一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒及使用方法技术

本发明专利技术公开了一种检测游离β‑hCG(人绒毛膜促性腺激素)含量的磁微粒直接化学发光试剂盒及其使用方法，试剂盒包括包被链霉亲和素的磁性微球，生物素标记的β‑hCG抗体，β‑hCG标品，吖啶酯标记的具有β‑hCG不同识别位点的抗体，洗涤缓冲液，吖啶酯标抗体稀释液，标品稀释液，激发液A，含有1％‑2％的Triton X‑100和乙醇的激发液B。本发明专利技术结合了磁性微球与链霉亲和素蛋白偶联技术，生物素抗体标记技术，吖啶酯抗体标记技术，特别是对激发液成分和比例进行调试和改进后，让试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确性与重复性高的各种特性。此试剂盒可用来检测磁微粒的直接化学发光性能以及更好的检测游离β‑hCG(人绒毛膜促性腺激素)的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒及使用方法
本专利技术涉及试剂盒
，具体涉及一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒及使用方法。
技术介绍
人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，由α和β两个亚单位以非共价键形式结合而成。分子量为36700的糖蛋白激素。hCG由胎盘和胞体滋养层细胞产生，其α亚单位与糖蛋白激素家族的其他激素(如LH、FSH和TSH)的α亚单位氨基酸系列相同，而β亚单位具有特异性。在临床检测中，hCG主要用于诊断早孕、葡萄胎和宫外孕等。而β-hCG的检测主要用于唐氏综合征的筛查和作为肿瘤标志物用于肿瘤的筛查。hCG与β-hCG检测方法类似，多采用化学发光免疫分析法检测，也有使用放射免疫分析(RIA)法或酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定。吖啶酯直接化学发光系统因不需要催化剂，发光系统简单，在检测β-hCG时被广泛使用。为了更高的信噪比，一般都会在激发液中加入一些表面活性剂来增强信号，但增强剂的使用也增加了体系起泡的风险，使测试数值变异增大，体系不稳定。对于磁微粒研发企业，一款稳定的性能稳定的化学发光试剂盒尤为重要，它是检测磁微粒性能的标尺之一。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提出了一种含有全新激发液配方的检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒及制备方法，本专利技术涉及的试剂盒特异性强，重复性高，可以适用各种直接化学发光仪。本专利技术的技术方案如下：一方面，本专利技术公开了一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，所述试剂盒包括链霉亲和素磁性微球，生物素化β-hCG抗体，β-hCG标品，吖啶酯标记的具有β-hCG不同识别位点的抗体，洗涤缓冲液，吖啶酯标记抗体稀释液，标品稀释液，激发液。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述链霉亲和素磁性微球原始浓度为10mg/ml，使用时按1：20-40进行稀释，生物素化β-hCG抗体原始浓度为1mg/ml，使用时按1：1000-2000进行稀释，吖啶酯标记β-hCG抗体原始浓度为1mg/ml，使用时按1；1000-2000稀释。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述激发液包括A液和B液；A液的组成及配制浓度为：H2O2的质量分数为1.5-3％，HNO3的浓度为0.1-0.2mol/L；B液的组成及配制浓度为：TritonX-100的质量分数为1.0-2.0％，NaOH的浓度为0.5-1.0mol/L，乙醇质量分数为1.0％-2.0％。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述洗涤缓冲液为TBST溶液，由20mMTris，30mMNaCl，0.1％Tween20构成。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述啶酯标记抗体稀释液和标品稀释液为含5％BSA和0.1％Tween-20的10mMPBS溶液另一方面，本专利技术公开了上述检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒的使用方法，包括以下步骤：S1、将所述链霉亲和素磁性微球、生物素化β-hCG抗体、吖啶酯标记β-hCG抗体稀释至上述的使用浓度；即S2、在反应管里加入链霉亲和素磁性微球、生物素抗体、标品、吖啶酯抗体，混合均匀，在37℃孵育20min，形成磁性微球-标品复合物；S3、孵育结束后，用洗涤缓冲液将磁性微球-标品复合物清洗3遍；S4、洗涤完成后每个反应管加激发液，在化学发光仪上读值。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述步骤S2具体包括在反应管里加入50μl链霉亲和素磁性微球，50u1生物素抗体，20u1标品，50ul吖啶酯抗体，混合均匀，37℃孵育20min，形成磁性微球-标品复合物。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述步骤S4中在每个反应管加激发液的具体步骤包括：洗涤完成后每管加激发液A液100ul，后每管泵B液100ul。本专利技术具有如下有益效果：1)本专利技术提供一款的检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒。本试剂盒能够准确测试磁珠的化学发光性能，而且适用性强，还可以大大减少外购试剂盒和委托检测的费用，为企业节省研发成本；2)本专利技术以双抗夹心直接化学发光免疫检测法为基础，选择合适的抗体对来配制的β-hCG化学发光试剂盒。用质控链霉亲和素磁性微球检测标准曲线有良好线性，R2≥0.99，S1/S0＞2.6，S6/S0＞500，相同样品检测10次CV值≤10％。可以很好的评价磁微粒原料。附图说明图1为本专利技术实施例提供的不同稀释比例吖啶酯抗体发光值均值比较；图2为本专利技术实施例提供的β-hCG直接化学发光标准曲线。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均可从正规渠道商购获得。下面结合附图详细说明本专利技术的优选实施方式。本专利技术公开了一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，所述试剂盒包括链霉亲和素磁性微球，生物素化β-hCG抗体，β-hCG标品，吖啶酯标记的具有β-hCG不同识别位点的抗体，洗涤缓冲液，吖啶酯标记抗体稀释液，标品稀释液，激发液。其中，链霉亲和素磁性微球为粒径1μm的SAbeads，或者需要检测的其他链霉亲和素磁性微球。链霉亲和素磁性微球原始浓度为10mg/ml，使用时按1∶20-40进行稀释，生物素化β-hCG抗体原始浓度为1mg/ml，使用时按1∶1000-2000进行稀释，吖啶酯标记β-hCG抗体原始浓度为1mg/ml，使用时按1；1000-2000稀释。优选地，激发液包括A液和B液；A液的组成及配制浓度为：H2O2的质量分数为1.5-3％，HNO3的浓度为0.1-0.2mol/L；B液的组成及配制浓度为：TritonX-100的质量分数为1.0-2.0％，NaOH的浓度为0.5-1.0mol/L，乙醇质量分数为1％-2％。在本专利技术实施例中，洗涤缓冲液为TBST溶液，由20mMTris，30mMNaCl，0.1％Tween20构成。洗涤缓冲液的配置包括以下步骤：先配置2L5×的母液TBS溶液：称取24.228gTris粉末，17.532gNaCl粉末，置于一个带磁力搅拌子的2L烧杯中；倒入1600mL纯化水，将烧杯置于磁力搅拌器上，调节转速，室温搅拌至粉末试剂完全溶解；插入pH计电极，逐滴加入1M盐酸，调至pH＝8.0±0.1，室温(25℃)旋转搅拌3分钟；最后用容量瓶定容到2L。其中，吖啶酯标记抗体稀释液和标品稀释液为PBST。本专利技术公开了上述检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒的使用方法，包括以下步骤：S1、将所述链霉亲和素磁性微球、生物素化β-hCG抗体、吖啶酯标记β-hCG抗体稀释至上述的使用浓度；即S2、在反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括链霉亲和素磁性微球，生物素化β-hCG抗体，β-hCG标品，吖啶酯标记的具有β-hCG不同识别位点的抗体，洗涤缓冲液，吖啶酯标记抗体稀释液，标品稀释液，以及优化的激发液。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括链霉亲和素磁性微球，生物素化β-hCG抗体，β-hCG标品，吖啶酯标记的具有β-hCG不同识别位点的抗体，洗涤缓冲液，吖啶酯标记抗体稀释液，标品稀释液，以及优化的激发液。


2.根据权利要求1所述的检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁性微球原始浓度为10mg/ml，使用时按1：20-40进行稀释，生物素化β-hCG抗体原始浓度为1mg/ml，使用时按1：1000-2000进行稀释，吖啶酯标记β-hCG抗体原始浓度为1mg/ml，使用时按1；1000-2000稀释。


3.根据权利要求1所述的检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述激发液包括A液和B液；A液的组成及配制浓度为：H2O2的质量分数为1.5-3％，HNO3的浓度为0.1-0.2mol/L；B液的组成及配制浓度为：NaOH的浓度为0.5-1.0mol/L，TritonX-100的质量分数为1.0-2.0％，乙醇质量分数为1.0％-2.0％。


4.根据权利要求1所述的检测β-hCG含量直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述洗涤缓冲液为TBST溶液，由20mMTris，30mMNaCl，0.1％Tween20构成。


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【专利技术属性】
技术研发人员：任辉，万东菊，
申请(专利权)人：苏州海狸生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32