一种嵌合抗原受体及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种嵌合抗原受体，包括：依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；所述胞内结构域与跨膜结构域相连的一端连接有CD3ε胞内区。本发明专利技术的嵌合抗原受体在B细胞白血病淋巴瘤治疗中可进一步提高B细胞白血病淋巴瘤的治疗效果，同时因其下调自身细胞因子来降低巨噬细胞单核细胞活化产生炎性细胞因子，从而可早期预防细胞因子风暴及降低神经毒性的风险。在mesothelin阳性的肿瘤治疗中进一步提高mesothelin高表达的实体瘤治疗效果，同时可早期预防细胞因子风暴及降低神经毒性的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种嵌合抗原受体及其用途
本专利技术涉及嵌合抗原受体领域，具体涉及一种嵌合抗原受体及其用途。
技术介绍
嵌合抗原受体简称CAR(chimericantigenreceptor)，搭载针对特定肿瘤抗原CAR的T细胞称为CAR-T细胞。CAR-T疗法在肿瘤的治疗中应用广泛，但仍然存在诸多局限，例如在临床上治疗白血病和实体瘤所遇到的细胞因子风暴、神经毒性安全性问题和疗效有待提高的问题，尤其是实体瘤免疫治疗的应用。目前解决细胞因子风暴(CRS)和神经毒性(NT)的方法均存在局限性：临床上目前主要是FDA批准的用罗氏的Actemra(tocilizumab，IL-6R单抗)管理CRS，tocilizumab首次被美国FDA批准用于治疗类风湿性关节炎治疗，可阻断这些细胞因子所介导的炎症反应。缺点是会使病人体内血液中的IL-6水平升高，高浓度IL-6可通过血脑屏障可以诱发神经毒性；②IL-1抑制剂：2018年5月，来自意大利圣拉菲尔医院-圣拉菲尔科学研究所和MSKCC(MemorialSloanKettering癌症中心)的两个研究团队的两项独立试验均证明了：CRS是由炎性分子IL-1引发的，在治疗方案中加入IL-1受体拮抗剂Kineret(anakinra，类风湿性关节炎药物)通过竞争抑制IL-1，能够有效控制CRS，因其具有血脑屏障穿透能力，也可控制神经毒性；局限性：tocilizumab和anakinra都不是从早期干预预防细胞CRS/NS,而是属于应急措施，发现补救不及时会存在致命的风险。而目前还不清楚早期干预发生副作用的最佳方案是什么。设计一款针对CAR结构本身的改造是更优化的方案。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种嵌合抗原受体及其用途。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供一种嵌合抗原受体。包括：依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；所述胞内结构域与跨膜结构域相连的一端连接有CD3ε胞内区。本专利技术第二方面提供一种多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自：(1)编码权利要求前述的嵌合抗原受体的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列；本专利技术第三方面提供一种核酸构建物，所述核酸构建物含有前述多核苷酸序列；优选的，所述核酸构建物为载体；更优选的，所述核酸构建物为慢病毒载体含有复制起始位点、3’LTR、5’LTR前述的多核苷酸序列。本专利技术第四方面提供慢病毒载体系统，所述慢病毒载体系统含有前述的核酸构建物及慢病毒载体辅助成分。本专利技术第五方面提供一种基因修饰的T细胞或含该基因修饰的T细胞的药物组合物，其特征在于，所述细胞含有前述多核苷酸序列，或含有前述核酸构建物，或感染了前述慢病毒载体系统。本专利技术第六方面提供前述嵌合抗原受体、前述多核苷酸序列、前述核酸构建物或前述慢病毒载体系统在制备以下任一种或多种用途产品中的应用：(1)制备T细胞；(2)抑制T细胞的细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF分泌；(3)抑制T细胞凋亡；(5)增强T细胞增殖能力；(6)提高T细胞杀伤力；(7)促进GrzB产生；(8)促进脱颗粒。本专利技术第七方面提供前述嵌合抗原受体、前述多核苷酸序列、前述核酸构建物、前述慢病毒载体系统或前述基因修饰的T细胞在制备以下任一种或多种用途产品中的应用：(1)治疗肿瘤；(3)抑制肿瘤治疗时产生的细胞因子风暴；(4)抑制肿瘤治疗时产生的神经毒性；优选的，所述肿瘤选自白血病或实体瘤中的一种或多种。如上所述，本专利技术的嵌合抗原受体及其用途，具有以下有益效果：本专利技术的嵌合抗原受体在B细胞白血病淋巴瘤治疗中可进一步提高B细胞白血病淋巴瘤的治疗效果，同时因其下调自身细胞因子来降低巨噬细胞单核细胞活化产生炎性细胞因子，从而可早期预防细胞因子风暴及降低神经毒性的风险。在mesothelin阳性的肿瘤治疗中进一步提高mesothelin高表达的实体瘤治疗效果，同时可早期预防细胞因子风暴及降低神经毒性的风险。附图说明图1a.靶向CD1928ZCAR和E28ZCAR的结构示意图。图1b.anti-CD19CAR在28Z和E28ZCAR-T细胞膜表面水平流式图。图1c.28Z和E28ZCAR-T中CD4+和CD8+细胞比例的流式图。图1d.anti-CD1928Z和E28ZCAR经CD19抗原刺激后的CD3ζ磷酸化水平比较。图1e.anti-CD1928Z和E28ZCAR经CD19抗原刺激后的CAR膜表面水平变化。图1f.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的细胞因子水平比较。图1g.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的细胞因子水平比较。图1h.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的细胞因子水平比较。图1i.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的脱颗粒反应。图1j.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的颗粒酶释放反应。图1k.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T对CD19+肿瘤细胞毒性反应。图1l.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后增殖情况。图1m.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后凋亡情况。图1n.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的存活能力。图1o.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的exhaustion衰竭状态。图1p.anti-CD1928Z和E28ZCAR-T细胞经CD19抗原刺激后的exhaustion衰竭状态。图1q.CAR-T细胞治疗Raji异种皮下移植瘤模型流程图。图1r.CAR-T细胞治疗后Raji异种皮下移植瘤生长情况。图2a.靶向mesothelin28ZCAR和E28ZCAR的结构示意图。图2b.anti-mesothelinCAR在28Z和E28ZCAR-T细胞膜表面水平流式图。图2c.anti-mesothelin28Z和E28ZCAR-T中CD4+和CD8+细胞比例的流式图。图2d.anti-mesothelin28Z和E28ZCAR-T细胞经mesothelin抗原刺激后的细胞因子水平比较。图2e.anti-mesothelin28Z和E28ZCAR-T细胞经mesothelin抗原刺激后的细胞因子水平比较。图2f.anti-mesothelin28Z和E28ZCAR-T细胞经mesothelin抗原刺激后的细胞因子水平比较。图2g.anti-mesothelin28Z和E28ZCAR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，包括：/n依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；/n所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；/n所述胞内结构域与跨膜结构域相连的一端连接有CD3ε胞内区。/n

【技术特征摘要】
20190913 US 62/899,9611.一种嵌合抗原受体，包括：
依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；
所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；
所述胞内结构域与跨膜结构域相连的一端连接有CD3ε胞内区。


2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
(1)所述CD3ε胞内区的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；
(2)所述胞内结构域包括依次连接的CD3ε胞内区、共刺激信号传导区和CD3ζ胞内区。


3.如权利要求2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述共刺激信号传导区选自CD27、CD28、CD134、4-1BB和ICOS的胞内区中的一种或多种。


4.如权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
(1)所述CD28胞内区的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示；
(2)所述CD3ζ胞内区的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示。


5.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
a.所述抗原识别区选自针对肿瘤表面抗原的单链抗体，所述肿瘤表面抗原选自CD19、间皮素、CD20、CD22、CD123、CD30、CD33、CD38、CD138、BCMA、Fibroblastactivationprotein、Glypican-3、CEA、EGFRvIII、PSMA、Her2、IL13Rα2、CD171和GD2中的一种或多种；
b.所述跨膜结构域选自CD28TM、CD4、CD8α、OX40或H2-Kb。


6.如权利要求5所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
c.所述单链抗体选自FMC63或SS1；
d.所述CD28TM的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示。


7.如权利要求1-6任一所述的嵌合抗原受体，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许琛琦，周秋萍，吴微，何星，孙赫，
申请(专利权)人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：上海;31