大肠癌的检测试剂盒或装置以及检测方法制造方法及图纸

本发明专利技术提供大肠癌的检测用试剂盒或装置、以及检测方法。一种大肠癌检测用试剂盒或装置，其包含能够与受试体的检体中的miRNA特异性结合的核酸，以及一种检测大肠癌的方法，其包括体外测定该miRNA。包括体外测定该miRNA。包括体外测定该miRNA。

【技术实现步骤摘要】
大肠癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
[0001]本申请是申请日为2015年6月12日、申请号为201580031244.9、专利技术名称为“大肠癌的检测试剂盒或装置以及检测方法”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及用于检查受试体有无罹患大肠癌的、包含能够与特定的miRNA特异性结合的核酸的大肠癌的检测用试剂盒或装置、以及包含使用该核酸来测定该miRNA的表达量的大肠癌的检测方法。

技术介绍

[0003]大肠是积存被消化吸收的残留的肠内容物，吸收水分的同时形成大便的脏器。大肠从盲肠开始，接着连接升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠、直肠、肛道。根据国立研究开发法人国立癌症研究中心癌症对策信息中心所公开的2011年的日本国内的各部位癌症的统计，大肠癌罹患人数为112,772人，即日本人约14人中1人罹患大肠癌，是罹患数为第2位的癌症部位。此外将由大肠癌导致的死亡数男女合并，则上升至45,744人，是死亡数为第3位的癌症部位。此外，据说在美国，以约20人中1人的比例发生大肠癌，美国的2014年的推定大肠癌罹患人数也上升至96,830人，其中认为约40,000人死亡(非专利文献1)。
[0004]大肠癌的进行度在非专利文献2中规定，根据肿瘤的扩散(Tis、T1～T4)、淋巴节转移(N0、N1a～c、N2a～b)、远处转移(M0、M1a～b)的程度，分为0期(Tis/N0/M0)、I期(T1～T2/N0/M0)、II期(T3～T4/N0/M0)、IIA期(T3/N0/M0)、IIB期(T4a/N0/M0)、IIC期(T4b/N0/M0)、III期(N1～2/M0)、IIIA期(T1～2/N1/M0和T1/N2a/M0)、IIIB期(T3～T4a/N1/M0和T2～T3/N2a/M0和T1～T2/N2b/M0)、IIIC期(T4a/N2a/M0和T3～T4a/N2b/M0和T4b/N1～2/M0)、IVA期(M1a)、IVB期(M1b)。
[0005]大肠癌的生存率根据进行度的不同而不同，非专利文献1中分为结肠癌和直肠癌而报告了下述统计值。报告了结肠癌的5年相对生存率是I期为74％、IIA期为67％、IIB期为59％、IIC期为37％、IIIA期为73％、IIIB期为46％、IIIC期为28％、IV期为6％。此外报告了，直肠癌的5年相对生存率是I期为74％、IIA期为65％、IIB期为52％、IIC期为32％、IIIA期为74％、IIIB期为45％、IIIC期为33％、IV期为6％。以上可知，进行度低的大肠癌的生存率高。因此，如果可以早期发现、治疗大肠癌，则大大有助于生存率的提高。
[0006]大肠癌的治疗主要是开腹手术、腹腔镜手术，往往在手术后还并用抗癌剂治疗、放射线治疗(非专利文献1)。特别是对于早期的大肠癌，有时可以应用不开腹就可以治疗的内窥镜手术。
[0007]如非专利文献1所记载的那样，大肠癌的检查中，广泛普及了便潜血检查、内窥镜检查。特别是便潜血检查便宜且是非侵袭的，能够在自已家中实施，因此美国癌症协会推荐每年接受便潜血检查诊断。进一步，为了研究存在癌症的部位、扩散，除了大肠内窥镜检查以外，还实施了灌肠造影检查、CT检查、MRI检查等图像检查。此外，对于已经诊断为大肠癌的患者，以预后观察和治疗效果观察为目的，有时实施了CEA、CA19
‑
9等血液肿瘤标志物检
查(非专利文献1)。
[0008]虽然是研究阶段，但如专利文献1～4所示那样，有下述报告：通过以血液为代表的生物体样品中的微小RNA(miRNA)的表达量、或通过将miRNA的表达量与其它蛋白质标志物的表达量进行组合，从而检测大肠癌。
[0009]专利文献1中示出了使用大肠癌组织中的hsa
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miR
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92a
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5p、hsa
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miR
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128
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5p、hsa
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miR
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24
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3p来检测大肠癌、其它癌症的方法。
[0010]专利文献2中示出了使用血浆中的hsa
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miR
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1233
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5p、hsa
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miR
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1225
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3p来检测大肠癌的方法。
[0011]专利文献3中示出了使用大肠组织、便中的hsa
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miR
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1231、hsa
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miR
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423
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5p、hsa
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miR
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1268a等多个miRNA来检测大肠癌的方法。
[0012]专利文献4中示出了使用组织中的hsa
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miR
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150
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3p、miR
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92a
‑2‑
5p等来检测大肠癌的方法。
[0013]现有技术文献
[0014]专利文献
[0015]专利文献1:国际公开第2007/081740号
[0016]专利文献2:美国专利申请公开第2013/102487号说明书
[0017]专利文献3:美国专利申请公开第2012/088687号说明书
[0018]专利文献4:日本特表2009
‑
531019号公报
[0019]非专利文献
[0020]非专利文献1:American Cancer Society“Colorectal Cancer”，2013年监修，p.5～6，17～28，33～，45～54，67～71
[0021]非专利文献2:Sobin，L.等，“TNM Classification of Malignant Tumours第7版”2010年，p.94
‑
99
[0022]非专利文献3:Allison，JE.等，1996年，The New England Journal of Medicine，第334(3)卷，p.155
‑9[0023]非专利文献4:Palmqvist，R.等，2007年，Diseases of colon and rectum，第46(11)卷，p.1538
‑
44

技术实现思路

[0024]专利技术所要解决的课题
[0025]本专利技术的课题在于发现新的大肠癌肿瘤标志物，提供可以使用能够与该标志物特异性结合的核酸而有效地检测大肠癌的方法。也有作为大肠癌的1次检查而现在广泛普及了的便潜血检查在出于痔等非癌症理由而出血的情况下也会判定为阳性，另一方面，不能检测未出血的早期的大肠癌，错过90％以上的大肠异常(包含癌症)这样的报告(非专利文献1)。具体的便潜血检查的敏感度根据使用的检查试剂盒为37％～79.4％，大幅不同，此外，认为特异度为86.7％～9本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够与作为大肠癌标志物的选自miR
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8072、miR
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4257、miR
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6787
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5p、miR
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6780b
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4497、miR
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6085、miR
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6752
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5p和miR
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3p中的至少1个以上多核苷酸特异性结合的核酸的用途，用于制造大肠癌的检测用试剂盒。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述核酸为选自下述(a)～(e)所示的多核苷酸中的多核苷酸，(a)由序列号14、2～13、15～171和606～614的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(b)包含序列号14、2～13、15～171和606～614的任一项所示的碱基序列的多核苷酸，(c)由与序列号14、2～13、15～171和606～614的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(d)包含与序列号14、2～13、15～171和606～614的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，和(e)与所述(a)～(d)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。
3.根据权利要求1或2所述的用途，所述试剂盒进一步包含能够与作为其它大肠癌标志物的选自miR
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1231、miR
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23a
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4476和miR
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6090中的至少1个以上多核苷酸特异性结合的核酸。4.根据权利要求3所述的用途，其中所述核酸为选自下述(f)～(o)所示的多核苷酸中的多核苷酸，(f)由序列号172～180的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(g)包含序列号172～180的任一项所示的碱基序列的多核苷酸，(h)由与序列号172～180的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(i)包含与序列号172～180的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，(j)与所述(f)～(i)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸，(k)由序列号181～194的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(l)包含序列号181～194的任一项所示的碱基序列的多核苷酸，(m)由与序列号181～194的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(n)包含与序列号181～194的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，和(o)与所述(k)～(n)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。5.根据权利要求1或2所述的用途，所述试剂盒包含能够与选自权利要求1或3记载的全部大肠癌标志物中的至少2个以上多核苷酸分别特异性结合的至少2个以上核酸。6.能够与作为大肠癌标志物的选自miR
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8072、miR...

【专利技术属性】
技术研发人员：小园聪子，信正均，近藤哲司，须藤裕子，河内淳平，落合淳志，小岛基宽，
申请(专利权)人：国立研究开发法人国立癌症研究中心，
类型：发明
国别省市：