抗口蹄疫O型病毒单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了单克隆抗体6G6、7D7，能特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒，单克隆抗体抗体对6G6、7D7制备的ELISA检测试剂盒，能对不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒进行高灵敏度检测。

【技术实现步骤摘要】
抗口蹄疫O型病毒单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及能与口蹄疫O型病毒反应的单克隆抗体，该单克隆抗体的可变区序列、分泌其的杂交瘤细胞株，以及使用该单克隆抗体制备的试剂盒和应用，属于含有抗体的医药配制品和免疫测定法领域。
技术介绍
口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒引起的急性，高度接触性传染病，偶蹄动物最易感，该病的爆发和流行给全球养殖业带来了巨大的经济损失，世界动物卫生组织将其列为一类传染病。口蹄疫病毒分为7个血清型，分别为A型、O型、AsiaI型、C型、SAT1型、SAT2型、和SAT3型，其中O型口蹄疫病毒流行最为广泛。按遗传分类，我国目前主要流行三种遗传拓扑型(Topotype)的O型口蹄疫病毒，分别属于CATHAY型(中国型)、ME-SA型(中东-南亚型)和SEA型(东南亚型)。目前对口蹄疫的防控主要是灭活疫苗免疫为主，对疫苗免疫后抗体水平的监测是控制疫苗免疫质量的有效手段，从而达到预防该病的效果。在市场上常见的抗体水平检测的试剂盒为液相阻断ELISA试剂盒，该试剂盒采用的是多克隆抗体，多克隆抗体存在批次间差异较大，稳定性差的问题。而单克隆抗体生物活性单一，易于生产和标准化，O型口蹄疫在我国流行甚广，且属于不同遗传拓扑型，但一直以来没有针对不同遗传拓扑型抗体均具有较好检测能力的固相阻断ELISA试剂盒，因此筛选合适的单克隆抗体对于该病的诊断和预防具有重要意义。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一株对O型口蹄疫病毒反应的单克隆抗体，且该单克隆抗体结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒相同位点；一株同时与不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒反应的单克隆抗体；以及含单克隆抗体的试剂盒及其应用。本专利技术涉及一种对O型口蹄疫病毒反应，且结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒相同位点的单克隆抗体6G6的可变区序列，其中，所述单克隆抗体6G6重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体6G6轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。本专利技术的6G6的可变区序列能特异结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒，能广谱检测不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒。本专利技术涉及一种对O型口蹄疫病毒反应，且结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒相同位点的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段；所述抗体或所述抗体的片段仍保持特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的能力。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述抗体为单克隆抗体6G6，其中，所述单克隆抗体6G6重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体6G6轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。本专利技术还涉及杂交瘤细胞6G6株，其分泌所述的单克隆抗体6G6。本专利技术还涉及一种可同时特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的单克隆抗体7D2的可变区序列，其中，所述单克隆抗体7D2重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码；所述单克隆抗体7D2轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码。本专利技术的7D2的可变区序列能特异结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒，能广谱检测不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒。本专利技术还涉及一种同时特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段；所述抗体或所述抗体的片段仍保持特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的能力。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述抗体为单克隆抗体7D2，其中，所述单克隆抗体7D2重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码；所述单克隆抗体7D2轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码。本专利技术还涉及杂交瘤细胞7D2株，其分泌权利要求7所述的单克隆抗体7D2。本专利技术还涉及一种ELISA检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括有效量的包被抗体，所述包被抗体为权利要求3所述的单克隆抗体6G6、有效量的O型口蹄疫病毒抗原、有效量的标记抗体，所述标记抗体为权利要求7所述的单克隆抗体7D2，以及抗原抗体反应检测的检测试剂。本专利技术的ELISA检测试剂盒能对不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒进行高灵敏度检测。作为本专利技术的一种实施方式，所述单克隆抗体6G6包被在支持介质上，所述O型口蹄疫病毒抗原与所述单克隆抗体6G6结合；优选地，所述支持介质为微滴定板。作为本专利技术的一种实施方式，所述单克隆抗体6G6含量为1～8μg/ml，所述O型口蹄疫病毒抗原含量为50～400μg/ml，所述单克隆抗体7D2含量为3～10μg/ml；优选地，所述O型口蹄疫病毒抗原含量为200μg/ml。作为本专利技术的一种实施方式，所述ELISA检测试剂盒中还包括样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照。作为本专利技术的一种实施方式，所述样品稀释液为含有脱脂奶的磷酸盐缓冲液，优选为含有10％(W/V)脱脂奶的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含有Tween-20的磷酸盐缓冲液，优选为含有0.05％(V/V)Tween-20的磷酸盐缓冲液；所述显色液包括显色液A和显色液B，所述显色液A含TMB20mg、无水乙醇10ml，并用ddH2O定容至100ml；所述显色液B含柠檬酸2.1g、无水Na2HPO42.82g、0.75％(V/V)的过氧化氢尿素0.64ml，并用ddH2O定容至100ml；所述终止液为2mol/LH2SO4；所述阳性对照为O型口蹄疫病毒抗原的高免血清，所述阴性对照为无口蹄疫抗体的猪血清。所述磷酸盐缓冲液，pH值为7.4，其1L体积配方为：NaCl8.0g、KCl0.2g、Na2HPO4·12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对O型口蹄疫病毒反应，且结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒相同位点的单克隆抗体6G6的可变区序列，其中，所述单克隆抗体6G6重链可变区为SEQ.ID No.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体6G6轻链可变区为SEQ.ID No.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。/n

【技术特征摘要】
1.一种对O型口蹄疫病毒反应，且结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒相同位点的单克隆抗体6G6的可变区序列，其中，所述单克隆抗体6G6重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体6G6轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。


2.一种对O型口蹄疫病毒反应，且结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒相同位点的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；优选地，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段；所述抗体或所述抗体的片段仍保持特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的能力；优选地，所述抗体为单克隆抗体6G6，其中，所述单克隆抗体6G6重链可变区为SEQ.IDNo.1所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体6G6轻链可变区为SEQ.IDNo.2所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。


3.杂交瘤细胞6G6株，其分泌权利要求3所述的单克隆抗体6G6。


4.一种可同时特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的单克隆抗体7D2的可变区序列，其中，所述单克隆抗体7D2重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码；所述单克隆抗体7D2轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码。


5.一种同时特异性结合不同遗传拓扑型O型口蹄疫病毒的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段重链可变区为SEQ.IDNo.3所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或抗体片段轻链可变区为SEQ.IDNo.4所示序列或其简并序列编码或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；优选地，所述抗体为单克...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，燕贺，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41