一种高效降解虫卵壳的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效降解虫卵壳的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术通过选用对皮毛纤维无伤害的几丁质酶和几丁质结合蛋白，将重组几丁质酶和重组几丁质结合蛋白等酶复配，对虫卵壳的几丁质层进行水解，能在短时间内破坏虫卵壳的最厚的中部几丁质层，从而高效的将虫卵壳降解成碎片。能够替代目前效率低下的人工摘除方法，为产业化处理皮毛中的虫卵壳提供了更好的方法，有利于提高皮毛产品的品质。有利于提高皮毛产品的品质。有利于提高皮毛产品的品质。

【技术实现步骤摘要】
一种高效降解虫卵壳的方法


[0001]本专利技术涉及一种高效降解虫卵壳的方法，属于生物


技术介绍

[0002]虫卵壳，即动物体身上的寄生虫死后形成的外壳，常附着于各种动物皮毛外层或植物体表层，通常与宿主相互纠缠、黏附成为一种复合体。这种复合体结合紧密，常规方法难以将其去除，严重影响皮毛的外观，从而降低动物皮毛的价值。
[0003]研究表明，虫卵壳由外到内主要分为基本的3层结构，分别是最外层的卵黄质层、中层的几丁质层和内层的脂质层。这些层都是内源性形成的。其中最厚的几丁质层是由线性几丁质核和复合物外层组成的，是一种高结晶度的复合结构，结构最为复杂致密。
[0004]目前通常通过人工摘除的方法来进行皮毛的处理，但是效果均不是很理想，不仅会破坏纤维的品质，且对专业人员的技术水平要求较高，成本较大。目前尚未有使用生物酶法对虫卵壳进行降解的研究，其中最大的困难是目标酶系的选择。对于虫卵壳这类天然大分子的物质，想要对其进行高效降解，目标酶系的选择至关重要。

技术实现思路

[0005][技术问题][0006]本专利技术旨在根据对现有虫卵壳的成分研究，针对其有效成分及空间结构，设计一种能高效降解虫卵壳的方法，通过水解破坏虫卵壳最厚的中部几丁质层，从而达到快速降解虫卵壳的目的。
[0007][技术方案][0008]本专利技术提供了一种降解虫卵壳的方法，所述方法是利用几丁质酶和几丁质结合蛋白降解虫卵壳。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述几丁质酶来源于A.veronii、S.griseus或S.albolongus中的一种或多种。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，来源于A.veronii的几丁质酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，来源于S.griseus的几丁质酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，来源于S.albolongus的几丁质酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述复合酶液中几丁质结合蛋白来源于S.marcescens、C.japonicus或E.faecalis中的一种。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，来源于S.marcescens的几丁质结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，来源于C.japonicus的几丁质结合蛋白的氨基酸序
列如SEQ ID NO.5所示。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，来源于E.faecalis的几丁质结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，所述几丁质酶的添加量为1500-2000U/L。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述几丁质结合蛋白的添加量为500-1000U/L。
[0019]在本专利技术的一种实施方式中，将虫卵壳放置于含有几丁质酶和几丁质结合蛋白的反应体系中，在反应体系中孵育1-2h。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，反应温度为50-60℃。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，反应pH为5.0-6.0。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，反应体系中还含有0.2-0.5mg/L的可溶性镁盐。
[0023]本专利技术还提供了所述方法在降解虫卵壳中的应用。
[0024][有益效果][0025]本专利技术通过选用对皮毛纤维无伤害的几丁质酶和几丁质结合蛋白，将重组几丁质酶和重组几丁质结合蛋白等酶复配，对虫卵壳的几丁质层进行水解，实现了虫卵壳的高效降解。能够替代目前效率低下的人工摘除方法，为产业化处理皮毛中的虫卵壳提供了更好的方法，有利于提高皮毛产品的品质。
附图说明
[0026]图1为经几丁质酶和几丁质蛋白处理后的虫卵残留物形态图；
[0027]图2为未经酶处理的厚型虫卵形态图；
[0028]图3为未经酶处理的薄型虫卵形态图。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施例，对本专利技术进行进一步的阐述。
[0030]下述实施例中涉及的大肠杆菌JM109、大肠杆菌BL21(DE3)购自生工生物工程(上海)股份有限公司，pET-28a(+)、pET-20b(+)质粒购自优宝生物公司，几丁质底物购自上海sigma公司。
[0031]下述实施例中涉及的培养基如下：
[0032]LB培养基：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L；
[0033]TB培养基：胰蛋白胨12g/L，酵母粉24g/L，甘油5g/L，KH2PO
4 2.31g/L，K2HPO4·
3H2O16.43g/L。
[0034]下述实施例中涉及的检测方法如下：
[0035]几丁质酶的酶活测定方法：在37℃下，采用DNS测还原糖法测定酶活力。
[0036]反应体积为2.5mL，包括100μL发酵粗酶液和250μL 1％胶体几丁质底物的柠檬酸缓冲液(pH 5.0)，37℃反应1h后加入2mL DNS终止反应，煮沸5min后放入冰水冷却至室温，12000
×
g离心5min后测上清540nm处吸光值；
[0037]酶活定义为：在37℃，每小时水解胶体几丁质生成1μmol N-乙酰氨基葡萄糖所需要的酶量即为一个酶活力单位(1U)。
[0038]实施例1：大肠杆菌BL21/chitinase-pET20b(+)基因工程菌的构建
[0039]根据SEQ ID NO.1或NO.2或NO.3氨基酸序列经密码子优化后化学合成几丁质酶基因；使用限制性内切酶EcoR I和Not I对获得的基因以及pET20b(+)载体进行酶切后将酶切获得的产物进行连接，获得重组质粒pET20b(+)-AvChi；将重组质粒pET20b-AvChi化转到JM109感受态细胞中，获得转化产物；将转化产物涂布带有氨苄青霉素抗性的LB固体培养基，37℃倒置培养10-12h；挑取阳性转化子，提取质粒进行测序验证，验证成功，得到重组大肠杆菌BL21/pET20b-AvChi。
[0040]实施例2：大肠杆菌BL21/CBP-pET28a(+)基因工程菌的构建
[0041]根据SEQ ID NO.4或NO.5或NO.6氨基酸序列经密码子优化后化学合成几丁质结合蛋白基因；使用限制性内切酶EcoR I和Not I对获得的基因以及pET28a(+)载体进行酶切后将酶切获得的产物进行连接，获得重组质粒pET28a-CBP21；将重组质粒pET28a-CBP21化转到JM109感受态细胞中，获得转化产物；将转化产物涂布带有卡那霉素抗性的LB固体培养基，37℃倒置培养10-12h；挑取阳性转化子，提取质粒进行测序验证，验证成功，得到重组大肠杆菌BL21/pET28a-CBP21。
[0042]实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降解虫卵壳的方法，其特征在于，所述方法是利用几丁质酶和几丁质结合蛋白降解虫卵壳。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述几丁质酶来源于A.veronii、S.griseus或S.albolongus中的一种或多种。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合酶液中几丁质结合蛋白来源于S.marcescens、C.japonicus或E.faecalis中的一种。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述几丁质酶的添加量为1500-2000U/L。5.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，陈晟，鲁梦唯，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：