一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法技术

本发明专利技术属于中药活性成分检测定量分析领域，公开了一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法。具体包括以下步骤：(1)粗糙凤尾蕨的采集、干燥及粉碎；(2)木犀草苷标准品的配制及标准曲线的绘制；(3)样品溶液的制备；(4)样品溶液中木犀草苷含量的测定。该测定方法操作简便、灵敏度高、重复性好，可以快速精确地测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷的含量，为准确评估和有效控制粗糙凤尾蕨的质量提供了科学依据。据。

【技术实现步骤摘要】
一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法


[0001]本专利技术属于中药活性成分检测定量分析领域，本专利技术涉及一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法。

技术介绍

[0002]粗糙凤尾蕨Pteris cretica var.laeta(Wall.ex Ettingsh.)为凤尾蕨科凤尾蕨属植物欧洲凤尾蕨(Pteris cretica)的变种，生长于海拔900-2600米的酸性土壤，主要分布在我国云南、四川、广西、广东、福建、江西等地；另外在越南、柬埔寨、尼泊尔、印度等地也有分布。粗糙凤尾蕨具有较高的观赏价值和药用价值，该植物味苦性寒，以全草入药，民间用于消炎、止痢，舒筋、止痛。但是，目前关于粗糙凤尾蕨化学成分的研究尚处于较初步阶段，对有效成分的定性定量分析未见报道。
[0003]木犀草苷(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)为粗糙凤尾蕨的主要有效成分，现代药理要研究表明木犀草苷具有平喘、保肝、抗肿瘤、抗真菌、抗氧化和治疗糖尿病、保护心脏等多种药理作用。但是，粗糙凤尾蕨的化学成分复杂，对木犀草苷的分离存在一定的困难，在检测时要将目标成分与杂质分开，色谱条件的优化非常困难。因此，开发一种操作简便、高效快速、精准可靠、重复性好的测定方法对粗糙凤尾蕨中木犀草苷的含量进行分析，对粗糙凤尾蕨药材的质量控制及开发利用具有极其重要的意义。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，该测定方法操作简便、灵敏度高、重复性好，可以快速精确地测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷的含量，为准确评估和有效控制粗糙凤尾蕨的质量提供了科学依据。
[0005]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，具体包括以下步骤：
[0007](1)样品的制备：采集粗糙凤尾蕨药材，进行清洗、干燥、粉碎及筛分；
[0008](2)供试品溶液的制备：称取粗糙凤尾蕨粉末并采用超声辅助提取，得供试品溶液；
[0009](3)对照品储备液的配制：精确称量木犀草苷对照品，并用乙醇配制成一系列不同浓度的对照品溶液；
[0010](4)标准曲线的绘制：取不同浓度的对照品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得不同浓度对照品溶液下的峰面积，将浓度与峰面积进行线性回归分析，得标准曲线回归方程；
[0011](5)供试品溶液中木犀草苷含量测定：取供试品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得供试品溶液中木犀草苷的峰面积，然后根据木犀草苷的标准曲线回归方程的计算木犀草苷的含量。
[0012]所述步骤(1)中采集粗糙凤尾蕨植株的组织样品材料，用去离子水清洗，干燥至恒重后粉碎过100目筛。
cretica var.laeta(Wall.ex Ettingsh.)。
[0035]分析纯乙醇、色谱纯甲醇、色谱纯三氟乙酸(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；
[0036]木犀草苷对照品(≥98％，上海源叶生物科技有限公司)；超纯水。
[0037]实施例1
[0038]一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，具体包括以下步骤：
[0039](1)样品的制备：采集粗糙凤尾蕨植株的组织样品材料，用去离子水清洗，干燥至恒重后粉碎过100目筛。
[0040](2)供试品溶液的制备：取粗糙凤尾蕨粉末经超声辅助提取，得供试品溶液；
[0041]称取步骤(1)所得的样品粉末2.0g，加入100mL的70％乙醇溶液，在60℃下超声(200W，40KHz)提取45min，冷却至室温后，用70％乙醇溶液补充损失的提取溶液，然后过滤，取滤液1mL过0.45μm有机微孔滤膜，即得供试品溶液。
[0042](3)对照品储备液的配制：精确称量木犀草苷对照品14.2mg，置于100mL容量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，完全溶解摇匀后得到对照品储备液A(0.142mg/mL)；然后，分别量取1、2、3、4、5、6mL的对照品储备液A，置于25mL的容量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀后得到一系列标准品储备液(5.68、11.36、17.04、22.72、28.4、34.08μg/mL)。
[0043](4)标准曲线的绘制：取上述(3)中不同浓度的对照品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得不同浓度对照品溶液下的峰面积，以木犀草苷的质量浓度为横坐标(x)与峰面积(y)进行线性回归分析，求出木犀草苷标准曲线回归方程为：y＝71752.8199x+117499.2933，在木犀草苷的质量浓度5.68-34.08μg/mL的范围内呈较好的线性关系(R2＝0.9998)。
[0044]测定时采用的色谱条件如下：
[0045]色谱柱：YMC-Pack ODS-A(250mm
×
4.6mm,5μm)；检测器：SPD-20A；流动相：A相为0.5
‰
(V:V)的三氟乙酸-水溶液，B相为甲醇；梯度洗脱程序：0-30min、30％-60％B，30-35min、60-100％B，35-40min、100％B；进样体积：20μL；柱温：室温；流速：0.5mL/min；检测波长：350nm。
[0046](5)供试品溶液中木犀草苷含量测定：取供试品溶液进行HPLC-DAD检测分析，测试条件同步骤(4)，获得供试品溶液中木犀草苷的峰面积，然后根据木犀草苷的标准曲线回归方程的计算木犀草苷的含量。
[0047](6)精密度试验：取对照品储备液A，在一天内使用步骤(3)中色谱条件连续测定6次，并记录木犀草苷的峰面积，计算得相对标准偏差为(RSD)为0.94％，表明本专利技术方法日内精密度良好；连续测定3天，每天1次，测得其RSD为1.17％，表明本专利技术方法日间精密度较好。
[0048](7)重复性试验：取步骤(2)中的供试品溶液，使用步骤(3)中色谱条件连续测定6次，并记录木犀草苷的峰面积，测得RSD为0.83％，表明本专利技术方法重复性较好。
[0049](8)稳定性试验：取步骤(2)中的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h时，使用步骤(3)中色谱条件测定，并记录木犀草苷的峰面积，测得RSD为1.07％，表明供试品溶液在24h内稳定性较好。
[0050](9)加样回收率试验：取含有量已知的供试品溶液6份，精密加入对照品储备液A，使用步骤(3)中色谱条件连续测定，并记录木犀草苷的峰面积，测得木犀草苷的平均加样回
收率为98.62％，RSD为1.05％。
[0051](10)样品测定：取6批粗糙凤尾蕨样品，按上述方法进样检测。结果，6批样品中木犀草苷的含量分别为3.738、3.762、3.767、3.769、3.784、3.803、3.816mg/g。
[0052]对比例1
[0053](1)样品的制备：采集粗糙凤尾蕨植株的组织样品材料，用去离子水清洗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，其特征是，具体包括以下步骤：(1)样品的制备：采集粗糙凤尾蕨药材，进行清洗、干燥、粉碎及筛分；(2)供试品溶液的制备：称取粗糙凤尾蕨粉末并采用超声辅助提取，得供试品溶液；(3)对照品储备液的配制：精确称量木犀草苷对照品，并用乙醇配制成一系列不同浓度的对照品溶液；(4)标准曲线的绘制：取不同浓度的对照品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得不同浓度对照品溶液下的峰面积，将浓度与峰面积进行线性回归分析，得标准曲线回归方程；(5)供试品溶液中木犀草苷含量测定：取供试品溶液进行HPLC-DAD检测分析，获得供试品溶液中木犀草苷的峰面积，然后根据木犀草苷的标准曲线回归方程的计算木犀草苷的含量。2.如权利要求1所述的一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，其特征是，所述步骤(1)中采集粗糙凤尾蕨植株的组织样品材料，用去离子水清洗，干燥至恒重后粉碎过100目筛。3.如权利要求1所述的一种HPLC-DAD测定粗糙凤尾蕨中木犀草苷含量的方法，其特征是，所述步骤(2)中称取步骤(1)所得的样品粉末2.0g，加入100mL的70％乙醇溶液，在60℃下超声：200W，40K...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡文忠，侯梦阳，修志龙，石玉生，郝可欣，孙兴盛，孙姣，王宇，
申请(专利权)人：大连民族大学，
类型：发明
国别省市：