循环肿瘤细胞信息评估方法及其用途技术

本发明专利技术公开一种循环肿瘤细胞信息评估方法及其用途。主要来说，本发明专利技术透过结合负向筛选以及三维细胞培养的方式，得以筛选并培养出精确的循环肿瘤细胞样本。据此，进一步根据该些精确的循环肿瘤细胞样本，进行如肿瘤型态分析、肿瘤监控、预后评估、用药指导或用药成效分析等各种不同的评估方法或用途。析等各种不同的评估方法或用途。析等各种不同的评估方法或用途。

【技术实现步骤摘要】
循环肿瘤细胞信息评估方法及其用途


[0001]本专利技术涉及一种循环肿瘤细胞信息评估方法及其用途，尤指一种可透过特别的有核细胞类别筛选及数量分析技术来评估肿瘤未来发展可能性及状况的循环肿瘤细胞信息评估方法及其用途。

技术介绍

[0002]循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)属液态切片其中一项分类。常被用于评估血液检体中的数目，并应用于临床诊断、预后、治疗成效评估或疾病监控等用途。但目前仍急需技术突破，来克服循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)的部份先天特性，例如数目极为稀少及高度异质性(heterogeneity)造成应用上的困难。
[0003]循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)作为样本可应用于基础研究、细胞扩增及细胞功能分析、肿瘤动物模式建立、分子生物研究(包括核酸、蛋白、基因体分析等)、临床研究如肿瘤药物耐性分析及临床关联性分析(包括预后、监控、治疗成效评估等)。
[0004]有关筛选的技术，目前大致区分为纯物理法(Physical method)以及生物化学法(Biochemical method)两类。其中，物理法主要透过细胞的尺寸、密度或介电泳力来筛选循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)。但是其可达到的精准度和纯度会输给生物化学法。
[0005]而目前主要的生物化学法必须使用到特殊的表面标记(Surface marker)，用以区分循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)和其他细胞。
[0006]但是，循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)因异质性(heterogeneity)的缘故，时常导致其数量评估容易产生误差。所谓的异质性包括细胞型态、生理特性甚至是分子特性上的差异。
[0007]然而，习知技术中对于循环肿瘤细胞之于恶性转移(Metastasis)，其后续信息评估仍然不足。其主要的原因在于，习知技术无法有效筛除不具有细胞活性的循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)，以致无法精确分析真正对恶性转移(Metastasis)直接贡献之循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)。
[0008]例如，以纯物理法(Physical method)来说，常见为利用循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)粒径大于血球细胞的特点，以特定筛孔大小之筛网分离两种细胞。但已知循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)之粒径不一，依此方法会有漏失与白血球粒径相仿的循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)之风险。
[0009]此外，循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)之半衰期较短，进入血液循环后数小时内即可能死亡；尽有0.01％循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)可成功转移，亦即如果将这特性放至计数筛选的循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)，并不是全数的循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)都具有细胞活性，而对肿瘤恶性转移(Metastasis)有贡献。
[0010]对此，现有的技术极需一套有效的筛除方式以及辨识方式，针对循环肿瘤细胞
(Circulating Tumor Cells,CTCs)所给予的信息进行进一步的应用。

技术实现思路

[0011]为了解决先前技术中所提到的问题，本专利技术提供了一种循环肿瘤细胞信息评估方法及其用途。
[0012]具体而言，本专利技术的该循环肿瘤细胞信息评估方法主要包括步骤(a)～(e)。其中，步骤(a)会先提供一生物样本，该生物样本包括复数个非目标细胞及复数个目标细胞。接着步骤(b)筛除该复数个非目标细胞，使该复数个目标细胞存活。
[0013]而步骤(c)接着对该生物样本进行一免疫荧光染色，辨别出该复数个目标细胞中的复数个循环肿瘤细胞。进一步，步骤(d)会进一步辨识该复数个循环肿瘤细胞为复数个移转潜力细胞及复数个移转表征细胞个别的一生物参数。最后，步骤(e)将会依照该生物参数对该复数个移转潜力细胞及该复数个移转表征细胞进行至少一第一生物检测。以本专利技术来说，该生物样本可以是周边全血(Peripheral blood)。
[0014]而针对上述提及的循环肿瘤细胞信息评估方法，本专利技术更提供了一种循环肿瘤细胞信息的用途。首先，步骤(A)会提供前述步骤(e)的该第一生物检测的至少一结果参数。接着，步骤(B)则将该至少一结果参数用以进行肿瘤型态分析、肿瘤监控、预后评估、用药指导、用药成效分析或其组合。
[0015]据此，本专利技术得以解决循环肿瘤细胞异质性如细胞型态、生理特性、分子特性导致其数量评估时容易产生误差的困境。更可避免筛选偏差(Selection bias)的问题导致循环肿瘤细胞数目低估的情形。此外，本专利技术更能解决负向筛选固有之循环肿瘤细胞纯度不足的问题，使后续基础研究用途或临床研究用途更加精准。
[0016]以上对本专利技术的简述，目的在于对本专利技术的数种面向和技术特征作一基本说明。专利技术简述并非对本专利技术的详细表述，因此其目的不在特别列举本专利技术的关键性或重要组件，也不是用来界定本专利技术的范围，仅为以简明的方式呈现本专利技术的数种概念而已。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
[0018]图1是本专利技术实施例循环肿瘤细胞信息评估方法的流程图。
[0019]图2是本专利技术实施例步骤(a)后续可选的处理流程图。
[0020]图3是本专利技术实施例步骤(b)的详细流程图。
[0021]图4是本专利技术实施例步骤(c)的详细流程图。
[0022]图5是本专利技术实施例步骤(d)的详细流程图。
[0023]图6是本专利技术实施例循环肿瘤细胞信息用途的流程图。
[0024]附图标号说明：
[0025](a)～(e)
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步骤
[0026](a1)～(a3)
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步骤
[0027](b1)～(b2)
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步骤
[0028](b2
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步骤
[0029](c1)～(c3)
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步骤
[0030](d1)～(d3)
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种循环肿瘤细胞信息评估方法，其特征在于，包括：(a)提供一生物样本，该生物样本包括复数个非目标细胞及复数个目标细胞；(b)筛除该复数个非目标细胞，使该复数个目标细胞存活；(c)对该生物样本进行一免疫荧光染色，辨别该复数个目标细胞中的复数个循环肿瘤细胞；(d)进一步辨识该复数个循环肿瘤细胞为复数个移转潜力细胞及复数个移转表征细胞个别之一生物参数；以及(e)依照该生物参数对该复数个移转潜力细胞及该复数个移转表征细胞进行至少一第一生物检测；其中，该生物样本为周边全血。2.如权利要求1所述的循环肿瘤细胞信息评估方法，其特征在于，步骤(c)中，辨别该复数个循环肿瘤细胞以外未被完全筛除的该复数个非目标细胞的细胞标志包括表面抗原分化簇4受体、表面抗原分化簇8受体、表面抗原分化簇14受体、表面抗原分化簇11b受体、表面抗原分化簇34受体、表面抗原分化簇45受体、表面抗原分化簇68受体、表面抗原分化簇235a受体或其组合。3.如权利要求1所述的循环肿瘤细胞信息评估方法，其特征在于，步骤(d)中，该复数个移转潜力细胞为上皮型循环肿瘤细胞；该复数个移转表征细胞为间质型循环肿瘤细胞。4.如权利要求1所述的循环肿瘤细胞信息评估方法，其特征在于，步骤(d)中，辨识该复数个移转潜力细胞的细胞标志包括上皮细胞黏附因子、泛角蛋白、E-钙粘蛋白、封闭蛋白、外周膜蛋白-1、桥粒斑蛋白、黏蛋白Muc-1、乙型卡特林因子、跨膜蛋白-1或其组合。5.如权利要求1所述的循环肿瘤细胞信息评估方法，其特征在于，步骤(d)中，辨识该复数个移转表征细胞的细胞标志包括锌指蛋白SNAI1、锌指蛋白SNAI2、基质金属蛋白酶、波形蛋白、纤连蛋白、甲型平滑肌肌动蛋白、...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴旻宪，廖家蓉，
申请(专利权)人：长庚大学，
类型：发明
国别省市：