一种枯草芽孢杆菌菌株及其微生态制剂和应用制造技术

本发明专利技术公开了一株枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌1‑c‑7(Bacillus subtilis)，于2019年3月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.17348。该菌株是从鳜鱼中分离获得，具有不溶血，高产蛋白酶等特性，且对多种水产养殖致病菌具有良好的抑菌作用，性能优于非鳜鱼源枯草芽孢杆菌2#和鳜鱼源枯草芽孢杆菌1‑n‑6。通过动物实验发现其能有效提高水产动物肝脏组织的健康水平，增加肠壁肌肉厚度，肠道益生菌的丰度，降低有害菌的丰度，增强鳜鱼的氨基酸、碳水化合代谢、糖链的合成和代谢。显著增强鳜鱼对嗜水气单胞菌感染的抵抗力。可作为饲料添加剂和发酵剂应用于水产养殖中，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌菌株及其微生态制剂和应用
本专利技术属于水产微生态领域，特别涉及一种芽孢杆菌菌株及其在水产动物养殖中的应用。
技术介绍
翘嘴鳜(Sinipercachuatisi)为鳜鱼的一种，为我国特有，隶属于鲈形目暖鲈科鳜亚科。与斑鳜和大眼鳜相比，翘嘴鳜具有分布广、个体大、生长速度较快、肉质良好且营养丰富等特性，为人工养殖最为理想的品种，在市场上占有较大的销售份额。目前，翘嘴鳜较为普遍的养殖模式依然是活饵饲喂，所以一般在养殖地区会配套有饵料鱼养殖。这种养殖模式具有以下弊端，一、增加了养殖的成本和工作量；二、饵料鱼本身也是病原的载体，易使鳜鱼感染疾病；三、由于饵料鱼的季节性，限制了湖北和江西等主养区冬季鳜鱼的养殖；四、鳜鱼在生长周期内易感染多种疾病，活饵投喂使药物很难被鳜鱼吸收，达不到治病的目的。多年的研究表明，在一定的条件下，鳜鱼通过驯化可以摄食配合饲料。但是，养殖实践表明，鳜鱼长期摄食配合饲料，肝脏易发生病变，出现白肝、花肝等症状。分析可能是因为鳜鱼饲料中蛋白含量较高，鳜鱼摄食高蛋白饲料后，诱发肝脏脂肪积累，破坏肝功能，干扰鱼类正常生理生化代谢，最终导致多种疾病的产生。由于鳜鱼为肉食性鱼类，若降低饲料中的蛋白含量，易造成其他不良影响，如生长受阻，免疫力下降等。针对鱼类因蛋白含量带来的肝脏问题，目前的解决方法有以下几种：1、降低饲料中的蛋白含量；2、改变饲料中的蛋白来源种类；3、饲料中添加一些蛋白酶类，帮助蛋白质的消化吸收。4、增加饲料中纤维的含量，帮助消化；5、饲料中添加具有产蛋白酶功能的微生态制剂等。鳜鱼为肉食性鱼类，降低饲料中蛋白含量或者将动物性蛋白换成植物性蛋白，都将对鳜鱼的生长带来不利的影响。饲料中添加酶制剂，有助于动物对营养的消化，但是会增加养殖成本，且酶不耐高温，对饲料工艺要求较高。饲用微生物制剂不仅能促进动物胃肠道正常微生物区系的建立，增强机体的免疫力，减少疾病的发生，提高动物增重率，改善产品质量，还能产生多种氨基酸、维生素及一些未知促生物质，抑制肠道内病原菌的生长，减少氨等有害物质的产生。具有明显的经济效益和社会效益。芽孢杆菌(Bacillus)是一类能产生抗力内生孢子的革兰氏阳性菌。已有大量的研究表明芽孢杆菌能够产生营养物质，促进水生动物生长，提高动物体内消化酶的活性，提高机体免疫力，净化养殖环境，减少动物病害等。其中枯草芽孢杆菌作为模式菌株，具有合成并分泌多种消化酶，促进动物的生长，在生长过程中可以产生多种抑菌物质，能迅速消耗肠道中的游离氧，促进有益厌氧菌生长等特征，被广泛的应用到不同的行业内。但是，不同的枯草芽孢杆菌的性能差异较大，且不同来源的同一株菌株性能也有区别。一般情况下，在应用中要求菌株来源与应用的目标相同或相似，才会使其发挥有效的作用。目前，关于枯草芽孢杆菌的研究较多，但是鳜鱼源枯草芽孢杆菌的应用较少，且因为鳜鱼终生只摄食活饵的天性，使有益菌很难得到真正的应用。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一株具有优良特性的枯草芽孢杆菌。本专利技术的一个目的在于提供上述枯草芽孢杆菌在鳜鱼养殖中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一株具有高产蛋白酶活性，且抑菌活性较好的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，名称为枯草芽孢杆菌1-c-7，于2019年3月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCCNo.17348。所述的枯草芽孢杆菌1-c-7从鳜鱼肠道中分离纯化获得。所述的枯草芽孢杆菌1-c-7的培养温度优选为37℃。所述的枯草芽孢杆菌1-c-7的培养基优选为LB培养基。利用细菌通用引物对筛选出的菌株进行16srDNAPCR扩增后鉴定，部分序列如SEQIDNo.1所示。经NCBI序列比对结果相似性最高(99％)的是枯草芽孢杆菌，故分子鉴定1-c-7为枯草芽孢杆菌。本专利技术还提供包含该枯草芽孢杆菌1-c-7的微生态制剂，其中包含枯草芽孢杆菌1-c-7发酵菌粉。本专利技术还提供含有所述的枯草芽孢杆菌或者所述的水产微生态制剂的饲料或饲料添加剂。进一步，所述饲料或饲料添加剂中所述的枯草芽孢杆菌菌粉的添加量为0.1～10g/kg。进一步，所述饲料或饲料添加剂活菌数为1×105～1×107CFU/g。在本专利技术一个实施方案中，所述菌粉的制备方法如下：将所述枯草芽孢杆菌1-c-7进行发酵培养得到菌液，通过喷雾干燥制成菌粉。所述枯草芽孢杆菌1-c-7的发酵方法：(1)种子培养液组成如下：胰蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，NaCl1％。发酵培养基组成如下：玉米面0.5％，黄豆饼粉1％，蔗糖0.4％，鱼粉0.6％，KH2PO40.1％，FeSO4.7H2O0.025％，MgSO4.7H2O0.05％，MnSO40.024％，CaCO30.1％，消泡剂0.05％。(2)发酵步骤及条件如下：种子液培养：将待发酵菌株接种到种子培养液中，培养中pH值7.0～7.5，温度35～38℃，转速150～180rpm。发酵罐培养：以体积比为1％～4％的接种量向发酵培养基中接入培养10～14h的所述枯草芽孢杆菌种子液，发酵过程中pH值7.0～7.5，发酵温度35～38℃，转速200～300rpm，通气比1:0.2～0.5vvm，罐压0.03～0.07MPa。发酵过程中取少量菌液，镜检枯草芽孢杆菌的出孢情况，发酵时间20～28h。喷雾干燥：当镜检枯草芽孢杆菌出孢率大于90％，且没有明显的自溶现象时，停止菌株发酵。在枯草芽孢杆菌1-c-7发酵菌液中加入8％～15％w/v的玉米淀粉作为保护剂，搅拌均匀后进行喷雾干燥。喷雾干燥条件为：进风口温度150～180℃，出风口温度70～90℃，进料速度1～3L/h。收集得到枯草芽孢杆菌干粉制剂。所述菌粉枯草芽孢杆菌的活菌数为7.8×109～4.3×1010CFU/mL。本专利技术还提供所述的枯草芽孢杆菌1-c-7或者所述的水产微生态制剂在制备改善鳜鱼肝脏功能药物中的应用。具体的，包括利用该菌株或者复合微生态制剂制备成改善鳜鱼肝脏功能的功能制剂。本专利技术还提供所述的枯草芽孢杆菌1-c-7或者所述的水产微生态制剂在制备抑制有害细菌药物中的应用。具体的，包括利用该菌株或者复合微生态制剂制备成有害细菌的抑制剂。具体的，所述的有害细菌包括可引发人感染中毒的嗜水气单胞菌、大肠杆菌；还包括水产常见的溶藻弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌。与现有技术相比，本专利技术具有以下优势：所述的枯草芽孢杆菌1-c-7具有耐热性，高产蛋白酶，不溶血等特性，且对多种水产病原菌具有抑制作用，与其他菌株相比具有明显的优势。通过动物实验发现，其能有效提高水产动物肝脏组织的健康水平，增加肠壁肌肉厚度，增加肠道益生菌的丰度，降低有害菌的丰度，增强鳜鱼的氨基酸、碳水化合代谢、糖链的合成和代谢。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株1-c-7，其保藏编号为CGMCCNo.17348。/n

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌株1-c-7，其保藏编号为CGMCCNo.17348。


2.一种水产微生态制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。


3.根据权利要求2所述的水产微生态制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌菌粉。


4.根据权利要求3所述的水产微生态制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌菌粉的活菌数为7.8×109～4.3×1010CFU/mL。


5.含有权利要求2-4任意一项所述的水产微生态制剂的饲料。


6.根据权利要求5所述的饲料，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的活菌数为1×105CFU/g～1×107CFU/g。


7.权利要求1所述的芽孢杆菌或权利要求2-4任意一项所述的水产微生态制剂在鳜鱼养殖中的应用。


8.权利要求1所述枯草芽...

【专利技术属性】
技术研发人员：易敢峰，邵根伙，朱传忠，班赛男，李栋，周建成，汪攀，陈晶，刘韬，夏冬梅，
申请(专利权)人：福建大北农水产科技有限公司，武汉大北农水产科技有限公司，北京大北农科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35