慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型及其构建方法和应用。该构建方法以MNNG溶液饮用液代替饮用水，由C57近交系小鼠Balb/c自由饮用，进行连续造模。该构建方法具有简便、稳定、低成本、高效的特点，能够满足方法验证过程中对敏感性、稳定性、精密度(包括重复性、人员操作误差)等方面的要求，该方法对于治疗慢性萎缩性胃炎胃癌前病变的中药筛选及药物研发、质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型及其构建方法和应用
本专利技术涉及实验动物学
，具体而言，涉及一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型及其构建方法和应用。
技术介绍
动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。从最初的单一因素造模到现在的复合多因素造模，造模受到实验动物的类型、MNNG的浓度、给药途径、造模周期、联合药物不同等因素的影响，复制出来的模型有很大的差异，多种多样的造模方式一定程度满足了不同实验目的下对实验模型的需求，但是，目前中医模型还不足以完全覆盖CAG的常见证候。目前常用的慢性萎缩性胃炎或胃癌前病变动物模型构建方法，常选用成年雄性Wistar和SD大鼠，其中以成年雄性Wistar大鼠更为常用，因Wistar大鼠性情更加温顺，争斗较少，对禁食、灌胃等操作耐受性更强，死伤率低。雄性大鼠优于雌性大鼠，因为雌性大鼠受激素等影响而对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)的毒性具有更低的易感性，多选用成年大鼠是因为其造模更佳接近人胃癌前病变好发于中老年人的事实。因前期研究多选择大鼠，为缩短诱导周期、提高成功率，实验常采取MNNG自由饮用联合灌胃，无法避免操作对大鼠造成的伤害同时降低可行性。同时，因选用大鼠造模，根据大鼠的体重配制造模试剂，所耗费试剂费用较高。因此，现有慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建普遍存在造模时间长、成模率不稳定、造模条件多和成本高的技术问题。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型及其构建方法和应用，以改善上述问题。本专利技术是这样实现的：第一方面，本专利技术提供了一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，以MNNG溶液饮用液代替饮用水，由C57近交系小鼠Balb/c自由饮用，进行连续造模。可选地，MNNG溶液的浓度为100～200μg/mL，优选150μg/mL。可选地，MNNG溶液由MNNG存储液稀释得到；MNNG存储液的浓度为8～12mg/L。可选地，MNNG存储液由以下步骤制备得到：采用灭菌水进行配置，并避光存储于3～5℃的环境中。可选地，进行造模过程中，MNNG溶液处于避光条件下。可选地，连续造模的时间为11～14周，优选12周。可选地，C57近交系小鼠Balb/c为雄性。可选地，连续造模过程中，每周定期检测小鼠体重、进食以及排便情况。可选地，连续造模过程中，每两周定期抽取小鼠对胃组织病理变化进行动态观察，以评估鼠胃黏膜组织结构病变程度。第二方面，本专利技术还提供了一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型，其由上述慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法得到。第三方面，本专利技术还提供了上述慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型在对于治疗慢性萎缩性胃炎胃癌前病变的中药筛选中的应用。本专利技术技术方案具有以下有益效果：通过选用对烷化剂最为敏感的C57近交系小鼠Balb/c进行造模，该方法特异性强，造模周期较以往大鼠模型缩短一倍，造模周期大幅度缩短；可重复性高，造模方法无需灌胃或注射造模剂，节省大量人力及时间。同时，造模成本低，小鼠因体重较大鼠有优势，根据体重计算造模剂量，由此产生的后期干预所需药物剂量也相应减少，很大程度上降低了实验期间成本。因此，采用该造模方法能够简便，准确，高效地构建慢性萎缩性胃炎胃癌前病变小鼠模型，这对于治疗慢性萎缩性胃炎胃癌前病变的中药筛选、新药研发、质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为对比例2中MNNG200mg/L造模32周的雄性SD大鼠胃粘膜组织镜下病理变化图；图2为对比例3中MNU120mg/L造模19周的雄性C57小鼠胃粘膜组织镜下病理变化图；图3为实施例1中的MNNG150mg/L造模14周的雄性Balb/c小鼠胃粘膜组织镜下病理变化图；图4为实施例1、对比例2和对比例3三种不同造模条件下雄性Balb/c小鼠、雄性SD大鼠、雄性C57小鼠的胃粘膜组织镜下病理变化图的比较；图5为正常组和实施例1的模型组造模后的小鼠外观对比；图6为正常组和实施例1的模型组的体重变化情况比较；图7为实施例1的模型组的脾指数情况；图8为实施例1的模型组脾脏组织病理学表现(H&E染色，X400)；图9为正常组和实施例1的模型组胃组织病理结果变化；图10和图11分别依次为正常组和实施例1的模型组HID-AB-PAS特殊化学染色结果；图12和图13为实施例1的模型组的CD4+染色结果；图14和图15为实施例1的模型组的IFN-γ染色结果；图16为实施例1的模型组的EMT癌变相关蛋白表达结果；图17为实施例1的模型组的细胞周期相关蛋白表达结果；图18为实施例1的模型组的凋亡相关蛋白表达结果；图19为实施例1的模型组的Nrf2/HO-1/NQO1信号通路蛋白表达结果。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术提供的一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型及其构建方法和应用进行具体说明。专利技术人在对MNNG造模进行研究时发现，目前主要使用MNNG自由饮用或灌胃联合隔日禁食等进行造模，该模型构建时间为24-32周，造模时间长，同时须配合灌胃及隔日禁食，操作须耗费更多人力及时间。同时，因选用大鼠造模，根据大鼠的体重配制造模试剂，所耗费试剂是小鼠的双倍，须耗费更多费用。更重要的是，创造性地发现在慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型构建方法中，造模动物品系的敏感性对于造模过程起到了很重要的作用。基于此，专利技术人针对现有慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型构建中存在的问题提出了以下技术方案。本专利技术的一些实施方式提供了一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，以MNNG溶液饮用液代替饮用水，由C57近交系小鼠Balb/c自由饮用，进行连续造模。采用MNNG单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，其特征在于，以MNNG溶液饮用液代替饮用水，由C57近交系小鼠Balb/c自由饮用，进行连续造模。/n

【技术特征摘要】
1.一种慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，其特征在于，以MNNG溶液饮用液代替饮用水，由C57近交系小鼠Balb/c自由饮用，进行连续造模。


2.根据权利要求1所述的慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，其特征在于，所述MNNG溶液的浓度为100～200μg/mL，优选150μg/mL。


3.根据权利要求1所述的慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，其特征在于，所述MNNG溶液由MNNG存储液稀释得到；所述MNNG存储液的浓度为8～12mg/L。


4.根据权利要求3所述的慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，其特征在于，所述MNNG存储液由以下步骤制备得到：采用灭菌水进行配置，并避光存储于3～5℃的环境中。


5.根据权利要求1～4任一项所述的慢性萎缩性胃炎胃癌前病变动物模型的构建方法，其特征在于，进行造模过程中，MNNG溶液处于避光条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘华峰，李思怡，赵自明，田雯，倪家慧，李嘉丽，杨良俊，周恒立，李秋月，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44