本发明专利技术公开了一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法、试剂盒及应用。其中与番茄材料高糖性状相关的两个SNP位点为番茄基因组第6号染色体37559435bp处的碱基C或T和番茄基因组第9号染色体3478110bp处的碱基A或G，通过这两个SNP位点标记，本发明专利技术公开了一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法，以及番茄基因组第6号染色体37559435bp处和番茄基因组第9号染色体3478110bp处SNP位点在番茄分子标记辅助选择育种中的应用，可以在苗期就鉴定出高糖的番茄材料，从而加快育种进程，提高育种效率。提高育种效率。提高育种效率。
【技术实现步骤摘要】
一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法、试剂盒及应用
[0001]本专利技术涉及基因工程及分子生物学领域，具体涉及一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法、试剂盒及应用。
技术介绍
[0002]番茄果实中的糖含量是番茄品质育种中重要的目标之一，因为番茄果实中糖含量对果实风味、色泽及营养成分有着重要影响，是决定番茄果实品质的主要因素。番茄果实糖含量对于加工番茄也非常重要，加工番茄的果肉、果酱和果汁的品质很大程度上取决于果实内所积累的糖的种类和含量。番茄果实中的糖含量是数量性状，众多研究者对于该性状进行了大量的QTL(数量性状位点)分析，发现了大部分QTL位点可解释的表型变异率都比较低，且多与果实重量轻和产量低等不利性状的位点连锁。影响番茄果实糖含量相关位点来源于番茄野生种，番茄野生种果实糖含量是番茄的2-3倍，是培育高糖番茄和研究果实糖代谢机制的重要资源。番茄野生种果实积累糖分分为两种类型，一种积累果糖和葡萄糖，例如契斯曼尼番茄、醋栗番茄、潘那利番茄等；另外一种积累蔗糖，例如克梅留斯基番茄、多毛番茄、秘鲁番茄等。樱桃番茄作为野生番茄向栽培番茄的过渡类型，糖度高且果实重量小，栽培番茄果实重量远大于樱桃番茄，但是糖度低。挖掘控制果实糖含量与单果重不连锁的关键基因位点并开发能够在育种实践当中辅助鉴定具有高糖性状的番茄材料的分子标记筛选技术，对于培育具有高糖性状的番茄材料以及番茄品质育种具有重要意义。
[0003]分子标记辅助选择育种，是指利用分子标记对育种材料进行选择，是传统遗传育种与现代分子生物学有机结合的育种方法，可以很好的提高育种效率。在分子育种应用之前，需要鉴定与目标性状关联的分子标记。单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)是指染色体基因组含量上单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性，而其中最少一种等位基因在群体中的频率不小于1％其中包括单碱基的转换(包括C与T转换，在其互补链上则为G与A互换)、颠换(包括C与A、G与T、C与G，A与T互换)，以及单碱基的插入/缺失等。SNP作为新一代分子标记，具有丰度高、检测易实现自动化等特点，利用序列的多态性开发用于检测番茄糖度性状的标记已成为可能，通过上述标记的筛选，可提高含糖量这一重要番茄品质性状选择的育种效率，节约育种成本并提升番茄产业经济效益，选择有效的分子标记一直是本领域技术人员努力的方向。番茄果实材料糖度＞8.0时,属于糖度较高,风味和口感都较好的番茄材料。
技术实现思路
[0004]为了克服现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种筛选具有高糖性状番茄材料的方法，本专利技术所述高糖番茄材料特征为番茄果实材料糖度＞8.0，本专利技术可以提高含糖量这一重要番茄品质性状选择的育种效率，节约育种成本并提升番茄产业经济效益。
[0005]本专利技术还提供一种解决上述问题的试剂盒。
[0006]同时，本专利技术还提供番茄基因组第6号染色体37559435bp处和番茄基因组第9号染色体3478110bp处SNP位点在番茄分子标记辅助选择育种中的应用。
[0007]技术方案：本专利技术是通过以下技术方案来实现的：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供了一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0009]S1，苗期提取番茄的基因组DNA；
[0010]S2，鉴定番茄基因组第6号染色体37559435bp处的碱基和第9号染色体3478110bp处的碱基；
[0011]步骤S2中，鉴定番茄基因组第6号染色体37559435bp处的碱基所用引物包括上游引物BR1-dCAPSF：5
’-
AGAAGGCTGGCCTTTCCGAT-3
’
(SEQ ID NO：1)和下游引物BR1-dCAPSR：5
’-
ATGCTGTATGGGTTTCCTTG-3
’
(SEQ ID NO：2)；
[0012]鉴定番茄基因组第9号染色体3478110bp处的碱基所用引物包括上游引物BR2-dCAPSF：5
’-
GTATTCCGCGACAAGTATGGGTA-3
’
(SEQ ID NO：3)和下游引物BR2-dCAPSR：5
’-
GGAAAAGTTGAAACCTGTGATG-3
’
(SEQ ID NO：4)。
[0013]S3，根据所述步骤S2的鉴定结果进行筛选。
[0014]作为优选，步骤S3中，鉴定结果的筛选：所述番茄材料基因组第6号染色体37559435bp处基因型为CT或TT且番茄基因组第9号染色体3478110bp处基因型为GG时，所述的番茄材料果实糖度高。
[0015]本专利技术的第二个方面，提供了
[0016]一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法使用的试剂盒，其特征在于，步骤S2中，鉴定番茄基因组时使用试剂盒，所述试剂盒包括引物，具体为：碱基序列为5
’-
AGAAGGCTGGCCTTTCCGAT-3
’
(SEQ ID NO：1)的上游引物BR1-dCAPSF和碱基序列为5
’-
ATGCTGTATGGGTTTCCTTG-3
’
(SEQ ID NO：2)的下游引物BR1-dCAPSR，；
[0017]碱基序列为5
’-
GTATTCCGCGACAAGTATGGGTA-3
’
(SEQ ID NO：3)的上游引物BR2-dCAPSF和碱基序列为5
’-
GGAAAAGTTGAAACCTGTGATG-3
’
(SEQ ID NO：4)的下游引物BR2-dCAPSR。
[0018]作为优选，该试剂盒还包括PCR扩增试剂和酶切试剂，所述的PCR扩增试剂包括GoTaq Flexi Buffer，MgCl2，dNTP Mixture，GoTaq DNA Polymerase和ddH2O，所述的酶切试剂包括ddH2O，10*bufferR，Hinf I，Cutsmart Buffer，AccI。
[0019]本专利技术的第三个方面，提供了番茄基因组第6号染色体37559435bp处和番茄基因组第9号染色体3478110bp处SNP位点在番茄分子标记辅助选择育种中的应用。
[0020]有益效果
[0021]应用上述的2个SNP标记与番茄果实糖度含量相关联，初步认为可以应用于筛选具有高糖性状的番茄材料以及高糖番茄育种和辅助育种中，无需田间统计和耗费大量人力即可快速筛选得到具有高糖性状的番茄材料，既避免了环境因子对表型鉴定的影响又大大缩短了育种周期，同时也为研究这2个SNP位点在番茄育种中的应用提供了重要理论实践基础。
附图说明
[0022]图1示出了BR1-dCAPSF、BR1-dCAPSR在所述群体中番茄材料基因组DNA中PCR产物经过酶切后电泳凝胶成像图，所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，苗期提取番茄的基因组DNA；S2，鉴定番茄基因组第6号染色体37559435bp处的碱基和第9号染色体3478110bp处的碱基；步骤S2中，鉴定番茄基因组第6号染色体37559435bp处的碱基所用引物包括上游引物BR1-dCAPSF：5
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AGAAGGCTGGCCTTTCCGAT-3
’
和下游引物BR1-dCAPSR：5
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ATGCTGTATGGGTTTCCTTG-3
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；鉴定番茄基因组第9号染色体3478110bp处的碱基所用引物包括上游引物BR2-dCAPSF：5
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GTATTCCGCGACAAGTATGGGTA-3
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和下游引物BR2-dCAPSR：5
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GGAAAAGTTGAAACCTGTGATG-3
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。S3，根据所述步骤S2的鉴定结果进行筛选。2.根据权利要求1所述的一种辅助筛选具有高糖性状番茄材料的方法，其特征在于,步骤S3中，鉴定结果的筛选：所述番茄材料基因组第6号染色体37559435bp处基因型为CT或TT且番茄基因组第9号染色体3478110bp处基因型为GG时，所述的番茄材料果实糖度高。3.一种辅...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨学东，朱为民，朱龙英，张雪莲，冯岩，张辉，张迎迎，刘雅慧，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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