单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法技术

本发明专利技术提供了一种单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法，涉及单细胞分离技术领域。所述单细胞分离器包括移液针头和吸液装置，所述移液针头与吸液装置紧密且无泄漏连通，所述移液针头包括距离针口0.5～1cm处呈75～90

【技术实现步骤摘要】
单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法


[0001]本专利技术涉及单细胞分离
，尤其是涉及一种单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法。

技术介绍

[0002]群体细胞中，由于细胞与细胞之间存在异质性，即使不同代次的同一细胞系或相同代次的不同细胞株之间的细胞对于病毒的敏感性、病毒粒子包装的完整性或病毒制备的有效性均会出现差异性。因此，单细胞分离对克服细胞异质性有着十分重要的意义。另外，对于细胞转染、感染等试验来说，选取单个细胞对于建立特定基因或表达特定蛋白的克隆来说更是十分必要的。因为只有单一基因的细胞群才能最大限度的保持种群稳定性。为了将高产优质的细胞从细胞群体中筛选出来，通常会进行细胞的单克隆筛选，将高产优质的单个细胞从细胞群体中筛选出来，进行扩繁，建立细胞库，从事生物制品生产使用。
[0003]目前，主要通过有限稀释法或流式细胞仪等方法从群体细胞中实现单细胞的分离。有限稀释法是最为常用的单细胞克隆方法，其操作步骤是将细胞悬液计数后进行梯度稀释接种至96孔板。实际操作中，该方法效率不高，一般单细胞收获效率在20％左右，大量存在空白孔和多细胞孔，需要进行2-3次克隆才能确保细胞的单克隆性。因此，有限稀释法工作量大、消耗时间长。而流式细胞仪虽可自动进行单细胞筛选，但仪器设备价格昂贵，难以普及，且在筛选细胞过程中加入一些化学物质，对分离后的细胞生长可能会造成一些化学性影响。
[0004]因此，研究开发出一种简单、高效的单细胞分离器，提高单细胞分离的成功率和分离效率，以缓解现有单细胞分离方法存在的问题，变得十分必要和迫切。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种单细胞分离器，所述单细胞分离器可以快速的从细胞液中对单细胞进行分离提取，有效缓解了现有单细胞分离方法中有限稀释法操作复杂以及流式细胞仪方法对设备要求高的问题。
[0007]本专利技术的第二目的在于提供一种上述单细胞分离器在分离单细胞过程中的应用。
[0008]本专利技术的第三目的在于提供一种单克隆细胞制备方法。
[0009]本专利技术提供的一种单细胞分离器，所述单细胞分离器包括移液针头和吸液装置。
[0010]所述移液针头与吸液装置紧密且无泄漏连通，所述移液针头包括距离针口0.5～1cm处呈75～90
°
弯曲的静脉注射针头。
[0011]进一步的，所述吸液装置包括10ul、20ul、30ul、100ul或200ul中的一种，优选为20ul的移液器。优选地，所述吸液装置为20ul的移液器。
[0012]进一步的，所述移液针头包括距离针口0.8～1cm处呈85～90
°
弯曲的静脉注射针
头。
[0013]更进一步的，所述移液针头为距离针口0.8cm处呈90
°
弯曲的静脉注射针头。
[0014]进一步的，所述移液针头的针口为平口。
[0015]本专利技术提供的一种上述单细胞分离器在分离单细胞过程中的应用。
[0016]进一步的，所述单细胞包括贴壁细胞和/或悬浮细胞。
[0017]本专利技术提供的一种单克隆细胞制备方法，所述方法包括以下步骤：
[0018]提供含悬浮细胞的细胞液，随后在显微镜下，利用上述单细胞分离器对细胞液中的单细胞进行吸取，随后对单细胞进行培养，得到单克隆细胞；
[0019]或，提供含贴壁细胞的细胞液，随后在显微镜下，利用上述单细胞分离器对细胞液中的单细胞进行吸取，随后对单细胞进行培养，得到单克隆细胞。
[0020]进一步的，所述含悬浮细胞或贴壁细胞的细胞液中的细胞密度为200～250
×
104cells/ml。
[0021]进一步的，所述培养包括在35～40℃下培养2～4h，优选为在37℃下培养3h；
[0022]优选地，所述培养的气体环境，按体积百分比计，二氧化碳占5％，空气占95％。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0024]本专利技术提供的一种单细胞分离器，所述单细胞分离器包括移液针头和吸液装置，所述移液针头与吸液装置紧密且无泄漏连通，所述移液针头包括距离针口0.5～1cm处呈75～90
°
弯曲的静脉注射针头。使用本专利技术提供的单细胞分离器可以快速的从细胞液中对单细胞进行分离提取，该分离单细胞装置具有取材容易、制作简单、操作直观可靠、分离成功率高、易于推广普及的特点不仅仅适合于贴壁细胞，也适用于悬浮细胞，进而有效缓解了现有单细胞分离方法中有限稀释法操作繁复以及对流式细胞仪方法对设备要求高的问题。
[0025]本申请提供的上述单细胞分离器可以广泛应用于单细胞分离的过程中。
[0026]本专利技术提供的单克隆细胞制备方法，该方法首先提供含贴壁细胞或悬浮细胞的细胞液，随后在显微镜下，利用上述单细胞分离器对细胞液中的单细胞进行吸取，随后对单细胞进行培养，得到单克隆细胞。上述方法通过单细胞分离器和显微镜的结合，从而实现了单细胞的可视化分离，具有目标明确、分离效率高的优势，有效提高了单克隆细胞的制备效率；同时，也有效避免了现有单细胞分离过程中细胞计数及反复稀释等繁杂操作，具有节约实验时间的优势。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1为本专利技术实施例1提供的单细胞分离器的结构示意图。
[0029]图标：1-吸液装置；2-移液针头。
具体实施方式
[0030]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实
施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0031]根据本专利技术的一个方面，一种单细胞分离器，所述单细胞分离器包括移液针头2和吸液装置1。
[0032]所述移液针头2与吸液装置1紧密且无泄漏连通，所述移液针头2包括距离针口0.5～1cm处呈75～90
°
弯曲的静脉注射针头。
[0033]本专利技术提供的一种单细胞分离器，所述单细胞分离器包括移液针头2和吸液装置1，所述移液针头2与吸液装置1紧密且无泄漏连通，所述移液针头2包括距离针口0.5～1cm处呈75～90
°
弯曲的静脉注射针头。使用本专利技术提供的单细胞分离器可以快速的从细胞液中对单细胞进行分离提取，该分离单细胞装置具有取材容易、制作简单、操作直观可靠、分离成功率高、易于推广普及的特点不仅仅适合于贴壁细胞，也适用于悬浮细胞，进而有效缓解了现有单细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单细胞分离器，其特征在于，所述单细胞分离器包括移液针头和吸液装置，所述移液针头与吸液装置紧密且无泄漏连通，所述移液针头包括距离针口0.5～1cm处呈75～90
°
弯曲的静脉注射针头。2.根据权利要求1所述的单细胞分离器，其特征在于，所述吸液装置包括10ul、20ul、30ul、100ul或200ul中的一种，优选为20ul的移液器。3.根据权利要求1所述的单细胞分离器，其特征在于，所述移液针头包括距离针口0.8～1cm处呈85～90
°
弯曲的静脉注射针头。4.根据权利要求3所述的单细胞分离器，其特征在于，所述移液针头为距离针口0.8cm处呈90
°
弯曲的静脉注射针头。5.根据权利要求1～4任一项所述的单细胞分离器，其特征在于，所述移液针头的针口为平口。6.一种根据权利要求1～5任一项所述的单细胞分离器在分离单细胞过程中的应用。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，张迪，赵毅，张丹，刘宏，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：