特异性结合化学发光测定法制造技术

本发明专利技术公开了测定样品中的分析物的方法，以及用于进行该测定的试剂盒。以及用于进行该测定的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合化学发光测定法

技术介绍

[0001]溶液相发光测定法是已知的，例如在WO2010099486中。已知的测定法基于特异性结合配偶体的特异性识别和结合在一起来检测物质的存在或量。例如，在免疫测定法中，抗体与特定的结合配偶体结合。又如，在核酸结合测定中，核酸链(例如适体)与特异性结合配偶体结合。一些测定法使用化学发光来产生信号并将该信号与分析物的量相关联。

技术实现思路

[0002]测定样品中的分析物的方法可包括形成反应混合物以及将触发溶液与反应混合物混合。待测定的分析物能够存在于样品中，使得该测定可根据该测定的检测限来确定分析物的存在与否。
[0003]该测定中所用的反应混合物通常为水性溶液，该水性溶液包含
[0004]化学发光标记的特异性结合配偶体，其中该化学发光标记的特异性结合配偶体包含不可逆地结合到第一特异性结合配偶体的化学发光标记，并且其中该化学发光标记的特异性结合配偶体能够结合到该分析物以形成分析物结合的化学发光标记的特异性结合络合物。该反应混合物通常还包含活化剂标记的特异性结合配偶体，其中该活化剂标记的特异性结合配偶体包含不可逆地结合到第二特异性结合配偶体的活化剂标记。该反应混合物通常还包含选择性信号抑制剂。
[0005]该方法还包括测量分析物信号，以及在测量分析物信号之后测量辉光信号。
具体实施方式
[0006]在整个本公开中，为方便起见，常常使用单数形式例如“一种”、“一个”和“该/所述”；然而，除非上下文明确规定或清楚指示仅为单数，否则单数形式意指包括复数。当单独称为单数时，通常使用术语“仅仅一个”。
[0007]例如“共同的”、“常常”、“典型的”、“典型地”、“常见的”和“通常地”的术语用于指制造或实践本文所述专利技术的共同、典型或常见的方式的特征。这些术语不应理解为意指此类特征存在于现有技术中，远少于它们在现有技术中共同、典型或常见的特征。
[0008]本公开中的一些术语定义如下。其他术语对于本领域的技术人员将是熟悉的，并且应当被赋予本领域的普通技术人员将赋予它们的含义。
[0009]分析物：待在测定中检测或定量的物质。在测定中通常使用对分析物(特别是一个或多个特异性结合配偶体)具有特异性结合亲和力的一种或多种物质以有利于检测分析物。分析物可以是特异性结合配偶体可结合的蛋白质、肽、核苷酸、核苷、抗体、半抗原、小分子(即，非聚合分子)等。示例性分析物不仅包括药物，例如类固醇、激素、蛋白质、糖蛋白、粘蛋白、核蛋白、磷蛋白、阿片类、维生素、抗菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、嘌呤、抗肿瘤剂、苯丙胺、氮杂卓类、前列腺素以及药物代谢物，而且还包括核苷、有机核苷、核苷酸、有机核苷酸、核糖核苷、DNA、DNA片段、RNA、RNA片段、PDNA、PDNA片段、适体、毒素，例如血毒素、光毒素、神经毒素、氰基毒素、二诺毒素、坏死毒素、肌毒素、霉菌毒素例如T-2霉菌毒素、黄曲霉毒素、
肉毒杆菌毒素、蓖麻毒素、蜂毒素以及其他环境毒素或生物毒素。分析物也可以是细胞、病毒、细菌或真菌。
[0010]活化剂：实现化学发光化合物的活化使得在存在触发物的情况下化学发光化合物发光的化合物。
[0011]活化剂标记的特异性结合配偶体：包括分析物的特异性结合成员和直接或间接(例如，通过连接基)结合到特异性结合配偶体的活化剂的反应物。
[0012]化学发光化合物：例如通过转化成以电子激发态形成的另一种化合物或通过转化成电子激发态然后弛豫到基态而发生引起光发射的反应的化合物。激发态可以是单重或三重激发态。激发态可在弛豫到基态时直接发射光，或者可首先例如通过Forester或Dexter机制将能量转移到能量受体，该能量受体继而发射光。
[0013]化学发光标记的特异性结合配偶体：包括分析物的特异性结合成员和直接或间接(例如，通过连接基)结合到特异性结合配偶体的化学发光化合物的反应物。
[0014]分析物信号：与样品中存在的分析物的量相关的信号，例如来自测定的化学发光输出。当分析物信号为化学发光输出时，可将其测量为指定波长处的发光强度或测量为一段时间内的发光积分。
[0015]辉光信号：在所有选择性信号降低剂已被消耗使得选择性信号降低剂不再降低测定中的信号之后出现的信号，例如化学发光输出。
[0016]背景信号：不与样品中存在的分析物的量相关的信号，例如化学发光输出。
[0017]不可逆键：使两个部分(通常为特异性结合配偶体和化学发光标记或特异性结合配偶体和活化剂标记)相关联的键，其在执行本文所述的测定时不会断裂。不可逆键可通过一些其他方式断裂，例如使用化合物或在物理条件例如温度下断裂，使得键在本文所述的测定期间不暴露。可为不可逆键的典型键包括共价键、离子键等。通过不可逆键连接的两个部分被称为“不可逆结合”。不可逆键区别于可逆结合相互作用，例如特异性结合配偶体或分析物与特异性结合配偶体的可逆结合。
[0018]基于现有技术化学发光的测定法结合测定法，例如US20100267071中所述的免疫测定法，以及其他测定法，例如基于适体结合等的那些测定法，将具有未知分析物浓度的测试样品的化学发光信号与通过使用具有已知分析物浓度的多个样品生成的标准曲线进行比较。
[0019]在特异性化学发光测定法中，如例如US20100267071中所述，将包含未知分析物浓度的测试样品与包含化学发光标记的特异性结合配偶体、活化剂标记的特异性结合配偶体和选择性信号抑制剂的测定溶液混合以形成反应混合物。然后将触发溶液与反应混合物混合。触发溶液包含氧化剂或还原剂，通常包含过氧化物，并且在许多情况下包含增强剂。
[0020]该测定法以两种形式中的一种进行。在“竞争性测定”形式中，活化剂标记的特异性结合配偶体与化学发光标记的特异性结合配偶体在可预先形成或可原位形成的络合物中结合。当存在分析物时，分析物和化学发光标记的特异性结合配偶体竞争以结合化学发光标记的特异性结合配偶体。在存在触发溶液的情况下，化学发光标记的特异性结合配偶体上的结合到活化剂标记的特异性结合配偶体上的化学发光标记与引起发光的活化剂标记的特异性结合配偶体可操作地接近，并且因此被其活化。结合到分析物的化学发光标记的特异性结合配偶体不与活性标记的特异性结合配偶体可操作地接近，因此其化学发光标
记不被活化并且不发光。在该形式中，分析物信号为发光强度，并且其与分析物浓度负相关。
[0021]一种替代形式为“夹心测定”形式，由此通常在分析物的不同部分上，活化剂标记的特异性结合配偶体和化学发光标记的特异性结合配偶体均与分析物结合，以使化学发光标记与活化剂标记的结合配偶体可操作地接近。所得的“夹心”络合物中的化学发光标记的特异性结合配偶体的化学发光标记与活化剂标记的特异性结合配偶体可操作地接近，因此发光。在不存在分析物的情况下，活化剂标记的结合配偶体不与活化剂标记的特异性结合配偶体可操作地接近，因此不发光。在该形式中，分析物信号为发光强度，并且其与分析物浓度正相关。
[0022]在任一种情况本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种测定样品中的分析物的方法，所述方法包括形成反应混合物，以及将触发溶液与所述反应混合物混合；其中待测定的所述分析物能够存在于所述样品中，所述反应混合物为水性溶液，所述水性溶液包含化学发光标记的特异性结合配偶体，所述化学发光标记的特异性结合配偶体包含不可逆地结合到第一特异性结合配偶体的化学发光标记，所述化学发光标记的特异性结合配偶体能够结合到所述分析物以形成分析物结合的化学发光标记的特异性结合络合物，活化剂标记的特异性结合配偶体，所述活化剂标记的特异性结合配偶体包含不可逆地结合到第二特异性结合配偶体的活化剂标记，以及选择性信号抑制剂；并且其中所述方法还包括测量分析物信号，以及在测量所述分析物信号之后测量辉光信号。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述触发溶液还包含增强剂。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述增强剂选自酚化合物、芳香胺、苯并唑、羟基苯并噻唑、芳基硼酸以及任何前述物质的混合物。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述触发溶液还包含氧化剂或还原剂。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述触发溶液还包含过氧化物。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述选择性信号抑制剂选自抗坏血酸、异抗坏血酸、6-羟基-2,5,7,8-四甲基色满-2-羧酸、抗坏血酸6-棕榈酸酯、5,6-异亚丙基-抗坏血酸、丁基化羟基甲苯、谷胱甘肽、尿酸、一种或多种生育酚和儿茶素。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述活化剂标记为过氧化物酶。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化学发光标记的特异性结合配偶体包含直接或间接连接到特异性结合配偶体的化学发光标记，其中所述化学发光标记具有下式其中波浪线指定与所述特异性结合配偶体的连接位点或与连接所述化合物和所述特异性结合配偶体的连接基团的连接位点；R1和R2独立地选自取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基、取代的芳烷基和未取代的芳烷基，其中当R1或R2被取代时，是被1-3个取代基取代，每个取代基独立地选自羰基、羧基、三烷基甲硅烷基、-SO3、糖基、-PO3、卤素、羟基、巯基、氨基、C(O)NHNH2、季铵和季
R3选自取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基、取代的芳烷基和未取代的芳烷基，其中当...

【专利技术属性】
技术研发人员：格雷戈里，
申请(专利权)人：三M创新有限公司，
类型：发明
国别省市：