一种与竹子耐寒性相关的SSR分子标记、SSR引物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种与竹子耐寒性相关的SSR分子标记、SSR引物及其应用，属于分子标记及其检测技术领域。本发明专利技术通过转录组测序结果，进一步筛选ICE1

【技术实现步骤摘要】
一种与竹子耐寒性相关的SSR分子标记、SSR引物及其应用


[0001]本专利技术属于分子标记及其检测
，具体涉及一种与竹子耐寒性相关的SSR荧光标记及其应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]竹子是禾本科(Gramineae)竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，是极其重要的可再生林业资源，也是重要的园林绿化植物。由于受各地气候的影响，竹子在分布上具有明显的地带性和区域性，栽培区域多集中在南方，其中福建、江西、浙江、湖南四省为竹林主要产区。虽然在20世纪50、60年代进行了大规模“南竹北移”的引种工作，使一些抗性较强的散生竹引种到黄河流域以北地区，竹子引种工作取得了较大成功，但温度一直是竹子在我国黄河流域以北地区园林绿化中得不到进一步推广应用的主要限制因子。因此，筛选耐寒竹子种质资源和品种对于我国竹子的稳定栽培和生产具有重要意义。目前对竹子品种进行耐寒鉴定的主要方法是进行实地越冬能力的表型鉴定。该方法虽然比较简便、直观，但费时费工，易受生长季节和环境影响，且存在主观偏差，不能精确、快捷地为竹子品种的耐寒鉴定提供科学依据。
[0004]随着分子生物学技术的发展，基于DNA多态性的分子标记技术逐渐成为生物基因分型、遗传多样性分析、品种鉴定以及分子辅助育种的重要工具。在遗传多样性分析中常用的分子标记主要有RFLP、RAPD、AFLP、ISSR、SSR等。其中，SSR标记因其在基因组中散在分布，具有多态性丰富，操作便利，共显性且高度可重复性等优点，已被广泛应用于植物种质资源研究和分子辅助育种实践中。然而，专利技术人发现，鲜有基于SSR标记对竹子耐寒品种进行鉴定的报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种与竹子耐寒性相关的SSR荧光标记及其应用。本专利技术针对当前鉴定竹子耐寒特性通常实地进行，表型鉴定周期长、工作量大且繁琐、易受生长季节和环境影响以及存在主观偏差等一系列问题，提供与竹子耐寒相关SSR引物并利用这些引物对竹子品种进行耐寒鉴定。基于上述研究结果，从而完成本专利技术。
[0006]具体的，本专利技术涉及以下技术方案：
[0007]本专利技术的第一个方面，提供一种与竹子耐寒性相关的SSR分子标记，所述SSR分子标记为如下任意一个或多个，更具体的，所述分子标记共9个，依次命名为1号、2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号和9号；
[0008]上述分子标记分别通过以下引物对扩增得到：SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4、SEQ ID NO.5-6、SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10、SEQ ID NO.11-12、SEQ ID NO.13-14、
SEQ ID NO.15-16、SEQ ID NO.17-18所示的引物。
[0009]本专利技术的第二个方面，提供一种与竹子耐寒性相关的SSR引物，其含有以下9对特异性引物对，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-18所示。
[0010]本专利技术的第三个方面，提供含有上述分子标记和/或含有上述SSR引物的试剂盒。
[0011]本专利技术的第四个方面，提供上述分子标记、SSR引物和/或试剂盒在鉴定耐寒竹子种质资源中的应用。
[0012]本专利技术的第五个方面，提供上述分子标记、SSR引物和/或试剂盒在竹子辅助育种中的应用。
[0013]本专利技术的第六个方面，提供上述分子标记、SSR引物和/或试剂盒在竹子种质资源改良中的应用。
[0014]本专利技术的第七个方面，提供一种耐寒或不耐寒竹子种质资源SSR指纹图谱的构建方法，所述构建方法包括：以本专利技术的提供的SSR引物对耐寒或不耐寒竹子材料的DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，构建耐寒或不耐寒竹子种质资源的SSR指纹图谱。
[0015]上述构建方法中，PCR扩增方法为：反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
[0016]上述构建方法构建得到的耐寒或不耐寒竹子种质资源指纹图谱同样属于本专利技术的保护范围。
[0017]本专利技术的第八个方面，提供一种鉴定耐寒竹子品种的方法，包括：提取待检竹子样品的DNA，以本专利技术提供的SSR引物中的任意一对或多对引物对待检竹子样品的DNA进行PCR扩增。
[0018]本专利技术的第九个方面，提供上述方法在竹子种质资源耐寒鉴定及品种改良中的应用。
[0019]本专利技术还提供了上述方法在竹子辅助育种中的应用。
[0020]以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
[0021]上述技术方案通过转录组测序结果，进一步筛选ICE1-CBF-COR通路相关基因，在相关通路里找到了与抗寒标记相关的38条unigene，根据unigene里SSR位点分布特点，合成38对SSR引物，通过引物筛选，最终得到了9对多态性较好的位点，并进一步进行验证，最终证明上述SSR引物扩增获得的SSR分子标记可用于竹子种质资源耐寒鉴定。
[0022]上述技术方案的检测方法在短时间内即可完成耐寒竹子鉴定，具有高效、准确、低成本、操作简便等优势，为竹子品种选育过程中优异种质的合理利用提供了技术支持，可应用于竹子种质资源或品种的耐寒鉴定及分子辅助育种，具有良好的实际生产和应用之价值。
附图说明
[0023]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0024]图1为本专利技术实施例中部分样本在1号位点的峰图；
[0025]图2为本专利技术实施例中部分样本在8号位点的峰图。
具体实施方式
[0026]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0027]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0028]结合具体实例对本专利技术作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本专利技术，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径购买得到。
[0029]如前所述，目前对竹子品种进行耐寒鉴定的主要方法是进行实地越冬能力的表型鉴定。该方法虽然比较简便、直观，但费时费工，易受本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与竹子耐寒性相关的SSR分子标记，其特征在于，所述SSR分子标记为如下任意一个或多个：所述分子标记依次命名为1号、2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号和9号；所述分子标记1-9号分别通过以下引物对扩增得到：SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4、SEQ ID NO.5-6、SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10、SEQ ID NO.11-12、SEQ ID NO.13-14、SEQ ID NO.15-16和SEQ ID NO.17-18所示的引物。2.一种与竹子耐寒性相关的SSR引物，其特征在于，所述SSR引物包含以下9对特异性引物对，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-18所示。3.含有权利要求1所述SSR分子标记和/或含有权利要求2所述SSR引物的试剂盒。4.权利要求1所述SSR分子标记、权利要求2所述SSR引物和/或权利要求3所述试剂盒在鉴定耐寒竹子种质资源中的应用。5.权利要求1所述SSR分子标记、权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚俊修，吴德军，李善文，任飞，李庆华，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：