化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种化合物YX‑2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用，该药物通过抑制上皮‑间质转化，改善肺纤维化。

【技术实现步骤摘要】
化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用
技术实现思路
本专利技术属于生物医药领域，特别涉及一种化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用。
技术介绍
肺纤维化是一种慢性、进行性、纤维化性间质性肺疾病，其不可逆转，并最终可导致死亡。肺纤维化的发生率在全球范围内呈上升趋势，其发生频率与脑癌，胃癌和睾丸癌的发生频率相似。目前，尽管临床上已批准多个治疗肺纤维化的药物，但除肺移植以外，尚无其他治愈方法。因此，寻找一种能预防或治疗肺纤维化的活性化合物显得十分迫切。目前对肺纤维化中纤维发生的病理机制仍不十分明确。但上皮-间质转化已越来越多地被认为是纤维化过程的关键事件。有人提出损伤的上皮肺泡细胞是成肌纤维细胞的重要贡献者，成纤维细胞是分泌大量细胞外基质和信号分子驱动纤维化的主要效应细胞。在肺纤维化期间，肺泡上皮细胞的反复损伤导致上皮-间质转化异常激活，从而导致上皮表型的丧失、间质表型的获得、成纤维细胞的激活、细胞外基质的积累以及肺实质损伤。上皮-间质转化过程受多种细胞内和细胞外配体的调节，其中转化生长因子β1是参与上皮-间质转化过程的特征因子之一。受损肺中转化生长因子β的产生持续上调可能会促进上皮细胞向胶原生成的病理性成纤维细胞的转分化，这是导致肺纤维化的一个重要过程。因此，在肺泡上皮细胞中抑制转化生长因子β1诱导的上皮-间质转化和信号通路被认为是肺纤维化的潜在治疗策略。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用，该药物通过抑制上皮-间质转化，改善肺纤维化。本专利技术的技术方案是：化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用，该化合物的结构式为：所述化合物YX-2102抑制A549细胞中转化生长因子β1诱导的上皮间质转化。所述化合物YX-2102用于抑制肺部炎症反应。所述化合物YX-2102用于抑制肺纤维化。所述药物为上皮-间质转化过程的抑制剂。所述药物以口服、静脉注射方式给药。所述药物用药量为每公斤每天5-100mg。本专利技术所述的YX-2102是一种新型的上皮-间质转化过程的有效抑制剂。通过使用体外和体内模型，申请人系统地研究了YX-2102对肺纤维化的潜在治疗作用，通过实验验证，YX-2102通过抑制上皮-间质转化，改善肺纤维化。附图说明图1为YX-2102抑制肺泡上皮细胞中转化生长因子β1诱导的上皮间质转化；图2为YX-2102体内抑制博来霉素诱导的肺部炎症实验；图3为YX-2102在体内减轻博来霉素诱导的肺纤维化水平；图4为促炎细胞因子(白介素-6，单核细胞趋化蛋白1和白介素-1β)的mRNA表达水平；图5为大鼠肺纤维化程度的病理评价结果；图6为大鼠肺脏器系数；图7为大鼠肺组织中羟脯氨酸含量；图8为大鼠肺部MicroCT扫描图像。具体实施方式一.试剂Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)和胎牛血清(FBS)购自Hyclone(美国犹他州南洛根)，青霉素和链霉素购自Beyotime(中国江苏)，人重组转化生长因子β1购自Peprotech(RockyHill，NJ)，硫酸博来霉素购自NipponKayakuCo.LTD(日本)，PrimeScriptTMRT试剂盒购自TakaraBio(日本)，BCA分析试剂盒购自上海生工生物有限公司(中国上海)，其他试剂均采用生物级或分析纯试剂。二.YX-2102的生物学实验方法1.实验动物与处理雄性Sprague-Dawley大鼠(6-8周大，体重180-200g)从中国人民解放军陆军军医大学(中国重庆)实验动物中心购买。所有动物实验均遵循中国人民解放军陆军军医大学医学伦理委员会的规定并已获批准。采用气管暴露法建立肺纤维化大鼠模型，无菌条件下分离大鼠气管，以1ml注射器气管内一次性注射博莱霉素(5mg/kg)，同法对照组大鼠气管内注入等体积生理盐水。所有大鼠随机分为四组(每组6只)：1)对照组：对照组大鼠仅接受溶剂处理；2)YX-2102组：对照组大鼠仅接受YX-2102治疗；3)博来霉素组：博来霉素诱导的大鼠接受溶剂处理；4)博来霉素+YX-2102组：博来霉素诱导的大鼠接受YX-2102治疗。将YX-2102溶解在盐水﹕DMSO﹕Tween-80(18﹕1﹕1)的溶剂中，每天向大鼠腹膜内注射25mg/kgYX-2102，在第3、7、14和21天通过颈椎脱臼法处死所有大鼠。通过心脏穿刺收集血样，并将血清保存在-80℃进行进一步实验。收集支气管肺泡灌洗液后，将整个肺叶切除，左叶经过处理以进行组织病理学检查和免疫组化分析，右叶在-80℃下存储以进行分子和生化分析。所有实验均按照有关动物护理和使用的相关准则进行。2.细胞培养与处理将人肺泡上皮腺癌细胞系A549(中国科学院细胞库)和大鼠肺泡II型细胞系RLE-6TN(美国模式培养物集存库)在含10％胎牛血清的DMEM中于5％CO2和37℃中培养。YX-2102溶于二甲亚砜中，浓度为10mg/ml，储存在-20℃下备用。将细胞血清饥饿18小时，并与指定浓度的YX-2102预孵育2小时，然后与5ng/ml转化生长因子β1再孵育48小时。从总细胞裂解液中提取的蛋白质进行免疫印迹分析。所有测量至少重复三次。3.组织病理学检测将肺组织固定在4％多聚甲醛中，切成4μm厚薄片，H&E染色，然后用马松染色，可以观察到完整的组织结构和胶原沉积。为了获得肺泡炎和纤维化评分，在显微镜下(奥林巴斯，东京，日本)以200倍的放大倍数独立检查至少10个随机视野。半定量法计算每组的肺泡炎和纤维化程度。4.定量RT-PCR使用定量RT-PCR方法确定mRNA表达水平。从细胞或大鼠的肺组织中使用Trizol试剂提取总RNA。使用PrimeScriptTMRT试剂盒将RNA反转录为cDNA。使用SYBRPremixExTaqTMII在CFX96TouchTMRT-PCR系统上进行定量RT-PCR。以GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)作参考标准。5.蛋白免疫印迹分析将肺组织或细胞在冰上使用RIRA缓冲液裂解20分钟，然后使用BCA分析试剂盒对其进行定量分析。通过SDS-PAGE分离等量的蛋白质，并通过电泳将其转移到聚偏二氟乙烯膜上。膜用溶解在含0.05％Tween-20的磷酸盐缓冲液中的5％脱脂奶试剂封闭，然后与一抗在4℃下孵育过夜(12h)。随后，蛋白带用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗染色，并使用增强型化学发光试剂观察免疫反应蛋白。图像使用ChemiDocTM触摸成像系统进行显影，并使用ImageLab软件包进行分析。6.羟脯氨酸含量测定作为组织胶原蛋白含量的指标，肺羟脯氨酸含量根据制造商的说明书，使用羟脯氨酸分析试剂盒(南京建成)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用，该化合物的结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.化合物YX-2102在制备治疗肺纤维化药物中的应用，该化合物的结构式为：





2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述化合物YX-2102抑制A549细胞中转化生长因子β1诱导的上皮间质转化。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述化合物YX-2102用于抑制博莱霉素诱导的肺部炎症反应。


4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳勤，刘涛，陈应春，陈晓红，侯华，古晶，袁懿，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50