一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法技术

本申请涉及一种抗体；它的重链、轻链；相应的可变域以及相应的互补决定域；以及在BA

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法
[0001]本案是申请日为2020年11月06日、申请号为202011233020.5、专利技术名称为“一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法”的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法。

技术介绍

[0003]白介素17(IL-17)也称为CTLA-8或IL-17A，是促炎细胞因子，其刺激诸如成纤维细胞、角质细胞、上皮和内皮细胞、滑膜细胞等非免疫细胞分泌IL-6、IL-8、PGE2、MCP-1、CXCL-1和G-CSF等多种细胞因子，并且还具有诱导ICAM-1表面表达、T细胞增殖等生物学效应。IL-17A主要由一类激活的称之为Th17的CD4+T细胞产生并通过结合IL-17RA和IL-17RC的复合物而发挥作用(Toy等，2006，J.Immunol.177(11)；36-39)。抗人白介素17单克隆抗体为特异性结合人白细胞介素17A(IL-17A)的IgG1κ型人源化单克隆抗体；其亲本抗体由经人IL-17A免疫的新西兰兔B细胞筛选获得，亲本兔抗经人源化改造后得到抗人白介素17单克隆抗体。
[0004]本申请中待检测的抗人白介素17单克隆抗体是江苏荃信生物医药有限公司的QX002N，该抗人白介素17单克隆抗体在中国专利文献CN108640991 B中有所描述。具体来说，过高表达的IL-17A可引起诸多炎症疾病：如IL-17A作用于巨噬细胞，DC细胞，诱发IL-1，IL-6，TNF，CRP的高表达，导致炎症反应，参与银屑病和移植排斥的病理过程；IL-17A作用于内皮细胞，诱发IL-6，MMP，凝血因子的高表达，导致血管活化，参与再灌注损伤、血栓和动脉粥样硬化的病理过程；IL-17A作用于成纤维细胞，诱发IL-6，趋化因子，生长因子，MMP的高表达，导致基质破坏，参与多发性硬化症、克罗恩病的病理过程；IL-17A作用于成骨细胞和软骨细胞，诱导RANKL、MMP、破骨细胞生成、导致骨侵蚀、软骨损伤，参与风湿性关节炎、牙周病的病理过程(N Engl J Med.2009Aug 27；361(9):888-98.Nat Rev Drug Discov.2012Oct；11(10):763-76.Semin Arthritis Rheum.2013Oct；43(2):158-70.Trends Mol Med.2016Mar；22(3):230-41.)。IL-17A中和抗体可以抑制自身免疫性疾病患者体内高表达IL-17A，并降低重要炎症因子IL-6的产生(Chabaud M,Durand JM,Buchs N,et al.Arthritis Rheum.1999,42:963-70)。很多自身免疫疾病的动物模型实验证明，使用抗体中和IL-17A，可有效抑制炎症的病理发展(Lubberts E,Koenders MI,Oppers-Walgreen B,et al.Arthritis Rheum.,2004,50:650-659)。目前，IL-17A相关抗体药物已经被批准上市，分别是Secukinumab(IL-17A靶向抗体，SEC)用于治疗斑块银屑病、强直性脊柱炎及银屑病关节炎、Ixekizumab(IL-17A靶向抗体，IXE)，用于治疗斑块银屑病及银屑病关节炎。江苏荃信生物医药有限公司开发了商品代号为QX002N的抗IL-17单克隆抗体作为药物使用。
[0005]对于药物而言，药代动力学是应用动力学原理与数学处理方法，定量描述药物在体内的动态变化规律，研究通过各种途径进入人体的药物，其吸收、分布、代谢、排泄的过程。因此药代动力学的研究将有利于评价药物的安全性和有效性。生物样品常用的分析方法包括色谱法和免疫法。色谱法灵敏度较低，试验过程繁琐，回收率不稳定。免疫法是以特异性抗原-抗体反应为基础的分析方法，是当前临床和非临床生物样品检测方法中最为常用的一种，由于抗人白介素17单克隆抗体是蛋白大分子，适合使用酶联免疫分析方法进行测定，而且生物素化兔抗抗人白介素17单克隆抗体作为第二抗体与检测抗体的结合使用，减少血清中无关蛋白的干扰。
[0006]BA-ELISA是指是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合，这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。具有高灵敏度、高特异性和稳定性等优点。

技术实现思路

[0007]基于以上原因，亟待开发一种特异性强、灵敏度高的基于生物素-亲和素酶联免疫分析法的定量测定血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的方法。
[0008]1.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个互补决定区CDR区，它们的氨基酸序列为：
[0009]重链互补决定区HCDR1区：SEQ ID NO.1：SYGMR；
[0010]重链互补决定区HCDR2区：SEQ ID NO.2：VVSSNGNIYYANWAKG；
[0011]重链互补决定区HCDR3区：SEQ ID NO.3：DLRAGWSVGPFNL；
[0012]轻链互补决定区LCDR1区：SEQ ID NO.4：QASQSIASALA；
[0013]轻链互补决定区LCDR2区：SEQ ID NO.5：DASDLAS；
[0014]轻链互补决定区LCDR3区：SEQ ID NO.6：QSYYHSGSSFYGYNG。
[0015]2.根据项1所述的单克隆抗体，所述抗体包括重链和轻链，其中，所述重链和轻链分别包括一个可变域CVR区，它们的氨基酸序列为：
[0016]重链可变域HCVR区：SEQ ID NO.7：
[0017]QSVKESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSYGMRWVRQAPGKGLEWIGVVSSNGNIYYANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSLTTEDTATYFCARDLRAGWSVGPFNLWGPGTLVTVSS；
[0018]轻链可变域LCVR区：SEQ ID NO.8：
[0019]DIVMTQTPSPVSAAVGGTVTIKCQASQSIASALAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDLECADVATYYCQSYYHSGSSFYGYNGFGGGTEVVVK。
[0020]3.根据项2所述的单克隆抗体，所述抗体包括重链和轻链，它们的氨基酸序列为：
[0021]重链：SEQ ID NO.9：
[0022]QSVKESGGR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个互补决定区CDR区，它们的氨基酸序列为：重链互补决定区HCDR1区：SEQ ID NO.1：SYGMR；重链互补决定区HCDR2区：SEQ ID NO.2：VVSSNGNIYYANWAKG；重链互补决定区HCDR3区：SEQ ID NO.3：DLRAGWSVGPFNL；轻链互补决定区LCDR1区：SEQ ID NO.4：QASQSIASALA；轻链互补决定区LCDR2区：SEQ ID NO.5：DASDLAS；轻链互补决定区LCDR3区：SEQ ID NO.6：QSYYHSGSSFYGYNG。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，所述抗体包括重链和轻链，其中，所述重链和轻链分别包括一个可变域CVR区，它们的氨基酸序列为：重链可变域HCVR区：SEQ ID NO.7：QSVKESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSYGMRWVRQAPGKGLEWIGVVSSNGNIYYANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSLTTEDTATYFCARDLRAGWSVGPFNLWGPGTLVTVSS；轻链可变域LCVR区：SEQ ID NO.8：DIVMTQTPSPVSAAVGGTVTIKCQASQSIASALAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDLECADVATYYCQSYYHSGSSFYGYNGFGGGTEVVVK。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，所述抗体包括重链和轻链，它们的氨基酸序列为：重链：SEQ ID NO.9：QSVKESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSYGMRWVRQAPGKGLEWIGVVSSNGNIYYANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSLTTEDTATYFCARDLRAGWSVGPFNLWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPST...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，孙秋萍，孔永，陈卫，朱云，钱伟伦，徐蕾，
申请(专利权)人：江苏荃信生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：