一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法技术

本申请示出一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法，通过采集结直肠癌高危人群的粪便样本和健康人群的粪便样本，采用粪便基因组DNA提取试剂盒对所述粪便样本进行粪便基因组DNA的提取，对所述粪便基因组DNA进行沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌的探针法实时荧光定量PCR检测，获得检测CT值，并根据检测CT值进行相对丰度表达分析，得到分析结果用于诊断；根据所述分析结果得到ROC曲线来评价诊断效能。本申请示出的一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法，提高结直肠癌高危人群检测的准确率，简化诊断过程，在结直肠癌早期防治中起到重大作用。作用。作用。

【技术实现步骤摘要】
一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及生物技术及分子生物学领域，主要涉及一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]大量研究表明肠道菌群紊乱与消化系统疾病的发生、发展密切相关。因此，肠道菌群可能是结直肠癌高危人群诊断的新靶点。筛选结直肠癌高危人群相关的肠道菌群标志物，对结直肠肿瘤的早期防治具有重要的意义和价值。
[0003]在中国，结直肠癌的早诊早治率水平较低，结直肠癌早期多无症状，对结直肠癌的传统筛查方法主要包括化学法粪便隐血试验、免疫法粪便隐血试验和纤维结肠镜检查，这些方法各有优缺点，但主要是针对疾病症状进行检测，检测结果通常提示受试者已经患病。
[0004]结直肠癌高危人群通常通过定期肠镜检查排除或确诊结直肠癌，但中国医疗资源的分布以及肠镜痛苦过程限制了肠镜筛查的实际应用。因此，需要提供一种简单准确的结直肠癌诊断组合物、试剂盒及方法，对结直肠癌高危人群进行早期防治，有效降低结直肠癌的发病率。

技术实现思路

[0005]基于上述问题，本申请的目的在于提供一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法。提高结直肠癌高危人群检测的准确率，简化诊断过程，用于结直肠癌的早期防治。
[0006]第一方面，本申请示出了一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物，包含与生物标志物特异性结合的检测试剂，所述生物标志物至少来源于四个菌种：沃氏嗜胆菌(Bilophila wadsworthia，BW)、普氏梭杆菌(Flavonifractor plautii，FP)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，LP)、狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis，PD)。
[0007]第二方面，本申请示出了一种辅助诊断结直肠癌高危人群的试剂盒，包含上述所述的辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物。
[0008]第三方面，本申请示出了一种辅助诊断结直肠癌高危人群的方法，所述步骤包括：
[0009]诊断结直肠癌高危人群；
[0010]采集所述结直肠癌高危人群的粪便样本和健康人群的粪便样本，将所述结直肠癌高危人群设为实验组，健康人群设为对照组；
[0011]采用粪便基因组DNA提取试剂盒对所述粪便样本进行粪便基因组DNA的提取，测定所述粪便基因组DNA的浓度和纯度，采用琼脂糖凝胶电泳法对所述粪便基因组DNA进行质量检测；
[0012]对所述粪便基因组DNA进行四种微生物菌群的探针法实时荧光定量PCR检测，测定上述所述的生物标志物含量，所述生物标志物为沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌的保守序列；根据所述生物标志物含量得到四种微生物菌群的检测CT值；
[0013]根据所述四种微生物菌群的检测CT值进行相对丰度表达分析，得到分析结果用于辅助诊断；
[0014]根据所述分析结果得到ROC曲线来评价辅助诊断效能。
[0015]本申请示出的一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物、试剂盒及方法，通过采集结直肠癌高危人群的粪便样本和健康人群的粪便样本，采用粪便基因组DNA提取试剂盒对所述粪便样本进行粪便基因组DNA的提取，对所述粪便基因组DNA进行沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌的探针法实时荧光定量PCR检测，获得检测CT值，并根据检测CT值进行相对丰度表达分析，得到分析结果用于诊断；进一步根据所述分析结果得到ROC曲线来评价诊断效能。本申请示出的辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物及试剂盒，具有高度的特异性和敏感度，检测结果稳定，在示例样本中检测灵敏度平均可达83.3％，特异性平均可达87.5％，具有较高的临床参考价值。本申请示出的一种辅助诊断结直肠癌高危人群的方法，首次证实了四种肠道微生物种群沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌在结直肠癌高危人群及健康人群粪便标本中的客观差异存在，能够为结直肠癌高危人群筛查提供更可靠的判断依据。本申请示出的技术方案能提高结直肠癌高危人群检测的准确率，简化诊断过程，在结直肠癌早期防治中起到重大作用。
附图说明
[0016]为了更清楚的说明申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域的普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1为本申请示出的一种辅助诊断结直肠癌高危人群的方法步骤图；
[0018]图2为本申请示出沃氏嗜胆菌探针1/2应用探针法实时荧光定量PCR在12例健康人群及12例结直肠癌高危人群中的检测结果；
[0019]图3为本申请示出普氏梭杆菌探针应用探针法实时荧光定量PCR在12例健康人群及12例结直肠癌高危人群中的检测结果；
[0020]图4为本申请示出植物乳杆菌探针应用探针法实时荧光定量PCR在12例健康人群及12例结直肠癌高危人群中的检测结果；
[0021]图5为本申请示出狄氏副拟杆菌探针1/2应用探针法实时荧光定量PCR在12例健康人群及12例结直肠癌高危人群中的检测结果。
[0022]图6为本申请示出粪便标本中沃氏嗜胆菌探针检测结果的ROC曲线；
[0023]图7为本申请示出粪便标本中普氏梭杆菌探针检测结果的ROC曲线；
[0024]图8为本申请示出粪便标本中植物乳杆菌探针检测结果的ROC曲线；
[0025]图9为本申请示出粪便标本中狄氏副拟杆菌探针检测结果的ROC曲线。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物，其包含与生物标志物特异性结合的检测试剂，所述生物标志物至少来源于四个菌种：沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌。
[0027]所述四个菌群的选定方法为：
[0028]所述沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌均为人类核心菌群之一，所述沃氏嗜胆菌擅长在胆汁丰盛的肠道中大量繁殖，引起炎症危害肠道健康，普氏梭杆菌与肠道对纤维素的代谢能力有关，植物乳杆菌与免疫器官发育、肠道形成和自我修复有关，狄氏副拟杆菌与肥胖、脂肪肝、糖尿病等疾病呈显著负相关，因此根据已有文献和前期工作提出假设，沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌能够作为诊断结直肠癌高危人群分子标志物。
[0029]所述生物标志物为沃氏嗜胆菌、普氏梭杆菌、植物乳杆菌、狄氏副拟杆菌的保守序列，对其保守序列进行检测的检测试剂包括四种微生物菌群的特异性引物及探针序列，其相关信息如表1所示：
[0030]表1四种微生物菌群的特异性引物及探针序列
[0031][0032]其中，FAM为荧光基团，BHQ1为荧光淬灭基团，探针成功捕获靶点序列，则淬灭基团被剪切，荧光基团发散荧光被检测，游离在液体系统中的探针由于淬灭基团的存在，不发光。
[0033]本专利技术还提供一种辅助诊断结直肠癌高危人群的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含根据上述所述的辅助诊本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物，其特征在于，包含与生物标志物特异性结合的检测试剂，所述生物标志物至少来源于四个菌种：沃氏嗜胆菌(Bilophila wadsworthia，BW)、普氏梭杆菌(Flavonifractor plautii，FP)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，LP)、狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis，PD)。2.根据权利要求1所述的一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物，其特征在于，所述检测试剂包括：检测沃氏嗜胆菌的引物1：上游引物1 5
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TTCAGTACGGTCCCTTCGCT-3
’
；下游引物1 5
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AGCTGCTTGGCCATCTTCAC-3
’
；检测沃氏嗜胆菌的探针1:探针1 5
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AATTCCCCGACTGCGACGTCTACCGCT-3
’
；检测沃氏嗜胆菌的引物2：上游引物2 5
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GGTTCGGCTACCAGCACTTC-3
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；下游引物2 5
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GACCTTTTCGGTCGTCACGG-3
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；检测沃氏嗜胆菌的探针2：探针2 5
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AACGTCCAGCCCGACATCGTCACGA-3
’
；检测普氏梭杆菌的引物1：上游引物1 5
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GCCTGGAGGCCAAATACGAC-3
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；下游引物1 5
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TAGGACACGCCGTTGAGGAT-3
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；检测普氏梭杆菌的探针1：探针1 5
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ATGTCACCCGCATCCTGGAGAGCATGC-3
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；检测植物乳杆菌的引物1:上游引物1 5
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CCGACCGATGGCTTTCAACA-3
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；下游引物1 5
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AGAACGCTTCCCGTGAGTTG-3
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；检测植物乳杆菌的探针1:探针1 5
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TCGACCTCGTAAACCAAGGTCGCGTCG-3
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；检测狄氏副拟杆菌的引物1:上游引物1 5
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TGCCGGCTCTGTCGCTTTT-3
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；下游引物1 5
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GAGCGTAGAGGGCTCACGAAA-3
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；检测狄氏副拟杆菌的探针1:探针1 5
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ACGCCCGGCAATTCCTTGGAGCTTACC-3
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；检测狄氏副拟杆菌的引物2:上游引物2 5
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CGTTATGCGGACAGCACGTA-3
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；下游引物2 5
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TGTTCGTATCGTTCACGGCG-3
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；检测狄氏副拟杆菌的探针2:探针2 5
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TCCCGGCGTATGGCATCCCGTATCCAT-3
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。3.根据权利要求2所述的一种辅助诊断结直肠癌高危人群的组合物，其特征在于，所述探针为荧光探针，其荧光报告...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜勇，张旭，丁璐，纳莉，
申请(专利权)人：宁夏医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：