检测手足口病的方法技术

本发明专利技术涉及一种从测试受试者获得的样本中检测手足口病(HFMD)的方法。特别地，该方法涉及对这些测试受试者的唾液中蛋白质生物标志物的检测。在优选的实施方案中，该方法包括检测唾液样本中至少一种蛋白质生物标志物的存在和/或量，该蛋白质生物标志物选自由PRX‑IV、豆荚蛋白、SIL1和CREG1组成的组，其中唾液中的该蛋白质生物标志物的存在指示手足口病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测手足口病的方法
本专利技术涉及一种从测试受试者获得的样本中检测手足口病(Hand-Foot-and-MouthDisease，HFMD)的方法。特别地，该方法涉及这些测试受试者的唾液中蛋白质生物标志物的检测。
技术介绍
HFMD是一种看似无关紧要的急性传染病，通常是轻度和自限性的，是一种广泛流行的病毒性疾病，在西太平洋区域每年数百万名婴幼儿深受其害，其是由来自肠道病毒(Enterovirus)属的人类肠道病毒A种(HEV-A)引起的。近年来，柯萨奇病毒A16(CA16)和肠道病毒71(EV71)是HFMD的主要致病因素(WangandLiu,2014)。然而，其他HEV-A血清型如柯萨奇病毒A6(CA6)引起的病例数量激增也有报道。HFMD通常是一种自限性疾病，其特征是发烧和丘疹，有时为斑丘疹，手掌、足底、肘部和躯干皮疹以及口腔溃疡。然而，与EV71相关的HFMD在少数情况下，可能迅速发展为严重神经系统并发症(neurologicalcomplications)，例如无菌性脑膜炎和急性弛缓性脑膜炎。这些神经系统并发症可能反过来迅速发展为心肺衰竭和死亡。虽然神经并发症(neurologiccomplications)在很大程度上与EV71有关，并且据报道也会引起神经系统并发症。由于各种并发症和表现可能由肠道病毒感染引起的，因此，强烈需要对肠道病毒的快速、准确的鉴别，以便可以对感染的患者进行有效隔离，以防止其进一步传播。HFMD通过粪口或飞沫途径迅速传播，目前由医生通过临床症状和表现进行诊断。一般认为，对于轻度病例，不需要额外的实验室检测。但是，上述情况可能会导致误诊，并可能加剧HFMD在非典型和轻度病例中的传播。此外，目前还没有治愈HFMD的方法。治疗选择项仅限于缓解身体症状。因此，当存在导致死亡的神经系统并发症的风险时，对于涵盖引起HFMD的多种病原体的迅速而准确的诊断变得至关重要。实验室诊断HFMD的金标准是对来自临床样本(例如喉咙或表皮囊泡拭子)的病毒分离物的鉴定。肠道病毒可以在人类肌肉横纹肌肉瘤(RD)细胞和非洲绿猴肾(Vero)细胞中分离，然后可以进行病毒RNA的逆转录聚合酶链反应(PCR)、间接免疫荧光和病毒微量中和试验。然而，上述方法相当冗长且费时。尽管最近开发了利用诸如定量实时PCR(qRT-PCR)的现代分子程序的快速诊断方法来解决这些问题，但是由于肠道病毒血清型之间的多种遗传差异，仍需要显着提高这种检测的灵敏度。除了不存在的交叉保护性预防性多价疫苗和有效的广谱抗病毒药物外，缺乏标准化和准确的诊断方法也造成了这种高度传播的传染病的不必要的和潜在的过度的社会经济、财务和/或心理负担。由于实验室基础设施和现场支持有限，在日托中心、学校、社区、机构和门诊场所进行的HFMD诊断通常粗略地依赖于其典型的临床特征。然而，对于无显著性或不典型临床表现而引起的诊断并发症，视觉判断不可避免地导致误诊。因此，不精确的诊断辨别导致不适当的医疗方案或无法控制的疾病传播。因此，开发HFMD即时检验(point-of-caretesting,POCT)对于持续的治疗判断以及及时的临床隔离和针对实际病因的治疗方案都势在必行。如何充分利用病毒动力学是全面诊断导致手足口病的病毒的非穷尽谱的关键瓶颈。因此，在针对多病因性疾病的POC诊断的开发中，以病毒特异性系统宿主特征为方向可能是一种有前景的选择。因此，需要一种用于检测引起HFMD的病毒的改进的方法。
技术实现思路
在本说明书中对明显是先前出版的文件的列举或讨论不必然被认为是承认该文件是现有技术的一部分或是公知常识。本文引用的任何文件均通过引用将其全部内容并入本文。在没有现有的即时检验(point-of-care，POC)诊断平台来进行准确诊断和及时病例隔离的情况下，与手足口病(HFMD)的斗争仍然是一项艰巨的挑战。因此，这项唾液生物标志物发现研究的目的是为实现HFMD的POC诊断奠定基础。有利地，本专利技术采用还原性脱甲基化(reductivedemethylation,R-diMe)化学标记方法与基于高分辨率质谱法(MS)的定量蛋白质组学技术相结合的方法，以筛选HFMD治疗期间整个唾液蛋白质组中普遍调节异常的蛋白质。进一步评估了筛选后的候选物作为HFMD唾液诊断生物标志物的潜力。因此，本专利技术涉及用于检测从个体获得的样本中的HFMD感染的这些蛋白质生物标志物。在本专利技术的一方面，提供了一种用于确定手足口病(hand-foot-and-mouthdisease,HFMD)的方法，该方法包括在唾液样本中检测选自表1中定义的组(如图4所示)的至少一种蛋白质生物标志物的存在和/或量，其中所述唾液样本中所述蛋白质生物标志物的存在指示HFMD。在不同的实施方案中，本专利技术的方法包括测量样本中存在的蛋白质生物标志物的量。例如，可以通过测量由本领域技术人员进行的比色测定法检测到的条带或点的强度来测量该量。另外，可以将获得的结果与阳性和阴性对照样本进行比较。本专利技术用于检测唾液中所述蛋白质生物标志物的存在和/或量，因为获得唾液样本涉及非侵入性技术，这将有助于从诸如婴儿、学步儿童和幼童的患者中较为容易地收集样本，这些患者构成了受到HFMD影响和困扰的大部分人。鉴于该疾病在学校和日托中心中迅速传播，重要的是每天对这些婴儿、幼儿和儿童进行容易、快速的筛查，以便在这种疾病传播到学校或日托中心的其他人之前，可以快速检测任何感染。快速诊断可以使被感染的孩童远离学校人群，从而使疾病的传播最小化或被阻止。这意味着具备一种检测疾病的非侵入性方法将是有利的。本专利技术通过允许使用从儿童获得的唾液样本检测疾病来提供这种优势。唾液样本在进行本检测方法之前不需要任何处理。另外，本方法不必由医学专业人员进行，而是可以由父母和学校教师轻松容易地执行和进行，即，即时检验。与之形成对比的是，对儿童进行血液采集以用于HFMD诊断具有挑战性，并且需要在临床条件下进行。“生物标志物”是指包括任何具有可用于测量疾病进展或治疗效果的特定生物学特性、生化特征或方面的分子指示物。蛋白质和核酸是示例性的生物标志物。特别地，在细胞外检测到的基因组信使可以用作疾病的生物标志物已被普遍接受。特别地，核酸已经在包括血液、尿液和脑脊髓液在内的大多数体液中被鉴定出，并且已成功地被用作疾病的诊断性生物标志物。然而，唾液不是血清的被动“超滤液”，而是包含酶、激素、抗体和其他分子的独特组成。唾液中特异性的和带有信息的生物标志物可望用于诊断疾病和监测人类健康。例如，已在唾液中鉴定出用于监测龋齿、牙周炎、口腔癌和唾液腺疾病的生物标志物。优选地，蛋白质生物标志物选自由PRX-IV、豆荚蛋白(legumain)、SIL1和CREG1组成的组，并且检测到唾液样本中所述生物标志物中的任何一种或其任何组合的存在和/或量指示HFMD。本方法不仅可以通过检测单个蛋白质生物标志物而且可以通过检测与它们中的任何一种的组合来检测手足口病。在不同的实施方案中，使用能与至少一种蛋白质生物标志物结合形成结合复合体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于确定手足口病(HFMD)的方法，所述方法包括在唾液样本中检测选自表1中定义的组的至少一种蛋白质生物标志物的存在和/或量，其中所述唾液样本中的所述蛋白质生物标志物的存在和/或量指示手足口病。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180723 SG 10201806273U1.一种用于确定手足口病(HFMD)的方法，所述方法包括在唾液样本中检测选自表1中定义的组的至少一种蛋白质生物标志物的存在和/或量，其中所述唾液样本中的所述蛋白质生物标志物的存在和/或量指示手足口病。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种蛋白质生物标记物选自由PRX-IV、豆荚蛋白、SIL1和CREG1组成的组，并且检测所述唾液样本中所述生物标志物的任何一种或其任何组合的存在和/或量指示手足口病。


3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述检测至少一种蛋白质生物标志物的存在和/或量的步骤是使用能够结合所述至少一种蛋白质生物标志物以形成结合的复合体的结合剂进行的。


4.根据权利要求3所述的方法，其中所述结合剂是抗体或其片段。


5.根据权利要求3或4中任一项所述的方法，其中所述结合剂标记有可检测的部分。


6.根据权利要求5所述的方法，其中所述可...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱章汉，张美珊，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG