一种MYBPC3突变基因及其用途和检测方法以及肥厚型心肌病检测试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种突变基因，它是人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异。还提供了检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂在制备肥厚型心肌病的检测试剂中的用途。本发明专利技术还提供了一种肥厚型心肌病检测试剂盒，以及对上述突变基因进行检测的方法。本发明专利技术将MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异应用于肥厚型心肌病基因检测试剂盒的制备中，能达到临床辅助诊断的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种MYBPC3突变基因及其用途和检测方法以及肥厚型心肌病检测试剂盒
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种MYBPC3突变基因及其用途和检测方法以及肥厚型心肌病检测试剂盒。
技术介绍
肥厚型心肌病(hypertrophiccardiomyopathy，HCM)是一种原因不明的心肌疾病，特征为心室壁呈不对称性肥厚，常侵及室间隔，心室内腔变小，左心室血液充盈受阻，左心室舒张期顺应性下降。根据左心室流出道有无梗阻分为梗阻性及非梗阻性肥厚型心肌病，可能与遗传等有关。肥厚型心肌病有猝死风险，是运动性猝死的原因之一。HCM主要临床表现为：肥厚型心肌病、胸痛、心脏肥厚、双侧心室肥厚、右房扩大、心力衰竭(逐渐加重)、心包积液、一级房室传导阻滞、左心室收缩功能下降、左室短轴缩短率下降、右室收缩功能下降、左室收缩末期内径扩大、室间隔增厚、完全和不完全的左束支传导阻滞、右束传导阻滞、心室颤动、心跳骤停、晕厥、短暂性脑缺血发作、中风、呼吸困难、肺水肿、腹水和肝肿大等；纯合子可出现肌病相关改变，如细小纤维数量增多，电镜下观察到的肉瘤组织紊乱，粗纤维部分缺失。HCM患者通常有心悸、劳力性呼吸困难、心前区闷痛、易疲劳、晕厥甚至猝死，晚期出现左心衰的表现。HCM患者应避免剧烈运动，特别是竞技性运动及情绪紧张，同时预防猝死。对HCM的治疗包括药物治疗，如β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂、抗心衰治疗药物(如利尿剂及扩血管药)和抗心律失常药物(如乙胺碘呋酮、双异丙比胺)等；同时，还可以施用室间隔肌切除术、双腔起搏术、经皮腔间隔心肌化学消融术(PE-MA)等手术治疗。对于肥厚型心肌病的传统鉴别和诊断方法主要依靠生化检查和影像学检查，如超声心动图、心电图检查、X线检查、心脏磁共振(MRI)和心内膜下心肌活检等。这些手段存在多种缺点，如检查种类多、灵敏度和特异度低、易受药物和精神状况等因素的影响；检测时间要求苛刻等。肥厚型心肌病是常染色体显性遗传性疾病，60％～70％为家族性，30％～40％为散发性，家族性病例和散发病例、儿童病例和成年病例具有同样的致病基因突变。目前已证实，至少14个基因突变与肥厚型心肌病的发病有关，其中有10种是编码肌小节结构蛋白的基因，绝大部分突变位于这些基因。目前，基因检测是确诊肥厚型心肌病的一种重要手段，基于该疾病的罕见性，因此，任何一个或一组肥厚型心肌病的相关基因的发现与提出都将是对本领域的重要技术贡献。
技术实现思路
本专利技术提供一个新的MYBPC3基因的变异位点，及其检测试剂盒，用于临床(辅助)诊断肥厚型心肌病，为携带肥厚型心肌病致病变异的家庭提供遗传阻断，提高优生优育质量。本专利技术通过对肥厚型心肌病的家系成员进行分析，意料不到地发现了：家系中的肥厚型心肌病患者具有MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异，家系中的未患病成员均未检测到该变异，说明该变异与肥厚型心肌病密切相关。以上发现通过相当数量的无关样本得以验证，基于肥厚型心肌病的患病罕见性，样本包括320名表型健康的对照成员和1例肥厚型心肌病的患者成员。经验证：320名表型健康的对照成员均未检测到该变异；1例肥厚型心肌病的患者成员检测到MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异。进一步扩大阴性样本数量，在扩大至1172名的随机的表型健康的对照成员的志愿者样本范围内，均未检测到该变异。进一步扩大阳性样本数量，在扩大至2名的随机患者成员的志愿者样本范围内，均检测到该变异。以上，说明该变异能够用于肥厚型心肌病的检测。基于上述发现，本专利技术所要解决的技术问题是，提供一个新的肥厚型心肌病相关的致病基因变异，同时提供该变异的检测方法和试剂盒，以及它们在临床辅助诊断肥厚型心肌病中的用途。首先，本专利技术提供了一种突变基因，所述变异为MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异(MYBPC3:p.Ala176Prohet)。查询人群频率数据库发现该变异为罕见变异(千人基因组：无，ESP6500：无，ExAC：无)。在发现此变异之前，现有数据库中均未有报道病症相关家系携带有该变异，数据库包括但不限于中国各地区人群。对其通过多个生物信息预测软件(包括SIFT和Polyphen-2等)进行交叉预测，结果多为有害(SIFT为“D”，Polyphen-2为“D”，MutationTaster_pred为“D”，VEST3评分为“0.884”，其他为“3个D/1个T/1个M”)，氨基酸由非极性的丙氨酸变为非极性的脯氨酸，提示该变异所致的氨基酸改变可能会对蛋白功能产生影响。查询数据库发现该位置的氨基酸在脊椎动物中保守性好。查询interpro数据库，发现该位点位于心肌肌球蛋白结合蛋白C的Immunoglobulin-likedomain(IPR007110)区。查询ClinVar、HGMD数据库未发现该变异，文献检索未发现该变异与疾病相关的报导。根据现有证据：该变异为罕见变异、本地数据库频率为0、软件预测该变异可能会对蛋白功能产生影响、该位置氨基酸在脊椎动物中保守性好，认为该变异为可疑致病变异(C1级)。本专利技术还提供了检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂在制备肥厚型心肌病基因检测试剂中的用途。如前述的用途，所述的试剂包括检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂；还包括任选的用于扩增包含人类MYBPC3基因编码区第526位碱基的核酸片段的相关试剂。如前述的用途，所述检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的方法包括但不限于现有技术中对基因变异位点的任何可选检测方法：例如Sanger测序、NGS测序、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、单链构象多态性(SSCP)或等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(ASO)。如前述的用途，包括但不限于对人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异进行定性和/或定量检测。如前述的用途，所述的定量检测包括但不限于现有技术中对基因的任何可选检测方法，例如荧光定量PCR。如前述的用途，所述检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂为测序用试剂、荧光定量PCR试剂、限制性酶切片段长度多态性方法用试剂、单链构象多态性分析用试剂或者等位基因特异的寡聚核苷酸杂交用试剂。本专利技术还提供了一种肥厚型心肌病的基因检测试剂盒，它包括任选的用于检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂。如前述的试剂盒，所述的试剂包括检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂；还包括任选的用于扩增包含人类MYBPC3基因编码区第526位碱基的核酸片段的相关试剂。如前述的试剂盒，所述检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂为测序试剂。如前述的试剂盒，所述检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的相关试剂包括但不限于现有技术中对基因变异位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种MYBPC3突变基因，其特征在于，包含人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异。/n

【技术特征摘要】
1.一种MYBPC3突变基因，其特征在于，包含人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异。


2.权利要求1所述的MYBPC3突变基因在制备肥厚型心肌病的检测试剂盒中的用途。


3.检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的试剂在制备肥厚型心肌病的检测试剂盒中的用途。


4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述的检测试剂盒为基因检测试剂盒。


5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的试剂为测序试剂。


6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述检测人类MYBPC3基因c.526G>C杂合错义变异的试剂为Sanger测序试剂、荧光定量PCR试剂、限制性酶切片段长度多态性方法用试剂、单链构象多态性分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，李九翔，张陆明，侯青，梁庆渊，刘锋，赵娜娜，赵亮，师双峰，刘昕超，惠汝太，
申请(专利权)人：百世诺北京医疗科技有限公司，百世诺北京医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11