一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH及其制备方法。该益生菌菌剂PAPCH，包括干酪乳杆菌lyT

【技术实现步骤摘要】
一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH及其制备方法


[0001]本专利技术属于益生菌菌剂PAPCH(Probiotics Aimed at Prevention and Control of H.pylori， PAPCH)制备
，具体涉及一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH及其制备方法。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori，HP)是一种弯曲螺旋状的革兰氏阴性菌，世界上有一半以上人口感染幽门螺杆菌，其中10％-15％发展为消化性溃疡，约1-2％发展为胃癌。目前治疗幽门螺杆菌感染的有效方法是三联疗法和四联疗法，通过抗生素的联合作用来清除幽门螺杆菌。但是随着抗生素的滥用和幽门螺杆菌耐药性的增加，应用抗生素来治疗幽门螺杆菌感染的根除率已经逐年下降，并且抗生素联用会引起胃肠道紊乱等多种副作用。益生菌(Probiotics)是一类通过改善宿主肠道微生物菌群平衡而发挥作用的活性微生物，是人体肠道重要的生理菌，能够促进肠内微生物菌群的生态平衡，有改善肠道菌群结构、促进肠道中有益菌的增殖、抑制有害菌的生长等重要生理功效。部分益生菌相继被发现对幽门螺杆菌有抑制作用，并且可以抗生素的根除率以及减少副作用的产生，但是有效预防和治疗幽门螺杆菌感染的益生菌及其菌剂仍很少。

技术实现思路

[0003]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH 及其制备方法，可有效的抑制并杀死幽门螺杆菌，抑制幽门螺杆菌引起的炎性反应和免疫应答，降低其在胃粘膜上皮细胞上的黏附性能。
[0004]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0005]一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH(Probiotics Aimed at Prevention andControl of H.pylori，PAPCH)，包括干酪乳杆菌lyT-7和保护剂；该干酪乳杆菌lyT-7 (Lactobacillus casei lyT-7)保藏编号为：CCTCC NO：M 2010197，保藏时间为2010年8月 9日，保藏地址为：中国武汉，武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保护剂的添加量为干酪乳杆菌lyT-7用量的 50％wt～150％wt。
[0006]进一步地，保护剂的添加量为干酪乳杆菌lyT-7用量的80％wt～100％wt。
[0007]进一步地，保护剂包括以下重量百分比的组分：
[0008]低聚果糖10～15％、低聚半乳糖10～15％、低聚异麦芽糖10～20％、螺旋藻干粉1～5％、甘油0.5～1％，余量为无菌水。
[0009]进一步地，保护剂包括以下重量百分比的组分：低聚果糖15％、低聚半乳糖15％、低聚异麦芽糖10％、螺旋藻干粉2％、甘油1％，余量为无菌水。
[0010]上述益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0011](1)将干酪乳杆菌lyT-7以4～10％的接种量接种于MRS液体培养基上，然后于35～37℃、 150～200rpm摇床培养15～20h；
[0012]其中，干酪乳杆菌lyT-7(Lactobacillus casei lyT-7)保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2010197。其特征在于：在MRS固体培养基上形成圆形，乳白色的光滑菌落。
[0013]MRS液体培养基：分别称取蛋白胨12g、酵母提取物6g、牛肉膏6g、葡萄糖18g、乙酸钠5g、柠檬酸铵2.15g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL，调节pH至6.2～6.6之间，最后加入超纯水至1000mL。充分加热搅拌溶解后分装至试管或瓶中进行高压蒸汽灭菌(121℃、103.4kPa，20min)。
[0014](2)然后用生理盐水洗涤，再于6000～8000rpm离心10～15min，去除上清液，得到菌体；
[0015](3)将菌体与保护剂混合均匀后，程序降温至-80℃进行预冻，然后冻干即得该益生菌菌剂。
[0016]进一步地，干酪乳杆菌lyT-7的接种量为4％。
[0017]进一步地，程序降温的过程为：4℃保藏0.5h；-20℃保藏0.5h；-40℃保藏0.5h；-80℃保藏1h后冷冻抽干。
[0018]进一步地，冻干后的菌剂中活菌数量大于1
×
109CFU/g。
[0019]进一步地，菌剂为粉剂、片剂、丸剂或注射剂。
[0020]本专利技术的有益效果为：
[0021]1、本申请制备得到的菌剂能够有效的抑制幽门螺杆菌在胃上皮细胞上的黏附和幽门螺杆菌引起的炎性反应和免疫应答，以及幽门螺杆菌感染诱导的氧化反应，可直接抑制甚至杀死幽门螺杆菌，与此同时，菌剂也不会伤害胃上皮细胞，安全性很好。
[0022]2、菌剂在直接抑制甚至杀死幽门螺杆菌的同时，还能改善胃肠道的微生态环境，降低抗生素的不良反应，进而提高患者的治疗依从性。
[0023]3、本申请中使用的保护剂由多种成分复合复合形成，其中，低聚果糖、低聚半乳糖以及低聚异麦芽糖具有帮助益生菌增殖的功能，可以扩大益生菌在胃肠道的优势，同时，低聚半乳糖还有较强的耐酸耐热性，能为益生菌冻干粉提供很好的稳定性；而螺旋藻干粉具有增强人体免疫力的功能，与菌剂中的益生菌一同提升改善人体免疫力；而甘油则是一种冻干保护剂。因而，由多种成分复合形成的保护剂能够减轻或防止益生菌菌体细胞受损，使益生菌保持原有的理化特性和生物活性。
[0024]4、采用本申请方法制备得到的菌剂中的活菌数量大于1
×
109CFU/g，菌株成活率高。
附图说明
[0025]图1为PAPCH耐酸性能检测；
[0026]图2为PAPCH对幽门螺杆菌生长的抑制率检测；其中，100μL、200μL、300μL均为使用的PAPCH发酵液的量；1:200、1:20、1:2为PAPCH与幽门螺杆菌的菌量比；
[0027]图3为PAPCH对GES-1细胞的粘附；
[0028]图4为PAPCH对幽门螺杆菌粘附GES-1细胞的影响；
[0029]图5为快速尿素酶检测结果；
[0030]图6为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠血清中胃蛋白酶原I、II含量的影响；
[0031]图7为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠血清CRP含量的影响；
[0032]图8为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠血清MDA含量的影响；
[0033]图9为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠血清GSH-PX含量的影响；
[0034]图10为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠血清SOD含量的影响；
[0035]图11为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠胃组织中TNF-α表达量的影响；
[0036]图12为PAPCH预防幽门螺杆菌感染对小鼠胃组织中MUC5AC表达量的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH，其特征在于，包括干酪乳杆菌和保护剂；所述保护剂的添加量为干酪乳杆菌用量的50％wt～150％wt。2.根据权利要求1所述的防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH，其特征在于，所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌lyT-7，保藏编号为：CCTCC NO：M 2010197。3.根据权利要求1所述的防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH，其特征在于，所述保护剂的添加量为干酪乳杆菌用量的80％wt～100％wt。4.根据权利要求1或3所述的防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH，其特征在于，所述保护剂包括以下重量百分比的组分：低聚果糖10～15％、低聚半乳糖10～15％、低聚异麦芽糖10～20％、螺旋藻干粉1～5％、甘油0.5～1％，余量为无菌水。5.根据权利要求4所述的防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂PAPCH，其特征在于，所述保护剂包括以下重量百分比的组分：低聚果糖15％、低聚半乳糖15％、低聚异麦芽糖10％、螺旋藻干粉2％、甘油1％，余量为无菌水。...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵建，彭静珊，吴道艳，于智豪，李姝，严馨，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：