DLL3-CD3双特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及新颖的DLL3/CD3双特异性抗体。本发明专利技术亦涉及此类抗体或其组合物的用途，尤其出于治疗目的用于癌症疾病领域中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】DLL3-CD3双特异性抗体专利技术背景
本专利技术涉及多特异性结合蛋白，其包含对DLL3具有特异性的第一抗原结合单元及对CD3具有特异性的第二抗原结合单元。本专利技术亦涉及编码此类结合蛋白的核酸；用于制备此类结合蛋白的方法；表达或能够表达此类结合蛋白的宿主细胞；包含此类结合蛋白的组合物及此类结合蛋白或此类组合物的用途，尤其出于治疗目的用于癌症疾病领域的用途。
技术介绍
DLL3属于Notch配位体家族的I型跨膜蛋白。DLL3主要参与体节发生，其中相比于位于细胞表面上的其他DLL家族成员DLL1及DLL4，其主要位于高基氏体且充当Notch信号传导的抑制剂。仅在过表达DLL3的癌细胞中，一些DLL3分子逃逸至细胞表面(Dylla，Molecular&CellularOncology2016，第3卷，第2期)。通过使用若干方法已将DLL3鉴别为肿瘤特异性目标，例如肿瘤组织的LC/MS分析(WO2014/125273)、RNA定序(WO2017/021349)及免疫组织化学(Saunders等人，SciTranslMed.2015年8月26日；7(302):302ra136；Saunders等人，AACR2017；WO2013/126746)分析。DLL3表达已在神经内分泌肿瘤中有所描述，诸如大细胞神经内分泌癌瘤(largecellneuroendocrinecarcinoma；LCNEC)、小细胞肺癌(smallcelllungcancer；SCLC)、神经内分泌前列腺癌、神经内分泌胰脏癌及神经胶母细胞瘤(Saunders等人，SciTranslMed.2015年8月26日；7(302):302ra136；Saunders等人，AACR2017)。SCLC表示具有极高医疗需求的适应症。SCLC占肺癌诊断的13％且相比NSCLC预后较差。这些癌症的常规治疗主要包括化学疗法、放射疗法、手术或其组合，尚不存在可用的靶向疗法。尽管对化学疗法的初始响应率较高，但许多患者迅速复发化疗抗性疾病，因此不存在可用的治疗选择。尽管在过去几年这些癌症治疗已有所改善，但这些肿瘤类型的总存活率仍未改变，因此，对更具针对性及强效的疗法的需求仍未满足。一种靶向疗法方法由抗体药结合物(ADC)提供，然而，对于DLL3而言，此策略由于DLL3的低细胞表面表达及对化学疗法的高抵抗率而并非优选的。因为大多数患者在化学疗法治疗之后复发且由于DLL3在细胞表面上的低表达，用ADC靶向DLL3可能具有限制。另外，ADC方法常常因接头不稳定性或降解而具有由自由态药物引起的脱靶毒性。已尝试将DLL3靶向与其他蛋白质的靶向组合。举例而言，WO2017/021349描述一种双特异性抗体构建体，其组合与靶细胞表面上的人类DLL3结合及与T细胞表面上的人类CD3。然而，尚未证明此类方法能否成功且迄今没有SCLC及神经胶母细胞瘤以及其他表达DLL3的肿瘤的靶向疗法可供使用。鉴于此类癌症患者的较差前景，需要鉴别更加有效的疗法，尤其具有改善的耐受性的有效疗法。因此，本专利技术之一目标为提供药理学活性剂、组合物及/或治疗方法，其相比于目前使用及/或本领域中已知的药剂、组合物及/或方法提供某些优势。这些优势包括活体内功效、改善的治疗及药理学特性、特异性增加、改善的安全概况、副作用较少、免疫原性降低，及其他有利特性，诸如改善的制备容易性或降低的商品成本、较高的稳定性/较长的半衰期、对给药方案的需求频率较少，尤其相比于本领域中已知的候选药物。
技术实现思路
本专利技术为基于一种双特异性T细胞接合方法，其采用多特异性结合蛋白，所述多特异性结合蛋白具有与T细胞上的CD3结合的结合臂及与肿瘤细胞的细胞表面上的DLL3结合的结合臂。经由与T细胞及肿瘤细胞的同时结合，T细胞接合剂迫使在两个细胞之间形成溶细胞突触且因此选择性地重导向对靶向肿瘤细胞的T细胞活性。在一个方面中，本专利技术提供多特异性结合蛋白，其包含与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元及与CD3特异性结合的第二抗原结合单元，该与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元选自由i)至xviii)组成的群：i)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:1(CDR1)、SEQIDNO:2(CDR2)及SEQIDNO:3(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:4(CDR1)、SEQIDNO:5(CDR2)及SEQIDNO:6(CDR3)的重链CDR；ii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:7(CDR1)、SEQIDNO:8(CDR2)及SEQIDNO:9(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:10(CDR1)、SEQIDNO:11(CDR2)及SEQIDNO:12(CDR3)的重链CDR；iii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:13(CDR1)、SEQIDNO:14(CDR2)及SEQIDNO:15(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:16(CDR1)、SEQIDNO:17(CDR2)及SEQIDNO:18(CDR3)的重链CDR；iv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:19(CDR1)、SEQIDNO:20(CDR2)及SEQIDNO:21(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:22(CDR1)、SEQIDNO:23(CDR2)及SEQIDNO:24(CDR3)的重链CDR；v)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:25(CDR1)、SEQIDNO:26(CDR2)及SEQIDNO:27(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:28(CDR1)、SEQIDNO:29(CDR2)及SEQIDNO:30(CDR3)的重链CDR；vi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:31(CDR1)、SEQIDNO:32(CDR2)及SEQIDNO:33(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:34(CDR1)、SEQIDNO:35(CDR2)及SEQIDNO:36(CDR3)的重链CDR；vii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:133(CDR1)、SEQIDNO:134(CDR2)及SEQIDNO:135(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:136(CDR1)、SEQIDNO:137(CDR2)及SEQIDNO:138(CDR3)的重链CDR；viii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:139(CDR1)、SEQIDNO:140(CDR2)及SEQIDNO:141(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:142(CDR1)、SEQIDNO:143(CDR2)及SEQIDNO:144(CDR3)的重链CDR；ix)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白质，其包含与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元及与CD3特异性结合的第二抗原结合单元，其中该与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元选自由i)至xviii)组成的群：/ni)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:1(CDR1)、SEQ ID NO:2(CDR2)及SEQ ID NO:3(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:4(CDR1)、SEQ IDNO:5(CDR2)及SEQ ID NO:6(CDR3)的重链CDR；/nii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:7(CDR1)、SEQ ID NO:8(CDR2)及SEQ ID NO:9(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:10(CDR1)、SEQ IDNO:11(CDR2)及SEQ ID NO:12(CDR3)的重链CDR；/niii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:13(CDR1)、SEQ ID NO:14(CDR2)及SEQ ID NO:15(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:16(CDR1)、SEQ IDNO:17(CDR2)及SEQ ID NO:18(CDR3)的重链CDR；/niv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1)、SEQ ID NO:20(CDR2)及SEQ ID NO:21(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:22(CDR1)、SEQ IDNO:23(CDR2)及SEQ ID NO:24(CDR3)的重链CDR；/nv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:25(CDR1)、SEQ ID NO:26(CDR2)及SEQ ID NO:27(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:28(CDR1)、SEQ IDNO:29(CDR2)及SEQ ID NO:30(CDR3)的重链CDR；/nvi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:31(CDR1)、SEQ ID NO:32(CDR2)及SEQ ID NO:33(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:34(CDR1)、SEQ IDNO:35(CDR2)及SEQ ID NO:36(CDR3)的重链CDR；/nvii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:133(CDR1)、SEQ ID NO:134(CDR2)及SEQ ID NO:135(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:136(CDR1)、SEQ ID NO:137(CDR2)及SEQ ID NO:138(CDR3)的重链CDR；/nviii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:139(CDR1)、SEQ ID NO:140(CDR2)及SEQ ID NO:141(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:142(CDR1)、SEQ ID NO:143(CDR2)及SEQ ID NO:144(CDR3)的重链CDR；/nix)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:145(CDR1)、SEQ ID NO:146(CDR2)及SEQ ID NO:147(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:148(CDR1)、SEQID NO:149(CDR2)及SEQ ID NO:150(CDR3)的重链CDR；/nx)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:151(CDR1)、SEQ ID NO:152(CDR2)及SEQ ID NO:153(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:154(CDR1)、SEQID NO:155(CDR2)及SEQ ID NO:156(CDR3)的重链CDR；/nxi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:157(CDR1)、SEQ ID NO:158(CDR2)及SEQ ID NO:159(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:160(CDR1)、SEQID NO:161(CDR2)及SEQ ID NO:162(CDR3)的重链CDR；/nxii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQ ID NO:163(CDR1)、SEQ ID NO:164(CDR2)及SEQ ID NO:165(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:166(CDR1)、SEQ ID NO:167(CDR2)及SEQ ID NO:168(CDR3)的重...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180609 EP 18176888.8;20180609 EP 18176889.6;20191.一种蛋白质，其包含与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元及与CD3特异性结合的第二抗原结合单元，其中该与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元选自由i)至xviii)组成的群：
i)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:1(CDR1)、SEQIDNO:2(CDR2)及SEQIDNO:3(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:4(CDR1)、SEQIDNO:5(CDR2)及SEQIDNO:6(CDR3)的重链CDR；
ii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:7(CDR1)、SEQIDNO:8(CDR2)及SEQIDNO:9(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:10(CDR1)、SEQIDNO:11(CDR2)及SEQIDNO:12(CDR3)的重链CDR；
iii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:13(CDR1)、SEQIDNO:14(CDR2)及SEQIDNO:15(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:16(CDR1)、SEQIDNO:17(CDR2)及SEQIDNO:18(CDR3)的重链CDR；
iv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:19(CDR1)、SEQIDNO:20(CDR2)及SEQIDNO:21(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:22(CDR1)、SEQIDNO:23(CDR2)及SEQIDNO:24(CDR3)的重链CDR；
v)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:25(CDR1)、SEQIDNO:26(CDR2)及SEQIDNO:27(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:28(CDR1)、SEQIDNO:29(CDR2)及SEQIDNO:30(CDR3)的重链CDR；
vi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:31(CDR1)、SEQIDNO:32(CDR2)及SEQIDNO:33(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:34(CDR1)、SEQIDNO:35(CDR2)及SEQIDNO:36(CDR3)的重链CDR；
vii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:133(CDR1)、SEQIDNO:134(CDR2)及SEQIDNO:135(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:136(CDR1)、SEQIDNO:137(CDR2)及SEQIDNO:138(CDR3)的重链CDR；
viii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:139(CDR1)、SEQIDNO:140(CDR2)及SEQIDNO:141(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:142(CDR1)、SEQIDNO:143(CDR2)及SEQIDNO:144(CDR3)的重链CDR；
ix)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:145(CDR1)、SEQIDNO:146(CDR2)及SEQIDNO:147(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:148(CDR1)、SEQIDNO:149(CDR2)及SEQIDNO:150(CDR3)的重链CDR；
x)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:151(CDR1)、SEQIDNO:152(CDR2)及SEQIDNO:153(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:154(CDR1)、SEQIDNO:155(CDR2)及SEQIDNO:156(CDR3)的重链CDR；
xi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:157(CDR1)、SEQIDNO:158(CDR2)及SEQIDNO:159(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:160(CDR1)、SEQIDNO:161(CDR2)及SEQIDNO:162(CDR3)的重链CDR；
xii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:163(CDR1)、SEQIDNO:164(CDR2)及SEQIDNO:165(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:166(CDR1)、SEQIDNO:167(CDR2)及SEQIDNO:168(CDR3)的重链CDR；
xiii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:169(CDR1)、SEQIDNO:170(CDR2)及SEQIDNO:171(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:172(CDR1)、SEQIDNO:173(CDR2)及SEQIDNO:174(CDR3)的重链CDR；
xiv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:175(CDR1)、SEQIDNO:176(CDR2)及SEQIDNO:177(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:178(CDR1)、SEQIDNO:179(CDR2)及SEQIDNO:180(CDR3)的重链CDR；
xv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:181(CDR1)、SEQIDNO:182(CDR2)及SEQIDNO:183(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:184(CDR1)、SEQIDNO:185(CDR2)及SEQIDNO:186(CDR3)的重链CDR；
xvi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:187(CDR1)、SEQIDNO:188(CDR2)及SEQIDNO:189(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:190(CDR1)、SEQIDNO:191(CDR2)及SEQIDNO:192(CDR3)的重链CDR；
xvii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:193(CDR1)、SEQIDNO:194(CDR2)及SEQIDNO:195(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:196(CDR1)、SEQIDNO:197(CDR2)及SEQIDNO:198(CDR3)的重链CDR；以及
xviii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:199(CDR1)、SEQIDNO:200(CDR2)及SEQIDNO:201(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:202(CDR1)、SEQIDNO:203(CDR2)及SEQIDNO:204(CDR3)的重链CDR。


2.如权利要求1的蛋白质，其中该与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元包含第一轻链可变域及第一重链可变域且选自由i)至xviii)组成的群：
i)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:37的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:38的重链可变域；
ii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:39的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:40的重链可变域；
iii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:41的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:42的重链可变域；
iv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:43的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:44的重链可变域；
v)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:45的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:46的重链可变域；
vi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:47的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:48的重链可变域；
vii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:205的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:206的重链可变域；
viii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:207的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:208的重链可变域；
ix)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:209的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:210的重链可变域；
x)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:211的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:212的重链可变域；
xi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:213的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:214的重链可变域；
xii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:215的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:216的重链可变域；
xiii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:217的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:218的重链可变域；
xiv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:219的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:220的重链可变域；
xv)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:221的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:222的重链可变域；
xvi)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:223的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:224的重链可变域；
xvii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:225的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:226的重链可变域；以及
xviii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:227的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:228的重链可变域。


3.如权利要求1或2的蛋白质，其中该与CD3特异性结合的第二抗原结合单元选自由i)-iii)组成的群：
i)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:55(CDR1)、SEQIDNO:56(CDR2)及SEQIDNO:57(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:58(CDR1)、SEQIDNO:59(CDR2)及SEQIDNO:60(CDR3)的重链CDR；
ii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:61(CDR1)、SEQIDNO:62(CDR2)及SEQIDNO:63(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:64(CDR1)、SEQIDNO:65(CDR2)及SEQIDNO:66(CDR3)的重链CDR；以及
iii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:96(CDR1)、SEQIDNO:97(CDR2)及SEQIDNO:98(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:99(CDR1)、SEQIDNO:100(CDR2)及SEQIDNO:101(CDR3)的重链CDR。


4.如权利要求1至3中任一项的蛋白质，其中该与CD3特异性结合的第二抗原结合单元包含第二轻链可变域及第二重链可变域，该第二轻链可变域及第二重链可变域选自由i)至iii)组成的群：
i)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:67的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:68的重链可变域；
ii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:69的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:70的重链可变域；以及
iii)包含以下的抗原结合单元：包含氨基酸序列SEQIDNO:102的轻链可变域及包含氨基酸序列SEQIDNO:103的重链可变域。


5.如权利要求1至4中任一项的蛋白质，其中
i)该与DLL3特异性结合的第一抗原结合单元自其N端至C端，包含第一轻链可变域、第一轻链恒定域、第一肽接头、第一重链可变域及第一重链恒定CH1域；且
ii)该与CD3特异性结合的第二抗原结合单元自其N端至C端，包含第二轻链可变域、第二轻链恒定域、第二肽接头、第二重链可变域及第二重链恒定CH1域。


6.如权利要求5的蛋白质，其中该第一及/或第二肽接头包含26至42个氨基酸，优选地30至40个氨基酸、34至40个氨基酸，或36至39个氨基酸中的任一者，更优选地38个氨基酸。


7.如权利要求5或6的蛋白质，其中该第一接头及/或第二接头为Gly-Ser接头，其优选地包含氨基酸序列SEQIDNO:89，更优选地该第一及第二肽接头包含相同序列。


8.如权利要求5至7中任一项的蛋白质，其进一步包含第一及第二Fc域，该第一Fc域共价连接至该第一抗原结合单元，且该第二Fc域共价连接至该第二抗原结合单元。


9.如权利要求8的蛋白质，其中
i)该第一Fc域包含在位置366处的酪氨酸(Y)[T366Y]，且该第二Fc域包含在位置407处的苏氨酸(T)[Y407T]，或
ii)该第一Fc域包含在位置366处的色氨酸(W)[T366W]，且该第二Fc域包含在位置366处的丝氨酸(S)[T366S]、在位置368处的丙氨酸(A)[L368A]及在位置407处的缬氨酸(V)[Y407V]，或
iii)该第二Fc域包含在位置366处的酪氨酸(Y)[T366Y]，且该第一Fc域包含在位置407处的苏氨酸(T)[Y407T]，或
iv)该第二Fc域包含在位置366处的色氨酸(W)[T366W]，且该第一Fc域包含在位置366处的丝氨酸(S)[T366S]、在位置368处的丙氨酸(A)[L368A]及在位置407处的缬氨酸(V)[Y407V]，
优选地其中该第一或该第二Fc域进一步包含在位置435处的精氨酸[H435R]及在位置436处的苯丙氨酸[Y436F]。


10.如权利要求9的蛋白质，其中该第一及/或该第二Fc域进一步包含在位置234处的丙氨酸[L234A]及在位置235处的丙氨酸[L235A]。


11.如权利要求5至10中任一项的蛋白质，其中该第一轻链恒定域及该第二轻链恒定域包含人类κ或λ域。


12.一种蛋白质，其包含：与DLL3特异性结合的第一多肽链，该第一多肽链包含选自由以下组成的群的氨基酸序列：SEQIDNO:73、SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76、SEQIDNO:77、SEQIDNO:78、SEQIDNO:241、SEQIDNO:242、SEQIDNO:243、SEQIDNO:244、SEQIDNO:245、SEQIDNO:246、SEQIDNO:247、SEQIDNO:248、SEQIDNO:249、SEQIDNO:250、SEQIDNO:251及SEQIDNO:252；及与CD3特异性结合的第二多肽链，该第二多肽链包含氨基酸序列SEQIDNO:79、SEQIDNO:80或SEQIDNO:105。


13.一种分离的核酸分子，其编码如权利要求1至5中任一项的蛋白质的第一抗原结合单元及/或第二抗原结合单元，其任选进一步编码第一及/或第二Fc域。


14.一种分离的核酸分子，其编码如权利要求12的第一及/或第二多肽链。


15.一种表达载体，其包含如权利要求13或14的核酸分子。


16.一种宿主细胞，其通过如权利要求15的表达载体转染。


17.一种制造如权利要求1至12中任一项的蛋白质的方法，其包括
i)在允许表达如权利要求1至12中任一项的蛋白质的条件下培育如权利要求16的宿主细胞；及，
ii)回收该蛋白质；及任选
iii)进一步纯化及/或修饰及/或调配该蛋白质。


18.一种蛋白质，其包含与DLL3特异性结合的第一多肽链及与CD3特异性结合的第二多肽链，其中该第一多肽链包含第一轻链、第一接头及第一重链，且该第二多肽链包含第二轻链、第二接头及第二重链，优选地其中该第一轻链的C端经由该第一肽接头共价连接至该第一重链的N端，且其中该第二轻链的C端经由该第二肽接头共价连接至该第二重链的N端。


19.如权利要求18的蛋白质，其中该与DLL3特异性结合的第一多肽链包含轻链可变域及重链可变域，其包含选自由i)至xviii)组成的群的CDR序列：
i)包含氨基酸序列SEQIDNO:1(CDR1)、SEQIDNO:2(CDR2)及SEQIDNO:3(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:4(CDR1)、SEQIDNO:5(CDR2)及SEQIDNO:6(CDR3)的重链CDR；
ii)包含氨基酸序列SEQIDNO:7(CDR1)、SEQIDNO:8(CDR2)及SEQIDNO:9(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:10(CDR1)、SEQIDNO:11(CDR2)及SEQIDNO:12(CDR3)的重链CDR；
iii)包含氨基酸序列SEQIDNO:13(CDR1)、SEQIDNO:14(CDR2)及SEQIDNO:15(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:16(CDR1)、SEQIDNO:17(CDR2)及SEQIDNO:18(CDR3)的重链CDR；
iv)包含氨基酸序列SEQIDNO:19(CDR1)、SEQIDNO:20(CDR2)及SEQIDNO:21(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:22(CDR1)、SEQIDNO:23(CDR2)及SEQIDNO:24(CDR3)的重链CDR；
v)包含氨基酸序列SEQIDNO:25(CDR1)、SEQIDNO:26(CDR2)及SEQIDNO:27(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:28(CDR1)、SEQIDNO:29(CDR2)及SEQIDNO:30(CDR3)的重链CDR；
vi)包含氨基酸序列SEQIDNO:31(CDR1)、SEQIDNO:32(CDR2)及SEQIDNO:33(CDR3)的轻链CDR及包含氨基酸序列SEQIDNO:34(CDR1)、SEQIDNO:35(CDR2)及SEQIDNO:36(CDR3)的重链CDR；
vii)包含氨基酸序列SEQIDNO:133(CDR1)、SEQIDNO:134(CDR2)及SEQIDNO:135(CDR3)的轻链CDR及包含氨基酸序列SEQIDNO:136(CDR1)、SEQIDNO:137(CDR2)及SEQIDNO:138(CDR3)的重链CDR；
viii)包含氨基酸序列SEQIDNO:139(CDR1)、SEQIDNO:140(CDR2)及SEQIDNO:141(CDR3)的轻链CDR；及包含氨基酸序列SEQIDNO:142(CDR1)、SEQIDNO:143(CDR2...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·希普，P·亚当，M·吉列夫斯基，R·加内桑，P·N·戈尔曼，P·古普塔，P·古普塔，J·舍尔，V·H·沃伊诺夫，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰国际有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE