一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用。所述胆汁酸复合菌剂包括狄氏副拟杆菌菌悬液、多形拟杆菌菌悬液、胆汁酸和多苞桉桉树精油，其体积质量比为2

【技术实现步骤摘要】
一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用


[0001]本专利技术属于水产养殖领域，具体涉及一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用。
技术背景
[0002]黄颡鱼是一种无鳞鱼，属小型淡水名特优水产养殖品种，其富含氨基酸，肉质细嫩，味道鲜美，营养价值高，具有滋补作用和药用价值，深受人们的喜爱。当下的黄颡鱼养殖模式，一味地追求快、高、多，过量的投喂和过度密集的生存环境非常容易导致鱼群出现诸如肠胃炎、肝胆综合症等疾病，还会导致现在新型的黄颡鱼“裂头病”。而当鱼群发生疾病时，治疗需要耗费时间、药物、人工和金钱，增加了养殖消耗和成本，还会降低产量、延长养殖周期，增加养殖成本，造成养殖经济损失。

技术实现思路

[0003]为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用。所述胆汁酸复合菌剂能够保肝护胆和修复黄颡鱼肝胆损伤，并能够有效的杀虫抑菌。
[0004]为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0005]本专利技术一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用。
[0006]进一步的，所述胆汁酸复合菌剂包括狄氏副拟杆菌菌悬液、多形拟杆菌菌悬液、胆汁酸和多苞桉桉树精油。
[0007]进一步的，所述狄氏副拟杆菌菌悬液、多形拟杆菌菌悬液、胆汁酸和多苞桉桉树精油的体积质量比为2-3:2-4:2-3:1。
[0008]进一步的，所述狄氏副拟杆菌菌悬液由保藏编号为CGMCC No.20820的狄氏副拟杆菌LCG-06制备而成。
[0009]进一步的，所述狄氏副拟杆菌LCG-06菌悬液的制备方法为：将所述狄氏副拟杆菌LCG-06于营养液体培养基中，37℃厌氧环境下活化48h；在活化菌液中加入质量浓度为20％的蔗糖溶液，混合均匀后离心，在沉淀物中添加质量浓度为10％的蔗糖溶液重悬，即得到狄氏副拟杆菌LCG-06菌悬液。
[0010]进一步的，所述狄氏副拟杆菌LCG-06菌悬液的菌含量不少于2
×
109CFU/mL。
[0011]进一步的，所述多形拟杆菌菌悬液由保藏编号为CGMCC No.20818的多形拟杆菌GL-02制备而成。
[0012]进一步的，所述胆汁酸复合菌剂的总菌含量不少于6
×
108CFU/mL。
[0013]进一步的，所述胆汁酸复合菌剂的使用方法为：将胆汁酸复合菌剂添加到黄颡鱼的养殖饲料中，每天3次，投喂7-15天。
[0014]进一步的，所述胆汁酸复合菌剂的添加量为1-3mL/kg饲料。
[0015]进一步的，所述胆汁酸复合菌剂能够恢复黄颡鱼肠道健康和修复肝胆损伤。
[0016]进一步的，所述胆汁酸复合菌剂能够增强黄颡鱼体质以及抗应激能力。
[0017]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
[0018]本专利技术从猪粪便中分别筛选出一株狄氏副拟杆菌LCG-06和多形拟杆菌GL-02，其不会对动物人体造成伤害，将两株菌株发酵制备成菌悬液，与胆汁酸和多苞桉桉树精油共同制备得到复合菌剂，该复合菌剂成分天然，无毒副作用，能够显著增加恢复黄颡鱼肠道健康，进而保肝护胆和修复肝胆损伤，同时具有显著的抗菌消炎驱虫的作用，还能够增强黄颡鱼体质以及抗应激能力，提高黄颡鱼的养殖收益，因此具有广阔的应用前景。
附图说明
[0019]图1为所述狄氏副拟杆菌LCG-06的菌落图片。
[0020]图2为所述多形拟杆菌GL-02的菌落图片。
[0021]图3为实施例2中养殖过程中出现问题的黄颡鱼；上图为发生腹腔积水的黄颡鱼，下图为解剖后发现肝胆综合征并发细菌感染的黄颡鱼内脏。
[0022]图4为使用所述胆汁酸复合菌剂后恢复正常的黄颡鱼肝脏。
[0023]图5为实施例3中诊断为裂头病的黄颡鱼。
[0024]图6为使用所述胆汁酸复合菌剂的无明显损伤的黄颡鱼。
具体实施方式
[0025]以下结合具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步详细的说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0026]实施例1：
[0027]一、狄氏副拟杆菌LCG-06的筛选和鉴定
[0028]1、狄氏副拟杆菌LCG-06的筛选
[0029]从猪肠道内取肠内粪便，将10g粪便和100mL无菌水混匀，过滤去除杂质后制成粪便稀释液，然后继续向稀释液中添加无菌水，制备成10-1
、10-2
、10-3
、10-4
、10-5
稀释液；再分别取10-2
、10-3
、10-4
、10-5
稀释液涂布至大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)上，在含有80％N2、10％CO2和10％H2的厌氧环境下，37℃培养4d，选取明显的菌落进行多次纯化后得到单菌落，并将其命名为LCG-06，然后置于大豆酪蛋白琼脂斜面培养基中冷藏保存。所述的TSA培养基的配方为：
[0030]胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，无菌水1000mL，pH 7.3
±
0.2。
[0031]如图1所示，所述菌株LCG-06在TSA培养基的菌落生物学特征为：圆形或类圆形，乳白色或米白色，扁平，直径0.2-1.8mm，表面光滑无光泽，半透明，边缘较整齐。
[0032]2、狄氏副拟杆菌LCG-06的鉴定
[0033]提取所述菌株LCG-06的基因组DNA，并以此为模板，使用16S rRNA通用引物进行PCR扩增，获得16S rRNA扩增序列后测序，然后将该序列进行Blast比对，结果显示菌株LCG-06与GenBank基因库中的狄氏副拟杆菌Parabacteroides distasonis同源性最高，因此判定菌株LCG-06为狄氏副拟杆菌。
[0034]将筛选到的狄氏副拟杆菌LCG-06进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏
管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2020年09月25日；狄氏副拟杆菌Parabacteroides distasonis的保藏编号为CGMCC No.20820。
[0035]3、狄氏副拟杆菌LCG-06菌悬液的制备
[0036](1)将保存的狄氏副拟杆菌LCG-06挑取至营养液体培养基(配方为胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，无菌水1000mL，pH 7.4)中，37℃厌氧环境下活化培养48h，得到狄氏副拟杆菌LCG-06菌液；
[0037](2)在菌液中以1:1的体积比加入质量浓度为20％的蔗糖溶液，混合均匀后10000rpm/min离心5min，得到菌株沉淀物；
[0038](3)用质量浓度为10％的蔗糖溶液重新溶解上述菌株沉淀物，而蔗糖溶液的体积与菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胆汁酸复合菌剂在用于制备黄颡鱼饲料添加剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胆汁酸复合菌剂包括狄氏副拟杆菌菌悬液、多形拟杆菌菌悬液、胆汁酸和多苞桉桉树精油。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌菌悬液、多形拟杆菌菌悬液、胆汁酸和多苞桉桉树精油的体积质量比为2-3:2-4:2-3:1。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌菌悬液由保藏编号为CGMCC No.20820的狄氏副拟杆菌LCG-06制备而成。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述多形拟杆菌菌悬液由保藏编号为CGMCC No.20818的多形拟杆菌G...

【专利技术属性】
技术研发人员：张西雷，曹爱智，娄倩倩，籍立民，
申请(专利权)人：山东龙昌动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：