DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途，属于纤维化疾病药物领域。本发明专利技术的原理是：DNA四面体框架核酸可通过抑制细胞外基质生成和细胞上皮间质转化，抑制细胞纤维化的进程，该原理不同于现有的纤维化疾病药物。加之DNA四面体框架核酸的生物相容性高，对人体没有明显副作用。将DNA四面体框架核酸用于制备治疗纤维化疾病的药物将具有十分良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途
本专利技术属于纤维化疾病药物领域。
技术介绍
纤维化疾病是影响多个器官和身体系统的常见问题，导致患者的功能障碍甚至死亡。许多人体器官和系统都可能参与纤维化疾病，包括肺，肾，心脏，肝脏和皮肤。组织纤维化通常发生在化学刺激之后，例如，酒精引起的肝纤维化，博莱霉素引起的肺纤维化，二氧化硅粉尘引起的矽肺。除了化学刺激外，严重的外伤，手术或受伤也可能导致组织纤维化，例如皮肤增生性瘢痕和由子宫内膜纤维化引起的不孕等。对于纤维化疾病的治疗，目前尚无特效药物可逆转纤维化。以常见的肺纤维化治疗来讲，公认的推荐抗纤维化的药物如吡非尼酮(药理作用为抗炎抗纤维化，抗氧化)，尼达尼布(药理作用多靶点酪氨酸激酶抑制剂，阻断成纤维细胞增殖、迁移及转化)以及各类中药等，但均有不同程度的副作用。当纤维化发展到终末期，可采用的手段为器官移植，以改善患者的生存质量，但存在手术难度大，移植后生存率不确定，费用昂贵等问题。DNA四面体(TDN)，也被称为DNA四面体框架核酸(TFNAs)，是一种由DNA单链(通常是4条)通过碱基互补配对形成的四面体结构。根据专利技术人以往的研究，TFNAs可以用作促进细胞增殖、迁移和分化，因此，TFNAs被应用于脊柱损伤，骨关节炎和其他创伤性疾病。此外，TFNAs能作为载体，可增强寡核苷酸、化疗药物的细胞递送，在抗肿瘤治疗中潜力较大。更为重要的是，TFNAs作为新型核酸纳米材料，可调节炎性因子及活性氧等的产生，具有良好的抗炎抗氧化作用。目前尚未见关于TFNAs在治疗纤维化疾病方面的应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是：提供DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的应用。本专利技术的技术方案如下：DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途。如前述的用途，所述纤维化疾病是肺部的纤维化疾病。如前述的用途，所述DNA四面体框架核酸是由序列如SEQIDNO.1～4所述的单链DNA分子经过碱基互补配对形成的。如前述的用途，所述细胞纤维化是由TGF-β1诱导的。如前述的用途，所述药物是抑制细胞外基质生成的药物。如前述的用途，所述药物是抑制细胞I型胶原和/或纤连蛋白表达的药物。如前述的用途，所述药物是抑制上皮间质转化的药物。如前述的用途，所述药物是抑制α-平滑肌肌动蛋白表达的药物。一种治疗纤维化疾病的药物，所述药物以DNA四面体框架核酸为活性成分。如前述的药物，所述DNA四面体框架核酸是由序列如SEQIDNO.1～4所述的单链DNA分子经过碱基互补配对形成的。专利技术人通过研究发现，DNA四面体框架核酸具备抑制细胞纤维化的功能，本专利技术所公开的DNA四面体框架核酸用于制备治疗纤维化疾病尤其是肺部纤维化疾病的药物中的用途，是为纤维化疾病治疗提供了新的方向；另外，得益于DNA四面体框架核酸的生物相容性，其制备得到的药物理论上不会导致明显的副作用，比现有的药物更加安全。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为DNA四面体框架核酸(TFNAs)的合成及表征：A为TFNAs的合成原理示意图；B为TFNAs及四条单链的高效毛细管电泳(HPCE)结果(图例从上到下依次是：分子大小标记Marker、S1、S2、S3、S4、S1+S2、S1+S2+S3、TFNAs)；C为TFNAs及四条单链的凝胶电泳图。泳道：1为DNAmarker，2为S1，3为S2，4为S3，5为TFNAs；D为透射电镜检测图，红色标识为DNA四面体，蓝色标识为团聚物。图2为RLE-6TN细胞对TFNAs的摄取：A为流式细胞入胞检测结果；B为Cy5标记TFNAs荧光检测及示踪图。图3为TFNAs对LPS诱导RLE-6TN细胞产生的活性氧检测图：A，荧光共聚焦检测图；B，流式细胞检测图；C，D，流式检测结果分析图。图4为纤维化相关I型胶原(CollagenI)基因蛋白水平的表达检测图：A，免疫荧光检测图；B，蛋白印迹图；C，蛋白印迹定量图；D，荧光定量PCR检测图；显微标尺，25μm。图5为纤维化相关纤连蛋白(Fibronectin)基因蛋白水平的表达检测图：AA，免疫荧光检测图；B，蛋白印迹图；C，蛋白印迹定量图；D，荧光定量PCR检测图；显微标尺，25μm。图6为纤维化相关上皮间质转化EMT过程标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因蛋白水平的表达检测图：A，免疫荧光检测图；B，蛋白印迹图；C，蛋白印迹定量图；D，荧光定量PCR检测图；显微标尺，25μm。具体实施方式实施例1TFNAs的制备与鉴定1.合成将四条DNA单链(S1、S2、S3、S4)溶解于TMBuffer(10mMTris-HCl，50mMMgCl2，pH＝8.0)中，四条DNA单链的终浓度为1000nM，充分混合，迅速加热至95℃保持10分钟，之后迅速降温至4℃并维持20分钟以上，在上述温度调控下，四条单链根据碱基互补配对原则在体系内进行自组装过程，即可得到DNA四面体框架核酸。四条单链的序列(5′→3′)如下：S1：S2：S3：S4：2.鉴定鉴定结果如图1所示。图1中，A为TFNAs的合成原理示意图；B为TFNAs及四条单链的高效毛细管电泳(HPCE)结果；C为TFNAs及四条单链的凝胶电泳图。泳道：1为DNAmarker，2为S1，3为S2，4为S3，5为TFNAs；D为透射电镜检测图，红色标识为DNA四面体，蓝色标识为团聚物。可见TFNAs被成功合成。以下将用实验例的形式对本专利技术的有益效果进一步说明。实验例1细胞摄取实验本实验对TFNAs入胞进行检测，验证其良好的入胞性能。将Cy5荧光物质挂于S1链上合成Cy5-TFNAs，RLE-6TN细胞(一种肺泡上皮细胞)在10％胎牛血清DMEM培养基中培养贴壁24小时后，将培养基更换为Cy5-TFNAs终浓度分别为125nM和250nM，在培养6h和10h后对细胞摄取进行流式细胞术及免疫荧光技术检测Cy5-TFNAs的入胞情况。(1)流式细胞术方法：a.在6孔板接种RLE-6TN细胞悬液，先在孵箱预培养24小时(37℃，5％CO2)。b.加入浓度分别为125nM和250nM的Cy5-TFNAs，于孵箱分别培养6小时和12小时(37℃，5％CO2)。c.消化细胞，收集细胞悬液，1000r/min下离心5min，P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.DNA四面体框架核酸在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述纤维化疾病是肺部的纤维化疾病。


3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述DNA四面体框架核酸是由序列如SEQIDNO.1～4所述的单链DNA分子经过碱基互补配对形成的。


4.如权利要求1～3任一所述的用途，其特征在于：所述细胞纤维化是由TGF-β1诱导的。


5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述药物是抑制细胞外基质生成的药物。


6.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：林云锋，张天旭，蔡潇潇，肖德昡，高阳，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51