001.11:951-61；Bafico等人,NatCellBiol,2001.3:683-6)而成为经典Wnt信号传导的有效拮抗剂(Mao等人,Nature,2001.411:321-5；Semenov等人,CurrBiol,2001.11:951-61；Bafico等人,NatCellBiol,2001.3:683-6；Niehrs,Nature,2006.25:7469-81)。虽然据报道DKK1在脊椎动物发育中在头和心形成中起关键作用(Niida等人,Oncogene,2004,Nov.4；23(52):8520-6)，但是DKK2看起来不在脊椎动物发育中发挥关键作用。缺乏DKK2的小鼠具有较低的血糖(Li等人,ProcNatlAcadSciUSA,2012.109:11402-7)、降低的骨骼质量(Li等人,NatGenet,2005.37:945-52)和缺陷性眼表上皮(Gage等人,DevBiol,2008.317:310-24；Mukhopadhyay等人,Development,2006.133:2149-54)。鉴于DKK蛋白是Wnt拮抗剂，常规的认识是DKK的失活会提高Wnt活性并因此加速癌症形成。然而，它们在癌症形成中的作用尚未被直接研究。DKK分子含有两个保守的富含半胱氨酸的结构域(Niehrs,Nature,2006.25:7469-81)。以前，显示DKK1和DKK2的第二富含Cys的结构域在抑制经典Wnt信号传导中起更重要的作用(Li等人,JBiolChem,2002.277:5977-81；BrottandSokolMol.Cell.Biol.,2002.22:6100-10)。最近，解析了DKK2的第二富含Cys结构域的结构，并描绘了DKK与LRP5/6和Kremen的相互作用所需的结构域上的氨基酸残基(Chen等人,JBiolChem,2008.283:23364-70；Wang等人,JBiolChem,2008.283:23371-5)。DKK与LRP5/6的相互作用是DKK介导的Wnt抑制的主要机制的基础。尽管DKK与Kremen(也是跨膜蛋白)的相互作用显示促进Wnt信号传导的DKK拮抗作用，但是这种相互作用可能具有其它未解析的功能。Ala扫描诱变鉴定了LRP5的第三YWTD重复结构域上的氨基酸残基对结合DKK1和DKK2是重要的(Zhang等人,Mol.Cel本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性地结合人DKK2蛋白的抗体，其包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区以及含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：/n(a)CDRH1具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；/n(b)CDRH2具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；/n(c)CDRH3具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；/n(d)CDRL1具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；/n(e)CDRL2具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；且/n(f)CDRL3具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性地结合人DKK2蛋白的抗体，其包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区以及含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：
(a)CDRH1具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；
(b)CDRH2具有SEQIDNO:2或SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；
(c)CDRH3具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；
(d)CDRL1具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；
(e)CDRL2具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；且
(f)CDRL3具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链可变区包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:14所示的氨基酸序列。


3.如权利要求2所述的抗体，其中所述轻链可变区包含SEQIDNO:8或SEQIDNO:12所示的氨基酸序列。


4.如权利要求3所述的抗体，其中所述抗体的重链包含SEQIDNO:11或SEQIDNO:15所示的氨基酸序列，或者与SEQIDNO:11或SEQIDNO:15所示的氨基酸序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％的序列同一性的氨基酸序列。


5.如权利要求4所述的抗体，其中所述抗体的轻链包含SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘大有，黄光诚，
申请(专利权)人：杭州奕安济世生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33