用于防止细胞伤害的莲子壳萃取物及其用途制造技术

本发明专利技术是关于一种用于防止细胞伤害的莲子壳萃取物及其用途。该莲子壳萃取物是经由一种萃取方法而得，该萃取方法包含：将莲子壳与水以1

【技术实现步骤摘要】
用于防止细胞伤害的莲子壳萃取物及其用途


[0001]本专利技术涉及一种植物萃取物及其用途，尤其涉及一种防止细胞伤害的莲子壳萃取物及其用途。

技术介绍

[0002]氧化压力的产生是体内活性氧物质(Reactive oxygen species，简称ROS)和抗氧化剂防御系统二者失衡的结果，大量的ROS生成会造成细胞中氧化压力升高，进而造成细胞伤害或死亡，甚至导致许多疾病的形成。
[0003]紫外线(Ultraviolet，简称UV)穿过大气层后剩下主要的紫外线可依其波长再细分为UVA(波长320至400nm)以及UVB(波长280至320nm)。其中UVA的穿透力强，连一般透明玻璃都无法阻绝UVA的穿透，是日常生活中最容易曝晒到的紫外线，经由皮肤的吸收会对DNA造成伤害，或使细胞内ROS生成，进而导致细胞伤害或死亡，主要会造成雀斑及黑斑的恶化，并造成皮肤晒黑，也是造成皮肤老化的帮凶。
[0004]有鉴于此，目前极需开发一种用于防止/避免细胞伤害的组合物，以使细胞具有抗氧化能力，且能防止其受紫外线伤害。

技术实现思路

[0005]有鉴于现有技术所面临的问题，本专利技术的一目的在于提供一种用于防止细胞伤害的莲子壳萃取物，其中莲子壳萃取物是经由一种萃取方法而得，此种萃取方法包含：将莲子壳与水以1-5：10-30(1至5：10至30)的固液重量比，混和成为混和物，并将混和物在30-100℃进行均质作用0.5-3小时。
[0006]在本专利技术的一实施例中，混和物除了莲子壳与水之外，还包含果胶酶，其中果胶酶占混合物(进行反应前)的1wt％以下。
[0007]在本专利技术的一实施例中，萃取方法还包含将进行均质作用后的混合物冷却至20-30℃；依序使用400目及5微米的滤网过滤；以及于45-70℃减压浓缩。
[0008]在本专利技术的一实施例中，莲子壳与水的固液重量比为1：20。
[0009]在本专利技术的一实施例中，混和物均质后，在80-90℃进行均质作用1小时。
[0010]在本专利技术的一实施例中，混和物均质后，先在35-45℃进行均质作用1小时，再于80-90℃进行均质作用1小时。
[0011]在本专利技术的一实施例中，莲子壳萃取物包含浓度为至少3毫克/毫升的多酚类化合物，较佳为包含浓度3-7毫克/毫升的多酚类化合物。
[0012]在本专利技术的一实施例中，莲子壳萃取物包含多酚类化合物、类黄酮化合物及微量元素。
[0013]在本专利技术的一实施例中，多酚类化合物为儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷或异槲皮苷。
[0014]在本专利技术的一实施例中，类黄酮化合物为槲皮素、杨梅黄酮或山奈酚；微量元素为
cell，hPBMC)。
[0045]2、培养基：破骨细胞分化培养基(osteoclast differentiation medium)，此破骨细胞分化培养基由添加了10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、1x青霉素/链霉素(Penicillin/Streptomycin)、人类核因子κ-B配体受体致活剂(human RANKL)(40ng/mL)及人类聚落刺激因子(human M-CSF)(25ng/mL)的α-最小必须培养基(α-minimum essential medium，α-MEM)所组成。
[0046]3、GSH检测试剂(购自abcam，型号Ab112132)。
[0047]B.实验步骤
[0048]1、于6孔培养盘中，每孔培养基中植入2x105个人类周边血单核球细胞(于后方步骤中将略称为细胞)。
[0049]2、于37℃培养24小时。
[0050]3、将细胞分为二组：第一组为空白组(Mock)；第二组(实验组)则加入莲子壳萃取物，使加入莲子壳萃取物后，整体溶液中的莲子壳萃取物浓度为0.0625mg/mL；接着于37℃培养24小时。
[0051]4、收集细胞。
[0052]5、用磷酸盐缓冲生理盐水(Phosphate-Buffered Saline，PBS)(购自Gibco)冲洗一次。
[0053]6、重悬浮细胞(Resuspend cells)于1毫升的PBS。
[0054]7、以GSH试剂(1：1000)将细胞染色15分钟。
[0055]8、用PBS冲洗一次。
[0056]9、重悬浮细胞(Resuspend cells)于200微升的PBS。
[0057]10、通过流式细胞仪(购自BD Accuri，型号C6Plus)分析相对的荧光异硫氰酸盐(FITC)信号。
[0058]11、检测出的数值以微软EXCEL软件，利用Student t检定分析数值间的统计显着性，其结果如图1所示。其中，相较于空白组，***表示p<0.001。
[0059]由图1结果可知，有加入莲子壳萃取物的第二组(实验组)细胞，可明显增加其GSH含量(relative GSH content)，使其相对GSH含量为第一组(空白组)细胞的3.5倍。GSH是由麸胺酸、胱胺酸和甘胺酸所组成的三胜肽，其硫醇基(-SH)与氧化还原相关，主要功能为细胞内生性抗氧化的防御，可以对抗ROS的氧化伤害。因此，由图1的结果亦可证实，添加本专利技术实施例一或实施例二萃取而得的莲子壳萃取物，确可提升细胞中GSH含量，增加细胞内氧化还原的能力，以达到细胞抗氧化的功效。
[0060]实施例四：评估细胞抗氧化功效-周边血单核球细胞的ROS伤害检测
[0061]A.实验材料及器材
[0062]1、人类周边血单核球细胞(human peripheral blood mononuclear cell，hPBMC)。
[0063]2、培养基：X-VIVO
TM 10培养基(购自Lonza/产品编号：Cat#04-380Q)。
[0064]3、磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)(购自Gibco)。
[0065]4、2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(2
’
,7
’-
Dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA)(购自Sigma，产品型号SI-D6883-50MG)保存液(stock solution)：将DCFH-DA(购自
Sigma-Aldrich，产品型号SI-D6883-50MG)保存于二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO，购自Sigma-Aldrich)中，浓度为5mg/mL。
[0066]5、过氧化氢(H2O2)(购自Sigma-Aldrich，30wt％的水溶液)。
[0067]6、流式细胞仪(购自BD Accuri)。
[0068]B.实验步骤
[0069]1、于6孔培养盘中，每孔植入含有2x105个人类周边血单核球细胞(于后方步骤中将略称为细胞)的2毫升培养基。
[0070]2、于37℃培养24小时。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于防止细胞伤害的莲子壳萃取物，其特征在于，所述莲子壳萃取物是经由一种萃取方法而得，所述萃取方法包含：将莲子壳与水以1-5：10-30的固液重量比，混和成为一种混和物；使所述混合物在30-100℃进行均质作用0.5-3小时。2.根据权利要求1所述的莲子壳萃取物，其特征在于，所述混和物还包含果胶酶，其中所述果胶酶占所述混合物(进行所述均质作用前)的1wt％以下。3.根据权利要求1或2所述的莲子壳萃取物，其特征在于，所述萃取方法还包含：将进行所述均质作用后的所述混合物冷却至20-30℃；依序使用400目及5微米的滤网过滤前一步骤所得到的所述混合物，得到过滤液；以及将前一步骤所得到的所述过滤液在45-70℃减压浓缩。4.根据权利要求1或2所述的莲子壳萃取物，其特征在于，所述莲子壳与水的固液重量比为1：20。5.根据权利要求1所述的莲子壳萃取物，其特征在于，所述混和物在80-90℃进行所述均质作用1小时。6.根据权利要求2所述的莲子壳萃取物，其特征在于，所述混和物先在35-45℃进行所述均质作用1小时后，再于80-90℃进行所述均质作用1小时。7.根据权利要求1或2所述的莲子...

【专利技术属性】
技术研发人员：林咏翔，姚采涵，
申请(专利权)人：百岳特生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：