一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法，属于中药质量检测领域。所述鉴别方法包括：(1)将待测红花样品浸泡于乙醇溶液中，静置提取，收集提取液；(2)以尼龙膜作为萃取膜，将提取液滤过尼龙膜滤头使其吸附提取液中的染料物质；(3)再将碱性水溶液滤过尼龙膜滤头洗脱尼龙膜上吸附的染料物质，得到洗脱液，往洗脱液中加入同等浓度酸溶液回调pH，制得待检液；(4)观察待检液的颜色是否无色透明，如是，则判断待测红花样品未染色，如呈现颜色，则判断待测红花样品染色。本发明专利技术采用尼龙膜能够将染色剂从红花乙醇浸提液中分离，可直接根据染料萃取液的颜色判断红花是否被染色，该方法简单实用，适用于现场快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法
本专利技术属于中药质量检测领域，具体涉及一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法。
技术介绍
红花为菊科植物红花的管状花，具有活血化瘀、舒筋活络、预防和治疗心脑血管疾病等功效，是我国传统的中药材。近年来，红花在临床治疗中大量应用，价格上涨，市场出现了染色的红花以次充好，给用药者带来了极大的安全隐患。国家食品药品监督管理总局(CFDA)发布的《国家食品药品监督管理总局药品检验补充检验方法和检验项目批准件》2013006号、2014016号分别涉及了金橙II等6种染色剂，以监控红花药材的质量。目前，红花鉴别以人工鉴别为主，简单的方法为取适量红花放入杯中，加入适量的清水，放置一会，观察颜色，若颜色呈金黄色，则没有进行染色，若颜色呈红色或鲜红色，则是经过了染色的红花。易红兵介绍了一种染色红花的快速鉴别方法，从形、色、气味、水试几个方面对染色红花进行鉴别，红花经提取再染色后，虽然颜色与正品红花相似，但仔细检查发现花柱、花冠筒裂片。花药各部位形状卷曲不舒展、颜色模糊；正品红花水浸液呈金黄色，染色样品水浸液呈橙红色且花很快褪色(《一种染色红花的快速鉴别》，中国药业，2012年，第21卷第4期)。外形鉴别对鉴别人员专业要求高，且结果容易受到主观因素和客观环境的影响。由于天然红花中富含羟基红花黄色素，其水提液呈金黄色，仅靠水试视检无法准确鉴别红花是否染色。如何将天然色素与染料区分，实现染料的提取分离，有利于准确鉴别红花是否染色。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够将染料成分从染色红花中提取分离，与天然色素区分开，通过视检法即可准确鉴别红花是否染色。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法，包括以下步骤：(1)将待测红花样品浸泡于乙醇溶液中，静置提取，收集提取液；(2)以尼龙膜作为萃取膜，将提取液滤过尼龙膜滤头使其吸附提取液中的染料物质；(3)再利用碱性水溶液滤过尼龙膜滤头，洗脱滤头上吸附的染料物质，得到洗脱液，往洗脱液中加入同等浓度酸溶液回调pH，制得待检液；(4)观察待检液的颜色是否无色透明，如是，则判断待测红花样品未染色，如呈现颜色，则判断待测红花样品染色。所述染料为酸性染料，具体为金橙Ⅱ、柠檬黄、偶氮玉红、日落黄、酸性红73或胭脂红。本专利技术结合薄膜微萃取技术，将染色剂从红花提取液中分离出来。研究表明，相较于混合纤维素膜(MCE)滤头和聚醚砜膜(PES)滤头，本专利技术采用的尼龙膜(Nylon)滤头对上述染料吸附效果更优，尼龙膜成分为聚酰胺，可充分吸附红花中添加的酸性染料，而红花提取液中的天然色素及其他分子则基本不会被膜吸附截留，然后利用碱性水溶液对酸性染料进行洗脱，从而实现便捷的提取分离。由于检测对象是酸性染料，在碱性条件下染料溶液颜色会变浅，因此加酸调回pH以保证视检灵敏度。步骤(1)中，采用体积百分比为70％的乙醇溶液作为浸提液，物料比为1g：20mL，提取时间为5min。步骤(2)中，所述微萃取包括：用注射器吸取提取液，通过尼龙膜滤头挤出废液，使染料吸附于滤膜上。尼龙膜滤头可采用一次性针头过滤器，滤膜孔径为0.22μm。具体地，尼龙膜滤头规格为25mm×0.22μm。作为优选，洗脱染料的碱性溶液采用浓度为1～100mM的NaOH水溶液，再用等浓度的盐酸溶液回调pH。更为优选，采用浓度为10mM的NaOH水溶液。作为优选，步骤(3)中，利用碱性溶液洗脱前，采用体积百分比为10％～40％的甲酸溶液滤过尼龙膜进行洗涤，再用水清洗。甲酸溶液用于洗脱干净膜上少量吸附的天然色素等有色物质，然后用清水通过尼龙膜洗脱膜上残留的甲酸。更为优选，甲酸溶液浓度为20％。待检液制备的具体步骤可以为：用1ml注射器吸取染色红花提取液0.5ml，通过膜滤头并挤出废液，使染料吸附于滤膜上；接着用1ml注射器吸取1ml20％的甲酸溶液，使用橡胶堵头堵住滤头出水口，将注射器来回抽打10次，用于洗脱干净膜上少量吸附的天然色素等有色物质，并用10ml注射器吸取5ml水用于洗脱滤头内残留的甲酸；最后用1ml注射器吸取0.5ml浓度为10mM的NaOH水溶液将膜上吸附的染料完全洗脱，并在收集液中加入0.5ml同等浓度盐酸溶液调节pH，即得到待测检液。步骤(4)中，通过观察待测检液是否有颜色来判断待测红花样品是否染色，未染色红花洗脱液经尼龙膜萃取后近乎为无色透明，而染色红花萃取后洗脱液呈现染料颜色，且随着染料浓度增大而加深。本专利技术的有益效果为：本专利技术采用尼龙膜吸附红花乙醇浸提液中的酸性染料，实现染色剂分离，进而利用碱性溶液将染色剂从滤膜中洗脱，直接根据染料萃取液的颜色判断红花是否被染色，该方法简单实用，适用于现场快速检测。附图说明图1为金橙Ⅱ染料微萃取条件优化结果；其中(a)为不同膜材料对金橙Ⅱ染料的吸附率；(b)为不同浓度NaOH溶液对金橙Ⅱ染料的吸附率。图2为不同浓度金橙Ⅱ染料洗脱液视检图；其中，从左到右金橙Ⅱ染色浓度依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/g。图3为柠檬黄染料微萃取条件优化结果；其中(a)为不同膜材料对柠檬黄染料的吸附率；(b)为不同浓度NaOH溶液对柠檬黄染料的吸附率。图4为不同浓度柠檬黄染料洗脱液视检图；其中，从左到右柠檬黄染色浓度依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/g。图5为偶氮玉红染料微萃取条件优化结果；其中(a)为不同膜材料对偶氮玉红染料的吸附率；(b)为不同浓度NaOH溶液对偶氮玉红染料的吸附率。图6为不同浓度偶氮玉红染料洗脱液视检图；其中，从左到右偶氮玉红染色浓度依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/g。图7为日落黄染料微萃取条件优化结果：其中(a)为不同膜材料对日落黄染料的吸附率；(b)为不同浓度NaOH溶液对日落黄染料的吸附率。图8为不同浓度日落黄染料洗脱液视检图；其中，从左到右日落黄染色浓度依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/g。图9为酸性红73染料微萃取条件优化结果；其中(a)为不同膜材料对酸性红73染料的吸附率；(b)为不同浓度NaOH溶液对酸性红73染料的吸附率。图10为不同浓度酸性红73染料洗脱液视检图；其中，从左到右酸性红73染色浓度依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/g。图11为胭脂红染料微萃取条件优化结果；其中(a)为不同膜材料对胭脂红染料的吸附率；(b)为不同浓度NaOH溶液对胭脂红染料的吸附率。图12为不同浓度胭脂红染料洗脱液视检图；其中，从左到右胭脂红染色浓度依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/g。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1鉴别金橙Ⅱ染色红花1、金橙Ⅱ染色红花提取液的制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将待测红花样品浸泡于乙醇溶液中，静置提取，收集提取液；/n(2)以尼龙膜作为萃取膜，将提取液滤过尼龙膜滤头使其吸附提取液中的染料物质；/n(3)再利用碱性水溶液滤过尼龙膜滤头，洗脱滤头上吸附的染料物质，得到洗脱液，往洗脱液中加入同等浓度酸溶液回调pH，制得待检液；/n(4)观察待检液的颜色是否无色透明，如是，则判断待测红花样品未染色，如呈现颜色，则判断待测红花样品染色。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将待测红花样品浸泡于乙醇溶液中，静置提取，收集提取液；
(2)以尼龙膜作为萃取膜，将提取液滤过尼龙膜滤头使其吸附提取液中的染料物质；
(3)再利用碱性水溶液滤过尼龙膜滤头，洗脱滤头上吸附的染料物质，得到洗脱液，往洗脱液中加入同等浓度酸溶液回调pH，制得待检液；
(4)观察待检液的颜色是否无色透明，如是，则判断待测红花样品未染色，如呈现颜色，则判断待测红花样品染色。


2.如权利要求1所述的基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法，其特征在于，所述染料为金橙Ⅱ、柠檬黄、偶氮玉红、日落黄、酸性红73或胭脂红。


3.如权利要求1所述的基于尼龙膜微萃取的红花染色鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中，采用体积百分比为70％的乙醇溶液作为浸提液，物料比为1g：20mL，提取时...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘象银，范骁辉，王臣臣，程翼宇，王毅，李蕾，郭晓光，马存德，李燕魁，
申请(专利权)人：山东丹红制药有限公司，浙江大学，
类型：发明
国别省市：山东;37