一种破伤风抗原的检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种破伤风抗原的检测方法及其应用，涉及分子生物学技术领域。该破伤风抗原的检测方法，包括如下步骤：以作为破伤风抗原识别探针的核酸适配体为模板形成双链DNA，并以所述双链DNA为模板合成dsDNA模板铜纳米粒子或dsDNA模板银纳米粒子；基于破伤风抗原对所述dsDNA模板铜纳米粒子或所述dsDNA模板银纳米粒子中所述核酸适配体的特异性结合，使其引起信号分子的信号变化，而得到破伤风抗原的检测结果。本发明专利技术的检测方法具有分析速度快、低成本、高灵敏以及易于实现可视化POCT分析的优点，填补了破伤风抗原检测方法和试剂盒的空白，易于实现家庭便捷式和医学检测机构内高灵敏分析。

【技术实现步骤摘要】
一种破伤风抗原的检测方法及其应用
本专利技术涉及分子生物学
，尤其是涉及一种破伤风抗原的检测方法及其应用。
技术介绍
破伤风是一种极为严重的疾病，平均病死率为20％-30％，重症患者高达70％，新生儿及老年人的病死率尤其高。感染破伤风至发病，有一个潜伏期，通常为7-8天，可短至24小时或长达数月、数年。潜伏期越短者，预后越差。虽然，现已有破伤风抗体的酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒可供使用，但其存在分析时间长、成本高、分析灵敏度低、需要大型检测设备、难以构建家庭便携式诊断装置等不足。此外，其最为主要的不足之处在于：抗体的检测只是一种间接方法，且表达量受多种因素的影响，即不能很好的表达机体破伤风感染状况。相似于很多临床生化指标，抗原的含量可以准确提供多种有效信息。然而，现有医学诊断机构内对破伤风抗原(痉挛毒素)的检测处于空白，即现有技术中尚未有针对破伤风抗原痉挛毒素的检测试剂盒，因此，亟需开发一种针对破伤风抗原的快速、低成本、高灵敏的检测方法，以填补现有国内和国际上破伤风诊断的空白。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种破伤风抗原的检测方法及其应用。本专利技术的破伤风抗原的检测方法以破伤风抗原的核酸适配体为识别探针，设计包含该破伤风抗原核酸适配体的双链DNA，以该双链DNA为模板合成dsDNA模板CuNPs或者dsDNA模板AgNPs，然后以CuNPs、AgNPs或QDs为信号分子进行破伤风的检测，本专利技术的破伤风抗原的检测方法具有快速、低成本、高灵敏、以及易于实现可视化POCT分析的优点，本专利技术提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供的一种破伤风抗原的检测方法包括如下步骤：以作为破伤风抗原识别探针的核酸适配体为模板，形成双链DNA，并以所述双链DNA为模板合成dsDNA模板铜纳米粒子或dsDNA模板银纳米粒子；基于破伤风抗原对所述dsDNA模板铜纳米粒子或所述dsDNA模板银纳米粒子中所述核酸适配体的特异性结合，使其引起信号分子的信号变化，而得到破伤风抗原的检测结果。根据一种优选实施方式，所述信号分子包括CuNPs、AgNPs或QDs。根据一种优选实施方式，所述信号分子为QDs。根据一种优选实施方式，所述核酸适配体包括碱基序列如SEQIDNO.1所示的核酸适配体A1或碱基序列如SEQIDNO.2所示的核酸适配体A2。根据一种优选实施方式，所述双链DNA包括以所述核酸适配体A1为长链模板，且通过特异性识别结合形成的包括短链核酸P1和短链核酸P2的dsDNA模板；其中，所述短链核酸P1和所述短链核酸P2的碱基序列分别如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。根据一种优选实施方式，所述双链DNA包括以双核酸适配体A1为短链模板，且通过特异性识别结合形成的包括长链核酸P3的dsDNA模板；其中，所述长链核酸P3的碱基序列如SEQIDNO.5所示。根据一种优选实施方式，所述双链DNA包括以核酸适配体A2为长链模板，且通过特异性识别结合形成的包括短链核酸P4、短链核酸P5和短链核酸P6的dsDNA模板。根据一种优选实施方式，所述短链核酸P4、所述短链核酸P5和所述短链核酸P6的碱基序列分别如SEQIDNO.6、SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示。本专利技术还提供了一种如所述的破伤风抗原的检测方法用于检测破伤风的产品中的应用。根据一种优选实施方式，所述产品包括检测试剂盒。基于上述技术方案，本专利技术的破伤风抗原的检测方法及其应用至少具有如下技术效果：本专利技术的破伤风抗原的检测方法以破伤风抗原的核酸适配体为识别探针，设计包含该破伤风抗原核酸适配体的双链DNA，以该双链DNA为模板合成dsDNA模板CuNPs或dsDNA模板AgNPs，然后以CuNPs、AgNPs或QDs为信号分子进行破伤风的检测，本专利技术的破伤风抗原的检测方法具有分析速度快、低成本、高灵敏、以及易于实现可视化POCT分析的优点，填补了破伤风抗原检测方法和试剂盒的空白，易于实现家庭便捷式和医学检测机构内高灵敏分析。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是以核酸适配体A1为识别探针的破伤风可视化和荧光检测原理图；图2是以双核酸适配体A1构成长双链为模板的破伤风可视化和荧光检测原理图；图3是以核酸适配体A2为识别探针，且长双链为模板的破伤风可视化和荧光检测原理图；图4是破伤风痉挛毒素分析条件优化图；图5是以核酸适配体A1为识别探针的破伤风可视化和荧光检测分析性能图；图6是以双核酸适配体A1构成长双链为模板的破伤风可视化和荧光检测分析性能图；图7是以核酸适配体A2为识别探针，且长双链为模板的破伤风可视化和荧光检测分析性能图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。本专利技术提供了一种破伤风抗原的检测方法，包括如下步骤：以作为破伤风抗原识别探针的核酸适配体为模板，形成双链DNA并以双链DNA为模板合成dsDNA模板铜纳米粒子或dsDNA模板银纳米粒子；基于破伤风抗原对dsDNA模板铜纳米粒子或所述dsDNA模板银纳米粒子中核酸适配体的特异性结合，使其引起信号分子的信号变化，而得到破伤风抗原的检测结果。优选的，信号分子包括CuNPs、AgNPs或QDs。优选的，信号分子为QDs。优选的，QDs为CdTeQDs或CdSeQDs。优选的，核酸适配体包括核酸适配体A1和A2，其中核酸适配体A1的碱基序列如SEQIDNO.1所示，核酸适配体A2的碱基序列如SEQIDNO.2所示。见下表1。表1实施例1本实施例1提供了以核酸适配体A1为识别探针，并作为长链模板通过特异性识别结合形成的包括短链核酸P1和短链核酸P2的dsDNA模板；其中，短链核酸P1和短链核酸P2的碱基序列分别如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。在本实施例1中以核酸适配体A1为长链模板，设计了两条短链核酸P1和P2(分别为16个碱基)，这三条链可特异性识别结合形成双链DNA，然后形成dsDNA模板CuNPs。当加入痉挛毒素时，痉挛毒素能够与核酸适配体A1特异性结合，进而破坏dsDNA模板CuNPs的双链DNA模板，使得形成的CuNPs的量降低，而剩下的Cu2+对QDs的荧光信号淬灭。因此，破伤风痉挛毒素的加入量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种破伤风抗原的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：以作为破伤风抗原识别探针的核酸适配体为模板形成双链DNA，并以所述双链DNA为模板合成dsDNA模板铜纳米粒子或dsDNA模板银纳米粒子；基于破伤风抗原对所述dsDNA模板铜纳米粒子或所述dsDNA模板银纳米粒子中所述核酸适配体的特异性结合，使其引起信号分子的信号变化，而得到破伤风抗原的检测结果。/n

【技术特征摘要】
1.一种破伤风抗原的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：以作为破伤风抗原识别探针的核酸适配体为模板形成双链DNA，并以所述双链DNA为模板合成dsDNA模板铜纳米粒子或dsDNA模板银纳米粒子；基于破伤风抗原对所述dsDNA模板铜纳米粒子或所述dsDNA模板银纳米粒子中所述核酸适配体的特异性结合，使其引起信号分子的信号变化，而得到破伤风抗原的检测结果。


2.根据权利要求1所述的破伤风抗原的检测方法，其特征在于，所述信号分子包括CuNPs、AgNPs或QDs。


3.根据权利要求2所述的破伤风抗原的检测方法，其特征在于，所述信号分子为QDs。


4.根据权利要求1所述的破伤风抗原的检测方法，其特征在于，所述核酸适配体包括碱基序列如SEQIDNO.1所示的核酸适配体A1或碱基序列如SEQIDNO.2所示的核酸适配体A2。


5.根据权利要求4所述的破伤风抗原的检测方法，其特征在于，所述双链DNA包括以所述核酸适配体A1为长链模板，且通过特异性识别结合形成的包括短链核酸P1和短链核酸P2的dsDNA模板；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈飘飘，白云金，曹钰，应斌武，唐时元，周亚雄，余海放，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，成都华西精准医学产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51