一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法及应用，属于动物模型构建技术领域，本发明专利技术基于现有的槟榔成瘾动物模型不利于神经生物学机制研究且制备过程复杂费时的缺陷，从槟榔的多种有效成分中筛选得到了可构建条件性位置偏爱(CPP)动物模型的槟榔碱，并对其给药量进行摸索，成功构建得到了槟榔碱诱导的CPP动物模型，该动物模型不仅可用于评价槟榔碱的成瘾性，也更有利于对槟榔碱诱导成瘾的神经生物学机制的进一步探索研究。本发明专利技术所述的CPP动物模型的构建方法操作简单方便、省时省力，适合实验室的大规模广泛应用。

【技术实现步骤摘要】
一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法及应用
本专利技术属于动物模型构建
，具体涉及一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法及应用。
技术介绍
近年来大量研究发现咀嚼槟榔可以引发多种疾病，严重影响人类健康。流行病学调查研究证实人类咀嚼槟榔是一种成瘾行为。全球约有6亿人咀嚼槟榔，槟榔是继尼古丁、酒精和咖啡因之后的全球第四大成瘾性物质。因此，槟榔的成瘾性是其咀嚼扩散并造成危害的主要原因之一。条件性位置偏爱(conditionedplacepreference,CPP)动物行为学模型是临床前评价药物成瘾潜力的主要方法之一。现有专利CN111165428A公开了一种嚼食槟榔成瘾的动物模型的构建方法及其应用，其主要是提取槟榔嚼块的提取液涂抹于饲料表面基于实验线束采食以用于评价实验动物嚼食槟榔成瘾的动物模型。然而根据目前的研究，已在槟榔中鉴定出了包括槟榔碱、槟榔次碱、异槟榔碱，去甲基槟榔碱和去甲基槟榔次碱等15种生物碱，因此仅以槟榔嚼块提取液构建动物模型无法明确其中具体是哪种物质诱导成瘾，不利于槟榔成瘾的神经生物学机制研究，同时在构建模型的过程中，槟榔嚼块提取液的制备步骤操作复杂且繁琐费时。
技术实现思路
本专利技术基于现有的槟榔成瘾动物模型不利于神经生物学机制研究且制备过程复杂费时的缺陷，从槟榔的多种有效成分中筛选得到了可构建条件性位置偏爱(CPP)动物模型的槟榔碱，并对其给药量进行摸索，成功构建得到了一种CPP动物模型，该动物模型不仅可用于评价槟榔碱的成瘾性，也更有利于对槟榔碱诱导成瘾的神经生物学机制的进一步探索研究，并且该动物模型的构建方法简单省时、重复性好。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法，所述方法包括：将槟榔碱以皮下注射的方式给予限饲中的实验动物，同时进行条件性位置偏爱训练，训练结束后对所述实验动物进行检测，得到条件性位置偏爱动物模型。进一步的，按照实验动物的体重给予槟榔碱0.03～0.3mg/kg。进一步的，按照实验动物的体重给予槟榔碱0.1mg/kg。进一步的，所述条件性位置偏爱训练具体为：每日上午皮下注射槟榔碱后将所述实验动物放置于伴药箱中30min，同时每日下午皮下注射生理盐水后将所述实验动物放置于非伴药箱中30min，其中上午和下午的间隔时间为6小时。进一步的，所述条件性位置偏爱训练的重复时间为10天。进一步的，所述实验动物为C57BL/6小鼠。本专利技术还提供了上述方法构建的动物模型在评价槟榔碱成瘾性中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术从槟榔的多种有效成分中筛选得到了可构建条件性位置偏爱(CPP)动物模型的槟榔碱，并建立槟榔碱诱导的CPP动物模型，不仅可用于评价槟榔碱的成瘾性，也更有利于对槟榔碱诱导成瘾的神经生物学机制的进一步探索研究；同时对槟榔碱的给药量进行摸索，以构建稳定且重复性好的CPP动物模型。本专利技术所述的CPP动物模型的构建方法操作简单方便、省时省力，适合实验室的大规模广泛应用。附图说明图1为本专利技术实施例1中各组小鼠CPP训练前后在伴药箱的活动时间；图2为本专利技术实施例2的第一次验证实验中各组小鼠CPP训练前后在伴药箱的活动时间；图3为本专利技术实施例2的第二次验证实验中各组小鼠CPP训练前后在伴药箱的活动时间。具体实施方式下面将结合本专利技术中的实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1不同剂量槟榔碱对条件性位置偏爱的影响本实施例主要研究不同剂量的槟榔碱对实验小鼠条件性位置偏爱的影响，以对槟榔碱的具体用量进行摸索，具体如下：实验动物：雄性C57BL/6小鼠，体重18-20g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证号：SCXK(京)2016-0006，质量合格证号：NO.1100111911063732。饲喂方式：所有小鼠进行单笼限饲喂养，即为了维持小鼠体重将每日小鼠的进食量进行限制。每日实验结束1h后喂食，每日进食量(g)＝20g-小鼠实验结束1h后体重(g)。仪器：条件性位置偏爱(CPP)试验装置(XR-XT401，上海欣软信息科技有限公司)，该装置由两块中间隔板将箱体分割成三部分，分别为白箱、黑箱和中间区域。试验动物进入装置后，该装置顶部的摄像系统将监视其行为活动，并由计算机记录保存。实验方法：实验过程主要分为预处理、训练和测试三个阶段，具体为：(1)预处理阶段：实验前，将小鼠放于抽出隔板的CPP试验装置中自由活动，适应2d后，第3d进行小鼠位置偏爱测试。测试前将隔板抽出，小鼠放置于中间区域,记录小鼠在15min内在黑白箱中的活动时间，结果作为基线值。结果发现：自然状态下，>90％的小鼠偏爱黑箱，因此，将黑箱选为非伴药箱，白箱选为伴药箱，同时剔除掉在任一边活动时间>总时间65％，或者中间区域时间>总时间45％的小鼠。(2)训练阶段：取合格的小鼠50只，随机分成5组，按照小鼠的实际体重给予不同剂量的槟榔碱，并根据槟榔碱注射剂量的差异，将小鼠分别设置为：对照组(0mg/kg)、0.03mg/kg组、0.1mg/kg组、0.3mg/kg组和1mg/kg组。第4-13d，关闭隔板，每日上午将给药组小鼠皮下注射不同剂量的槟榔碱后放置于伴药箱30min；下午皮下注射与槟榔碱同体积的生理盐水后将小鼠放置于非伴药箱30min(其中对照组小鼠则上下午均皮下注射生理盐水)；其中上下午间隔时间为6h。(3)测试阶段：在第14d时，对上述经过训练阶段的小鼠进行测试，测试前将隔板抽出，所有小鼠不经过任何处理，放置于中间区域，记录小鼠在15min内在黑白箱中的活动时间，结果作为测试值。数据处理：数据以Mean±SEM表示，用GraphPadPrism5软件进行数据统计分析与作图；同时采用单因素方差分析，分析比较各组小鼠在伴药箱中的活动时间；并计算训练前后小鼠在伴药箱活动时间的增幅百分数，计算公式为：[(训练后小鼠在伴药箱的活动时间-训练前小鼠在伴药箱的活动时间)/训练前小鼠在伴药箱的活动时间]×100％，P<0.05为显著性差异。其中各组小鼠每日进入训练前的平均体重如表1所示。分别统计分析并比较各组小鼠在第3d(CPP训练前)和第14d(CPP训练后)在伴药箱中的活动时间(s)，以及在训练前后在伴药箱中活动时间的增幅百分数(％)，结果如表2和图1所示。表1各组小鼠每日进入训练前的平均体重表2各组小鼠CPP训练前后在伴药箱的活动时间及增幅百分数(Mean±SEM)注：*表示与对照组比较P<0.05根据表1的结果，在整个实验过程中，小鼠的体重维持较均衡，均控制在18-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：将槟榔碱以皮下注射的方式给予限饲中的实验动物，同时进行条件性位置偏爱训练，训练结束后对所述实验动物进行检测，得到条件性位置偏爱动物模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种条件性位置偏爱动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：将槟榔碱以皮下注射的方式给予限饲中的实验动物，同时进行条件性位置偏爱训练，训练结束后对所述实验动物进行检测，得到条件性位置偏爱动物模型。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按照实验动物的体重给予槟榔碱0.03～0.3mg/kg。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，按照实验动物的体重给予槟榔碱0.1mg/kg。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒细记，皮明山，马宝苗，乐凯，徐丛玥，周梅，孙宾莲，
申请(专利权)人：江汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42