一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液制造技术

本发明专利技术公开了一种操作简便，染色效果清晰，检出率高且不易出现沉淀，体系稳定易于保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，包含A液、B液两种试剂。A液中的荧光素可以高亲和力地与真菌细胞壁上的β‑多糖，如几丁质与纤维素等结合，标记样品中存在的真菌成分。B液由水、荧光素以及荧光助剂组成，荧光素能荧光标记阴道分泌物中的细胞以及病原微生物。试剂分别添加了防干扰荧光助剂，可提高荧光染料与细胞以及微生物的结合率，荧光强度增强，细胞微生物轮廓清晰可见同时提高染色液组分体系的稳定性，降低染液荧光淬灭风险。此染色液操作简单快捷，背景干净，图像清晰，易于判断，临床使用可大大提高阴道炎等妇科白带检测项目的准确率。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液
本专利技术属于医学诊断
，具体涉及一种阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液。技术背景阴道炎是不同病因引起的多种阴道粘膜炎性疾病的总称。在正常生理状态，阴道的组织解剖学及生物化学特点足以防御外界微生物的侵袭。如果遭到破坏，则病原菌即可趁机而入，借种种因素，导致阴道炎症。阴道炎是妇产科患者最常见疾病，分特异性和非特异性阴道炎，大多是由加德纳菌、真菌、滴虫感染引起的细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎。细菌性阴道炎是育龄妇女最常见的阴道炎类型之一，因为阴道中的乳酸杆菌被高浓度厌氧菌(如普雷沃菌、动弯杆菌)、加德纳菌、流感嗜血杆菌、球菌和支原体等病原菌所代替。细菌性阴道炎主要通过性传播途径感染，但性传播途径不是细菌性阴道炎的唯一感染方式，因为健康女性阴道内也可检出上述病原菌。细菌性阴道炎的其他危险因素包括阴道内窥镜和过早怀孕等。阴道炎的症状缺乏特异性，因此在缺乏实验室确诊依据时，依据患者主诉和其他检查难以确诊。多数阴道炎患者即使反复感染，依然无法确认发病原因，且阴道炎患者多为混合感染，因此阴道炎的确诊十分困难。细菌性阴道炎是育龄妇女最常见的阴道炎类型之一，因为阴道中的乳酸杆菌被高浓度厌氧菌(如普雷沃菌、动弯杆菌)、加德纳菌、流感嗜血杆菌、球菌和支原体等病原菌所代替。细菌性阴道炎主要通过性传播途径感染，但性传播途径不是细菌性阴道炎的唯一感染方式，因为健康女性阴道内也可检出上述病原菌。细菌性阴道炎(BV)是一种由阴道加德纳菌和一些厌氧菌的混合感染，导致阴道内微生态平衡失调，引起的阴道分泌物增多，白带有鱼腥臭味及外阴瘙痒灼热的综合征。念珠菌性阴道炎(monilialvaginitis)又称外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)、霉菌性阴道炎，是由假丝酵母菌(俗称“霉菌”)引起的常见外阴阴道炎症，主要症状为外阴瘙痒、灼热痛、阴道分泌物增多、呈豆腐渣状或凝乳样。如果没有及时进行正规、彻底的治疗，患者容易反复发作，严重影响日常生活和身心健康。滴虫性阴道炎(TV)是由毛滴虫引起，寄生人体的毛滴虫有阴道毛滴虫、人毛滴虫和口腔毛滴虫，分别寄生于泌尿生殖系统、肠道和口腔，与皮肤病有关的是阴道毛滴虫，引起滴虫性阴道炎，是一种主要通过性交传播的寄生虫疾病，具有传染性。滴虫性阴道炎表现为外阴瘙痒、分泌物增多，其特点是泡沫样的黄色白带，诊断需要进行专门的检测，和其他阴道炎进行鉴别。传统的阴道炎诊断方法主要依赖于患者主诉、阴道检查以及实验室检查。目前临床主要检测方法有传统湿片法、革兰氏染色、酶化学法、培养法以及PCR法。(1)传统湿片法：生理盐水稀释后涂片观察，湿片法方便经济，可在几分钟内完成，但是线索细胞的观察需要经验，背景复杂，易漏检，整体阳性检出率低且没办法检查失活的滴虫。(2)革兰氏染色：细胞和微生物可以上色，染色后形态较湿片清晰，但滴虫会破碎，且背景也相对复杂，容易漏检或误检。(3)酶化学方法：可搭配全自动化设备，自动化程度高，但酶的干扰因素多，无国际权威报道支持，临床符合率低，假阳性假阴性概率高，另外操作复杂，需要45分钟，37℃温育，冷链运输。(4)培养法：指对临床标本进行培养，目的在于分离致病菌，以明确是否存在该致病菌感染，特别是在直接镜检为阴性时，可从疑似患者身上采集标本，进一步进行致病菌培养。一般培养超过2至4周以上依然没有致病菌生长，才可报告阴性。(5)PCR法：具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等优点，但操作要求高，步骤复杂，需要专门的PCR实验室以及专业检验医师，检测成本也高。阴道炎的治疗关键在于准确的确定阴道炎的病原体，而镜检是阴道炎诊断的金标准，但湿片或者普通染色检测局限性相对较多，针对以上技术不足，现有采用荧光标记方法，然而普遍荧光染色液存在染色效果不佳，染色后荧光效果淬灭快，染色液长期存放不稳定，使得染色后荧光强度较低等问题。
技术实现思路
本专利技术是为了克服上述局限，提供一种操作简便，染色效果好，检出率高且体系稳定易于保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液。A液中的荧光素可以高亲和力地与真菌细胞壁上的β-多糖，如几丁质与纤维素等结合，从而标记样品中存在的念珠菌或可能存在的其他真菌类别微生物；B液荧光素能标记其他有形成分白细胞、上皮细胞、线索细胞、细菌、滴虫标记荧光，从而使得其形态更加清晰，便于鉴别。本专利技术的另一个目的是提供一种操作简便，染色效果好，检出率高且体系稳定易于保存的制备方法。一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，所述阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液由以下试剂：特征在于，所述阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液由如下组分按照重量百分比组成：A液为荧光素、渗透剂、背景染料、防干扰荧光助剂、稳定剂、促溶剂、去离子水；B液为荧光素，荧光助剂，PBS缓冲溶液。进一步地，所述阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液由如下组分按照重量百分比组成：A液为荧光素0.1～2％、渗透剂1～15％、背景染料0.01～1％、防干扰荧光助剂0.1～5％、稳定剂10～30％、促溶剂5～25％、去离子水22～83.79％；B液为荧光素0.001～1％，荧光助剂0.1～3％，PBS缓冲溶液96～99.899％。优选地，所述A液荧光素为荧光增白剂-28；更优选地，所述A液荧光素的重量份数为0.5～1份。优选地，所述A液渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、N-N-二甲基甲酰胺的一种或几种；更优选地，所述A液渗透剂的重量份数为5～15份。优选地，所述A液防干扰荧光助剂为2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸钾与肌醇六磷酸钾的一种或几种；更优选地，所述A液防干扰荧光助剂的重量份数为0.5～3份。优选地，所述A液促溶剂为氢氧化钾、氢氧化钠中的一种或几种；更优选地，所述A液促溶剂的重量份数为10～20份。优选地，所述A液稳定剂为丙三醇、丙二醇、山梨醇中的一种或几种；更优选地，所述A液稳定剂的重量份数为15～25份。优选地，所述A液背景染料为伊文思蓝，台盼蓝、滂胺天蓝、溴酚蓝、百里酚蓝，溴甲酚蓝的一种或几种；更优选地，所述A液背景染料的重量份数为0.05～1份。优选地，所述B液荧光素为3，6-(二甲胺基)吖啶盐酸盐；更优选地，所述B液荧光素的重量份数为0.001-0.5份。优选地，所述B液荧光助剂为烷基酚聚氧乙烯醚、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸酯盐、烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、含氟脂肪酸盐、聚硅氧烷、脂肪醇硫酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸酯、α-烯基磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸酯、烷基醇酰胺、烷基磺酸基乙酰胺、烷基琥珀酸酯磺酸盐、醇胺烷基苯磺酸盐、环烷酸盐、烷基酚磺酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、聚山梨醇酯60，司盘80的一种或者几种；更优选地，所述B液荧光助剂的重量份数为0.1-2.5份。优选地，所述B液PB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，所述荧光染色液A液由以下试剂：荧光素、渗透剂、防干扰荧光助剂、稳定剂、促溶剂、背景染料以及去离子水配置而成；B液由PBS缓冲溶液、荧光素以及荧光助剂组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，所述荧光染色液A液由以下试剂：荧光素、渗透剂、防干扰荧光助剂、稳定剂、促溶剂、背景染料以及去离子水配置而成；B液由PBS缓冲溶液、荧光素以及荧光助剂组成。


2.根据权利要求1所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，所述阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液由如下组分按照重量百分比组成：A液为荧光素0.1～2％、渗透剂1～15％、背景染料0.01～1％、防干扰荧光助剂0.1～5％、稳定剂10～30％、促溶剂5～25％、去离子水22～83.79％；B液为荧光素0.001～1％，荧光助剂0.1～3％，PBS缓冲溶液96～99.899％。


3.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，A液所述荧光素为荧光增白剂-28。


4.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，A液所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、N-N-二甲基甲酰胺的一种或几种。


5.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，A液所述防干扰荧光助剂为2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸钾与肌醇六磷酸钾的一种或者几种。


6.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，A液所述促溶剂为氢氧化钾、氢氧化钠中的一种或几种。


7.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，A液所述稳定剂为丙三醇、丙二醇、山梨醇中的一种或几种。


8.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，A液所述背景染料为伊文思蓝、台盼蓝、滂胺天蓝、溴酚蓝、百里酚蓝、溴甲酚蓝的一种或几种。


9.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道分泌物微生物细胞荧光检测染液，其特征在于，B液所述荧光素为3，6-(二甲胺基)吖啶盐酸盐。


10.根据权利要求2所述的稳定易保存的阴道...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文虹，李海丽，
申请(专利权)人：广州翰德泽信医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44