一种25-羟基维生素D及其代谢物的解离剂及其制备方法、应用技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，具体涉及一种25

【技术实现步骤摘要】
一种25
‑
羟基维生素D及其代谢物的解离剂及其制备方法、应用


[0001]本专利技术涉生物
，具体涉及一种25
‑
羟基维生素D及其代谢物的解离剂及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]维生素D作为一种类固醇物质，其主要包含两类，一类为麦角钙化醇(维生素D2)，另一类为胆钙化醇(维生素D3)。人类获取维生素D主要通过日照，通过紫外线的作用使皮肤中的7
‑
脱氢胆固醇转化为维生素D3，或者通过食物获取人体所需的维生素D2和维生素D3。维生素D会在维生素D结合蛋白的作用下转移到肝脏和肾脏，在肝脏内维生素D会被代谢为25
‑
羟基维生素D，进一步在肾脏作用下转化为1，25二羟基维生素D。在人体内循环中的25
‑
羟基维生素D是维生素D的主要存在形式，其半衰期长达3周，相比含量低、半衰期短暂的1，25二羟基维生素D，25
‑
羟基维生素D更适合作为待测物去反映人体真实的维生素D含量。维生素D结合蛋白是一种古老的微量蛋白质，其与待测物牢固结合，故若需准确测量样本中的25
‑
羟基维生素D，亟需获取高效稳定的解离方法使25
‑
羟基维生素D从维生素D结合蛋白上快速解离。
[0003]现有技术报道的用于解离维生素D的解离剂大多采用单一种类的表面活性剂，如：专利技术专利CN108872614A涉及至少一种氟代烷基类表面活性剂和至少一种具有1至4个碳原子的醇用于从维生素D结合蛋白解离维生素D和/或维生素D代谢物的用途。专利技术专利106199015A提供了一种用于血清样品检测的维生素D释放剂，其释放剂包括全氟辛酸0.2％
‑
0.5％，二甲亚砜0.1％
‑
0.5％，乙二醇0.1％
‑
0.5％，乙醇0.01％
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0.1％，缓冲液0.05M的TRIS
‑
HCL溶液。专利技术专利CN 101273272 B公开一种用于从维生素D结合蛋白释放维生素D的试剂组合物值，pH为3.8
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4.8，包括：5
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30vol％的一种或多种选自二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)和N
‑
甲基吡咯烷酮(N
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MP)的两性试剂以及任选地0.7
‑
8vol％的短链C1
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C3醇。经研究发现，使用单一的表面活性剂无法将25
‑
羟基维生素D及其代谢物从维生素D结合蛋白上充分释放出来，解离效果不理想。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种25
‑
羟基维生素D及其代谢物的解离剂及其制备方法、应用，本专利技术解离剂对25
‑
羟基维生素D的解离效率高、稳定性强，能够使25
‑
羟基维生素D及其代谢物从结合蛋白上充分释放，从而得到更准确、有效的检测。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种25
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羟基维生素D及其代谢物的解离剂由表面活性剂、缓冲剂、溶剂、pH调节剂和水组成；
[0007]所述表面活性剂由8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸和氟代烷基类表面活性剂组成；
[0008]所述氟代烷基类表面活性剂为全氟辛酸或其盐、全氟庚酸或其盐中的一种或几
种；
[0009]所述缓冲剂由BIS
‑
TRIS和氯化钠组成。
[0010]氟代烷基类表面活性剂与维生素D结合蛋白之间可能存在疏水作用力、氢键和静电引力，引起维生素D结合蛋白上的不同氨基酸残基附近出现亲水性环境增强或疏水性环境强的现象，导致蛋白质发生松散现象和折叠构象，起到解离25
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羟基维生素D及其类似物的功效。然而，25
‑
羟基维生素D与维生素D结合蛋白结合的非常牢固，埋藏在维生素D结合蛋白结构深位点的25
‑
羟基维生素D不能得到完全的解离，因此，现有技术报道的采用单一的氟代烷基类表面活性剂无法将25
‑
羟基维生素D完全解离出来。
[0011]本专利技术提供的解离剂将氟代烷基类表面活性剂与苯胺类表面活性剂联用，能够有效的将与维生素D结合蛋白牢固结合的那部分维生素D彻底地置换出来，解离效率更高，且稳定性较强。而且，利用本专利技术构建的缓冲体系能够有效保护氟代烷基类表面活性剂和苯胺类表面活性剂的形成复合物，使其整体发挥高效率解离的功能，能够使本专利技术解离剂在不同环境的影响下充分发挥解离功效。
[0012]一些实施方案中，本专利技术解离剂中，各组分用量为：
[0013]以重量体积百分比g/ml计，所述表面活性剂占所述解离剂的重量体积百分含量为0.5％
‑
10％；所述缓冲剂占所述解离剂的重量体积百分含量为1％
‑
10％；所述溶剂占所述解离剂的重量体积百分含量为2％
‑
20％；
[0014]所述pH调节剂的用量为使得所述溶剂、缓冲剂的混合体系的pH为6～10；
[0015]余量为水。
[0016]以上各组分的质量百分含量之和为100％。
[0017]一些实施方案中，8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸与氟代烷基类表面活性剂的质量比为1:(2～10)。
[0018]一些实施方案中，所述苯胺类表面活性剂为8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸；所述氟代烷基类表面活性剂为全氟辛酸或全氟庚酸。
[0019]一些具体实施例中，所述苯胺类表面活性剂为8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸；所述氟代烷基类表面活性剂为全氟辛酸，8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸和全氟庚酸的质量比为1:2。另一些具体实施例中，所述苯胺类表面活性剂为8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸；所述氟代烷基类表面活性剂为全氟庚酸；8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸和全氟辛酸的质量比为1:10。
[0020]一些实施方案中，所述溶剂由二甲亚砜和二甲基甲酰胺组成。其中，二甲基甲酰胺与二甲亚砜的质量比为(1～5):1。一些具体实施例中，二甲基甲酰胺与二甲亚砜的质量比为1:1或5:1。
[0021]本专利技术对pH调节剂的种类没有特殊要求，能够调节溶液pH至6～10即可。本专利技术中所述pH调节剂为盐酸。一些具体实施例中，pH调节剂优选为6mol/L盐酸。
[0022]一些实施方案中，所述苯胺类表面活性剂为8
‑
苯胺基
‑1‑
萘磺酸；所述氟代烷基类表面活性剂为全氟辛酸。
[0023]一些具体实施例中，以重量体积百分比g/ml计，所述解离剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种25
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羟基维生素D及其代谢物的解离剂，其特征在于，由表面活性剂、缓冲剂、溶剂、pH调节剂和水组成；所述表面活性剂由8
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苯胺基
‑1‑
萘磺酸和氟代烷基类表面活性剂组成；所述氟代烷基类表面活性剂为全氟辛酸或其盐、全氟庚酸或其盐中的一种或几种；所述缓冲剂由BIS
‑
TRIS和氯化钠组成。2.根据权利要求1所述的解离剂，其特征在于，各组分用量为：以重量体积百分比g/ml计，所述表面活性剂占所述解离剂的重量体积百分含量为0.5％
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10％；所述缓冲剂占所述解离剂的重量体积百分含量为1％
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10％；所述溶剂占所述解离剂的重量体积百分含量为2％
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20％；余量为水；所述pH调节剂的用量为使得所述溶剂和缓冲剂的混合体系的pH为6～10。3.根据权利要求1所述的解离剂，其特征在于，所述表面活性剂中，苯胺类表面活性剂与氟代烷基类表面活性剂的质量比为1:(2～10)。4.根据权利要求1所述的解离剂，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄巍，靳增明，张玉娇，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：