检测癌症患者中肿瘤抗原的诊断性测定法制造技术

本发明专利技术一般性涉及使用细胞培养物的诊断性测定法，特别是用于分析样品，特别是患者样品中表达报告细胞的嵌合抗原受体(CAR)的测定法，以通过量化肿瘤抗原的表达和/或预测对癌症免疫疗法的临床反应来诊断癌症。本发明专利技术的另一方面是提高例如癌症免疫疗法的安全性。一方面是提高例如癌症免疫疗法的安全性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测癌症患者中肿瘤抗原的诊断性测定法


[0001]本专利技术一般性涉及使用细胞培养物的诊断性测定法，特别是用于分析样品，特别是患者样品中表达报告细胞的嵌合抗原受体(CAR)的测定法，以通过量化肿瘤抗原的表达和/或预测对癌症免疫疗法的临床反应来诊断癌症。本专利技术的另一方面是提高例如癌症免疫疗法的安全性。

技术介绍

[0002]在所有年龄段的人群中，癌症都是导致死亡的首要起因之一。癌症是细胞的一种异常阶段，其导致一个或多个细胞群不受控制的增殖。最终，增殖导致正常生物学功能异常，从而导致多种临床和非临床症状。肿瘤细胞通常表现出一种或几种将肿瘤细胞与正常细胞区分开的特性，例如形态、胎抗原的表达、接触抑制缺乏和生长因子不依赖性。
[0003]不幸的是，大多数癌症在疾病的早期阶段是无症状的，这导致了具有挑战性的情况，例如，对于肺癌，只有15％在发现时还处于早期局部化阶段。但是，对于这些得到早期诊断的患者，五年生存率可能高达85％，而当癌症扩散到其他器官后，此类患者中只有2％的人可以生存5年。尽管数十年来癌症治疗的改进令人鼓舞，但成功治疗癌症最重要的预测指标仍然是疾病的早期检测和分类。
[0004]通常，由于这些细胞源于“自身”，因此免疫系统不会发出警报并触发对肿瘤细胞的识别。癌症免疫疗法的目的是通过识别仅由肿瘤表达的独特蛋白，同时促进免疫细胞的作用，从而控制免疫系统攻击肿瘤细胞，例如通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或T细胞细胞毒性，从而实现对肿瘤细胞的破坏。这种促进可以通过经典的具有ADCC能力的抗体和/或T细胞双特异性抗体，或表达识别肿瘤抗原或人工嵌合抗原(CAR-T)的天然T细胞受体(TCR-T)的工程化的T细胞来实现。抗体可识别常规肿瘤表面蛋白或MHC复合体(pMHC)背景中呈递的蛋白衍生肽。在任一种方法中，都不是所有患者均对临床疗法产生反应，因为在各种癌症类型的患者中，肿瘤细胞表面或pMHC上表达的肿瘤抗原密度差异很大。
[0005]因此，有效检测并量化肿瘤抗原(表面和/或pMHC)的工具将确保更好地诊断癌症患者，并且可以预测对相应癌症免疫疗法产生临床反应的可能性。此外，癌症免疫疗法有时会触发针对正常组织的有害免疫反应。早期预测免疫疗法安全性将有助于医生监测患者潜在的致命副作用。
[0006]鉴于例如淋巴或血液中已经存在非常少量的存活肿瘤细胞可能指示疾病进展中的重要标志，检测多种体液中的肿瘤抗原仍然是最重要的。免疫学诊断性测定为此提供了一种能够检测多种疾病的重要工具。然而，例如在MHC呈递的蛋白衍生肽的背景中，此类测定的灵敏性和/或特异性可能并不总是足以可靠地检测肿瘤细胞。
[0007]因此，仍然需要高度灵敏且稳健的诊断性测定法，以检测适用于检测恶性细胞的癌抗原和/或预测靶上组织外效应，以提高免疫疗法的安全性并预测患者对特定免疫疗法的反应。
[0008]本专利技术人开发了一种具有集成简明读出的高度灵活的测定法，在用以筛选癌症患
者中的肿瘤抗原的高通量形式中可行，同时适用于经典表面癌抗原和MHC复合体呈递的蛋白衍生肽。本专利技术适用于癌症患者的诊断、免疫疗法临床反应的预测以及免疫疗法的安全性测量。

技术实现思路

[0009]本专利技术一般性涉及用于确定样品中特别是源自患者的样品中靶抗原例如肿瘤靶抗原和/或肿瘤细胞的存在的诊断性测定法，并将靶抗原的检测与报告细胞响应于肿瘤细胞的激活相结合。本专利技术的测定法适合于筛选患者样品并允许在表面抗原和/或MHC呈递的蛋白衍生肽的背景中精确测量抗原密度。本专利技术的测定法还可用于预测对癌症免疫疗法产生临床反应的可能性。
[0010]因此，本文提供了用于确定样品中肿瘤细胞的存在的诊断性测定法，所述诊断性测定法包括以下步骤：
[0011]a)使所述样品与表达报告T(CAR-T)细胞的嵌合抗原受体(CAR)接触，其中所述报告CAR-T细胞包含：
[0012]i.能够与所述肿瘤细胞特异性相互作用的CAR，其中所述CAR可操作地偶联至响应元件；
[0013]ii.在所述响应元件控制下的报告基因；以及
[0014]b)通过测量所述报告基因的表达来测定T细胞的激活以确定所述肿瘤细胞的存在。
[0015]在一个实施例中，所述CAR包含能够与肿瘤靶抗原特异性结合的靶抗原结合部分。
[0016]在一个实施例中，所述靶抗原结合部分是Fab片段。
[0017]在一个实施例中，所述报告T细胞是Jurkat细胞。
[0018]在一个实施例中，所述肿瘤靶抗原是细胞表面抗原和/或受体。
[0019]在一个实施例中，所述肿瘤靶抗原选自由CD20、CD38、CD138、CEA、EGFR、FolR1、HER2、LeY、MCSP、STEAP1、TYRP1和WT1或其片段组成的组。
[0020]在一个实施例中，所述肿瘤靶抗原是与人类主要组织相容性复合体(MHC)的分子结合的肽。
[0021]在一个实施例中，所述靶抗原结合部分是T细胞受体样(TCRL)抗原结合部分。
[0022]在一个实施例中，所述CAR包含至少一个细胞内刺激信号传导和/或共刺激信号传导结构域。
[0023]在一个实施例中，所述细胞内信号传导和/或共信号传导结构域的激活导致响应元件的激活。
[0024]在一个实施例中，所述响应元件的激活导致报告基因的表达。
[0025]在一个实施例中，所述响应元件是NFAT途径、NF-κB途径或AP-1途径的一部分。
[0026]在一个实施例中，所述报告基因编码发光蛋白。
[0027]在一个实施例中，所述报告基因编码绿色荧光蛋白(GFP)或荧光素酶。
[0028]在一个实施例中，所述样品是源自患有疾病的个体的患者样品，特别是其中疾病是癌症。
[0029]在一个实施例中，提供了一种预测抗肿瘤CAR-T细胞治疗疗效的方法，包括提供来
自患有肿瘤的受试者的样品，以及根据实施例1至15中任一个所述的诊断性测定法，通过测量所述报告基因的表达来确定T细胞激活，其中所述报告基因的激活指示所述抗肿瘤CAR-T细胞治疗在应用于所述受试者时的疗效。
附图说明
[0030]图1示出诊断性Jurkat NFAT报告CAR-T细胞测定法的示意图。图1A示出诊断性Jurkat NFAT报告CAR-T细胞测定法的一个实施例。肿瘤相关抗原(TAA)可通过表达抗TAA抗原结合受体的Jurkat NFAT报告CAR-T细胞识别。这种识别导致的细胞激活可通过测量发光来检测。图1B示出诊断性Jurkat NFAT报告CAR-T细胞测定法的另一个实施例。在Fc(识别结构域)中被地高辛配基化的靶抗原结合的IgG可以通过表达抗地高辛配基CAR的Jurkat NFAT报告T细胞识别。这种识别导致的细胞激活可通过测量发光(cps)来检测。图1C示出诊断性Jurkat NFAT报告CAR-T细胞测定法的另一个实施例。含有P329G突变的TAA结合的IgG可以通过表达抗P329G CA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于确定样品中肿瘤细胞的存在的诊断性测定法，所述诊断性测定法包括以下步骤：a)使所述样品与表达报告T(CAR-T)细胞的嵌合抗原受体(CAR)接触，其中所述报告CAR-T细胞包含：i.能够与所述肿瘤细胞特异性结合的CAR，其中，所述CAR可操作地偶联至响应元件；ii.在所述响应元件控制下的报告基因；以及b)通过测量所述报告基因的表达来测定T细胞的激活以确定所述肿瘤细胞的存在。2.根据权利要求1所述的诊断性测定法，其特征在于，所述CAR包含能够与肿瘤靶抗原特异性结合的靶抗原结合部分。3.根据权利要求2所述的诊断性测定法，其特征在于，所述靶抗原结合部分是Fab片段。4.根据权利要求1至3中任一项所述的诊断性测定法，其特征在于，所述报告CAR-T细胞是Jurkat细胞。5.根据权利要求2至4中任一项所述的诊断性测定，其特征在于，所述肿瘤靶抗原是细胞表面抗原和/或受体。6.根据权利要求2或5中任一项所述的诊断性测定法，其特征在于，所述肿瘤靶抗原选自由CD20、CD38、CD138、CEA、EGFR、FolR1、HER2、LeY、MCSP、STEAP1、TYRP1和WT1或其片段组成的组。7.根据权利要求2至6中任一项所述的诊断性测定法，其特征在于，所述肿瘤靶抗原是与人类主要组织相容性复合体(MHC)的...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：