用于新型冠状病毒2019-nCoV核酸快速检测的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于新型冠状病毒2019

【技术实现步骤摘要】
用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及冠状病毒检测
，具体来说，涉及一种用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(2019
‑
nCoV)感染是一种传染性极强的感染性疾病，其主要临床表现从轻微呼吸道感染症状、消化系统症状等，到严重的呼吸系统感染导致急性呼吸衰竭而死亡。新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60
‑
140nm。其基因特征与SARSr
‑
CoV和MERSr
‑
CoV有明显区别。目前研究显示2019
‑
nCoV与蝙蝠SARS样冠状病毒(bat
‑
SL
‑
CoVZC45)同源性达85％以上，因此2019
‑
nCoV应归入“SARS样”或者“类SARS”的冠状病毒。2019
‑
nCoV与SARS同属于ⅡB组的β冠状病毒，该病毒属于单股正链RNA病毒，其基因组长度约为30,000bp，在目前已知的RNA病毒中是最大的，具有很强的感染性和致死率。近期研究发现，该病毒潜伏期最长可达14天，并且处于潜伏期的病人依然具有很强感染性。由此可见，针对2019
‑
nCoV的快速准确的检测对于新型冠状病毒感染的肺炎的及时诊断及疫情的防控至关重要。
>[0003]目前针对2019
‑
nCoV的核酸检测，应用最为广泛的是基于Taqman探针法的实时荧光定量PCR技术。该方法在探针的5
′
端和3
′
端分别标记报告基团(R)和淬灭基团(Q)，构成能量传递结构。当探针完整时，R基团发出的荧光被Q基团所抑制，不能发出荧光，而当探针被分解后，抑制作用解除，R基团发出荧光。随着PCR产物的增加，荧光信号也同步增加。可通过检测系统观察到信号的变化，从而实现实时定量分析。虽然Taqman探针法荧光定量PCR对于2019
‑
nCoV的核酸检测敏感性高，特异性强，但需要专业的实验室和昂贵的仪器设备，操作复杂，专业性要求高，且用时较长，难以在疫情突发时满足基层单位筛查防控的需求。

技术实现思路

[0004]针对相关技术中的上述技术问题，本专利技术提出一种用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒及检测方法，能够克服现有技术的上述不足。
[0005]为实现上述技术目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0006]一种用于新型冠状病毒2019
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nCoV核酸快速检测的试剂盒，包括2019
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nCoV ORF1ab反应液、2019
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nCoV N反应液、RT
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RPA反应管、RT
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RPA反应缓冲液、RT
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RPA反应启动液、阳性质控品、阴性质控品；
[0007]所述2019
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nCoV ORF1ab反应液包含特异性检测2019
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nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的RPA扩增引物和exo荧光探针、特异性检测内参基因RNaseP的RPA扩增引物和exo荧光探针，所述2019
‑
nCoV N反应液包含特异性检测2019
‑
nCoV N基因特异性保守区域的RPA扩增引物和exo荧光探针、特异性检测内参基因RNaseP的RPA扩增引物和exo荧光探针；
[0008]所述特异性检测2019
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nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的RPA扩增引物中，上游
引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示；所述特异性检测2019
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nCoV N基因特异性保守区域的RPA扩增引物中，上游引物的序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示；所述特异性检测内参基因RNaseP基因的RPA扩增引物中，上游引物的序列如SEQ ID NO:5所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:6所示；
[0009]所述特异性检测2019
‑
nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的exo荧光探针的序列如SEQ ID NO:7所示，所述特异性检测2019
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nCoV N基因特异性保守区域的exo荧光探针的序列如SEQ ID NO:8所示，所述特异性检测内参基因RNaseP的exo荧光探针的序列如SEQ ID NO:9所示。
[0010]进一步地，所述特异性检测2019
‑
nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的exo荧光探针内部THF分子两侧分别带有荧光基团和淬灭基团；所述特异性检测2019
‑
nCoV N基因特异性保守区域的exo荧光探针内部THF分子两侧分别带有荧光基团和淬灭基团；所述特异性检测内参基因RNaseP的exo荧光探针内部THF分子两侧分别带有荧光基团和淬灭基团。
[0011]进一步地，所述RT
‑
RPA反应管采用TwistAmp
TM
exo RT Kit试剂盒中的内含RT
‑
RPA试剂冻干粉的8联管。
[0012]进一步地，所述RT
‑
RPA试剂冻干粉采用TwistAmp
TM
exo RT Kit试剂盒中的试剂冻干粉，组分主要包括逆转录酶、重组酶、链置换DNA聚合酶、dNTPs。
[0013]进一步地，所述RT
‑
RPA反应缓冲液采用TwistAmp
TM
exo RT Kit试剂盒中的RT
‑
RPA反应缓冲液。
[0014]进一步地，所述RT
‑
RPA反应启动液为TwistAmp
TM
exo RT Kit试剂盒中的MgAc溶液，浓度为280mM。
[0015]进一步地，所述阳性质控品为含有2019
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nCoV病毒靶标基因假病毒与内参假病毒混合液。
[0016]进一步地，所述阴性质控品为灭菌去离子水。
[0017]根据本专利技术的另一方面，提供了一种用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的方法，包括以下步骤：
[0018](1)RNA提取，取待测样本、阳性质控品、阴性质控品，使用RNA提取试剂盒进行RNA提取操作；
[0019](2)RT
‑
RPA反应，使用待测样本及阳性质控品、阴性质控品提取得到的RNA作为模板，使用所述的用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒，其特征在于，包括2019
‑
nCoV ORF1ab 反应液、2019
‑
nCoV N 反应液、RT
‑
RPA反应管、RT
‑
RPA反应缓冲液、RT
‑
RPA反应启动液、阳性质控品、阴性质控品；所述2019
‑
nCoV ORF1ab 反应液包含特异性检测2019
‑
nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的RPA扩增引物和exo荧光探针、特异性检测内参基因RNaseP的RPA扩增引物和exo荧光探针，所述2019
‑
nCoV N 反应液包含特异性检测2019
‑
nCoV N基因特异性保守区域的RPA扩增引物和exo荧光探针、特异性检测内参基因RNaseP的RPA扩增引物和exo荧光探针；所述特异性检测2019
‑
nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的RPA扩增引物中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示；所述特异性检测2019
‑
nCoV N基因特异性保守区域的RPA扩增引物中，上游引物的序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示；所述特异性检测内参基因RNaseP基因的RPA扩增引物中，上游引物的序列如SEQ ID NO:5所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:6所示；所述特异性检测2019
‑
nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的exo荧光探针的序列如SEQ ID NO:7所示，所述特异性检测2019
‑
nCoV N基因特异性保守区域的exo荧光探针的序列如SEQ ID NO:8所示，所述特异性检测内参基因RNaseP的exo荧光探针的序列如SEQ ID NO:9所示。2. 根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒，其特征在于，所述特异性检测2019
‑
nCoV ORF1ab基因特异性保守区域的exo荧光探针内部THF分子两侧分别带有荧光基团和淬灭基团；所述特异性检测2019
‑
nCoV N基因特异性保守区域的exo荧光探针内部THF分子两侧分别带有荧光基团和淬灭基团；所述特异性检测内参基因RNaseP的exo荧光探针内部THF分子两侧分别带有荧光基团和淬灭基团。3.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒，其特征在于，所述RT
‑
RPA反应管采用内含RT
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RPA试剂冻干粉的8联管。4.根据权利要求3所述的用于新型冠状病毒2019
‑
nCoV核酸快速检测的试剂盒，其特征在于，所述RT
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RPA试剂冻干粉包括逆转录酶、重组酶、链置换DNA聚合酶、dNTPs。5.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王清涛，孙喆，樊高威，魏星，
申请(专利权)人：北京市临床检验中心北京华诺奥美基因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：