一种建立具有EMT特征的良性前列腺增生BPH犬模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种建立具有上皮间质转化（Epithelial

【技术实现步骤摘要】
一种建立具有EMT特征的良性前列腺增生BPH犬模型的方法


[0001]本专利技术属于动物模型和医疗评价领域，具体地，涉及一种建立具有EMT特征的良性前列腺增生BPH犬模型的方法。

技术介绍

[0002]良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)是前列腺的一种良性病变，常见于40岁以上的中老年男性，临床症状多见排尿障碍，男性随着年龄的不断增长，患病率呈明显上升趋势，大约有一半超过50岁的男性会出现临床症状。前列腺由于其特殊的生理位置，增生后会挤压尿道，引起排尿障碍等一系列的临床表现如：尿流细弱、尿频、尿急、尿滴沥、尿不尽、尿等待等，给患者的工作和生活带来了严重的影响，尤其是在不重视及时治疗的情况下还会引起一系列严重的并发症，严重影响生殖健康及生活质量。
[0003]BPH是一种由多因素参与的发病机制复杂的疾病，目前为止其病因及确切发病机制仍未完全阐明。关于BPH的病因学假说有雌雄激素协同作用学说、衰老学说、胚胎再唤醒学说、上皮-间质相互作用学说、炎症因子和生长因子发病理论以及干细胞学说等
[1]，这些学说尚不能完全阐明BPH的发生机理。其原因在于缺乏和人类前列腺增生疾病相吻合的动物和体外模型。
[0004]业已证实年龄的增长和正常功能睾丸的存在，是前列腺增生发病的必备条件。目前的研究表明只有犬、猩猩、狒狒和人类一样，随着年龄的增长可以自发前列腺增生，因此针对这些动物尤其是犬，建立和人类前列腺增生特征相似的BPH模型十分重要。然而，目前缺少这方面的系统性研究。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，专利技术人采用不同年龄段(青年、中年和老年)的Beagle犬，系统性构建和人类前列腺增生相似的老年犬自发BPH模型；采用成年Beagle犬去势后给予1:100比例的雌/雄激素，在缩短诱导给药周期的同时建立与犬自发BPH模型相同的BPH模型从而完成本专利技术。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术提供一种建立具有EMT特征的良性前列腺增生BPH犬模型的方法，所述BPH犬模型是指自发BPH犬模型和诱导BPH犬模型，其中，
[0008]建立自发BPH犬模型的步骤包括：
[0009](1)选择年龄大于9岁的犬；
[0010](2)测定所述犬的前列腺指数、外周血激素水平；
[0011]当前列腺指数大于预设域值和/或外周血激素水平大于或小于预设域值，表示所述犬为自发BPH犬模型，
[0012]建立诱导BPH犬模型的步骤包括：
[0013](1)选择年龄在12～15月龄的犬；
[0014](2)适应性饲养7天后，对所述犬进行去势手术；
[0015](3)去势手术第8天，肌肉注射给予比例为1:100的雌雄激素，给药体积为0.1ml/kg体重；
[0016](4)每天给药一次，10天后，即得到诱导BPH犬模型。
[0017]进一步地，建立诱导BPH犬模型的步骤进一步包括测定所述犬的前列腺指数、外周血激素水平的步骤，当前列腺指数大于预设域值和/或外周血激素水平大于或小于预设域值，表示所述犬为诱导BPH犬模型。
[0018]进一步地，所述预设域值是根据正常犬群体的相应数据获得的。在本专利技术的一些实施方案中，所述预设域值为正常犬群体相应数据的平均值、中位值、1/4分位数、3/4分位数、众数等具有统计学意义的数值。
[0019]进一步地，所述前列腺指数指前列腺体积。在本专利技术的一些实施方案中，利用高分辨率小动物超声系统对犬的前列腺上下径、左右径和前后径进行测量，计算前列腺体积，优选地，所述前列腺体积＝上下径
×
左右径
×
前后径
×
π/6。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，所述前列腺体积的域值为正常犬群体前列腺指数的3倍以上。在本专利技术的一些优选的实施方案中，所述前列腺体积的域值为正常犬群体前列腺指数的4倍以上。例如，正常犬群体前列腺体积为6cm3，则预设域值为24cm3。
[0021]进一步地，所述外周血激素水平包括睾酮水平、双氢睾酮水平、雌二醇水平和/或睾酮/雌二醇比值。更近一步地，所述外周血激素水平是指睾酮/雌二醇比值。
[0022]更进一步地，建立自发BPH犬模型和诱导BPH犬模型的步骤均包括检测了EMT相关标志蛋白β-catenin和SMA的表达情况的步骤。
[0023]前列腺增生模型内对应的上皮细胞标志诸如上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、连环蛋白(β-Catenin)和桥连蛋白(desmoplakin)的表达下调或缺失以及间质细胞标志蛋白N-cadherin、Vimentin、Fibronectin等表达上调涉及到一种生物学过程-EMT，即上皮细胞-间充质转化，是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程。EMT可导致细胞间的粘附性降低，上皮细胞极性丧失，细胞外基质受到破坏进而造成细胞运动能力增强和细胞迁移的发生。正是由于EMT的发生，导致上皮细胞向间质细胞转化，间质样细胞一定程度的堆积形成了以间质增生为主要特征的前列腺增生。
[0024]在本专利技术中，所述犬为国际上公认的进行科学研究的纯种犬科动物Beagle犬。
[0025]本专利技术的有益效果
[0026]相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
[0027]在哺乳动物中，只有犬科动物以及部分非人灵长类动物可以和人一样在睾丸功能正常的情况下，随着年龄的增加而自发前列腺增生。犬自发BPH模型作为一种不经过人工干预而自然发生的一种疾病模型，可以模拟人类自然生活状态下的前列腺增生疾病的发生、发展，同时由于其和人类的BPH发病机制有一定的相似性，因此成为一种研究BPH机制的理想模型。
[0028]本专利技术利用国际公认的纯种Beagle犬，首次系统性建立符合GLP规范的，稳定的具有EMT特征的犬自发BPH模型和犬诱导BPH模型，具有重要的研究和临床应用价值。
附图说明
[0029]图1示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle犬前列腺体积(n＝3)。注：与青年组比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05。
[0030]图2示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle犬前列腺脏器重量结果(n＝3)。
[0031]图3示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle犬前列腺脏体比结果(n＝3)。注：与对照组比较，#P<0.05。
[0032]图4示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle犬前列腺脏脑比结果(n＝3)。
[0033]图5示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle犬激素(外周血)睾酮含量(n＝3)。
[0034]图6示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle犬激素(外周血)双氢睾酮含量(n＝3)。
[0035]图7示出了自发BPH和诱导BPH模型Beagle本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立具有EMT特征的良性前列腺增生BPH犬模型的方法，其特征在于，所述BPH犬模型是指自发BPH犬模型和诱导BPH犬模型，其中，建立自发BPH犬模型的步骤包括：选择年龄大于9岁的犬；测定所述犬的前列腺指数、外周血激素水平；当前列腺指数大于预设域值和/或外周血激素水平大于或小于预设域值，表示所述犬为自发BPH犬模型，建立诱导BPH犬模型的步骤包括：选择年龄在12~15月龄的犬；适应性饲养7天后，对所述犬进行去势手术；去势手术第8天，肌肉注射给予比例为1:100的雌雄激素（雌二醇0.25mg/kg，睾酮25mg/kg），给药体积为0.1ml/kg体重；每天给药一次，10天后，即得到诱导BPH犬模型。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，建立诱导BPH犬模型的步骤进一步包括测定所述犬的前列腺指数、外周血激素水平的步骤，当前列腺指数大于预设域值和/或外周血激素水平大于或小于预设域值，表示所述犬为诱导BPH犬模型。3.根据权利要求1或2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆永伟，孙祖越，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，
类型：发明
国别省市：