IgA2检测试剂在制备KRAS突变型结直肠癌诊断剂方面的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及免疫球蛋白亚型中的IgA2的检测试剂在制备KRAS突变型结肠直肠癌诊断或预后试剂/试剂盒中的应用。本发明专利技术研究发现，免疫球蛋白亚型中的IgA2在KRAS突变型结肠直肠癌中低表达，且具有很大的差异性和可信度。将IgA2作为结直肠癌诊断生物标记物，具有特异性强，灵敏度高的优势，有利于提高结肠直肠癌的诊疗水平，有效防治结直肠癌。有效防治结直肠癌。有效防治结直肠癌。

【技术实现步骤摘要】
IgA2检测试剂在制备KRAS突变型结直肠癌诊断剂方面的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及IgA2的检测试剂在制备KRAS突变诊断试剂/试剂盒中的应用和一种结肠直肠癌诊断的试剂/试剂盒。
[0002]专利技术背景
[0003]结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的消化道恶性肿瘤，是世界第二大癌症，其高发病率和致死率分别位于第三位和第四位。近年来随着我国人民生活水平的提高、生活方式的改变以及人口老龄化，结直肠癌在我国的发病率呈现逐渐上升的趋势，居我国恶性肿瘤发病率第三位和死亡率第五位，严重威胁着人们的健康和生命。早发现、早诊断、早治疗是治疗结直肠癌的关键。但是结直肠癌初期多数没有明显症状，随病情进展多以“肠炎”就诊，使得大部分结直肠癌患者确诊时已处于肿瘤进展期，失去了最佳的治疗时机，导致其五年生存率不到20％，预后较差。因此，探索结直肠癌早期、快速、大规模的诊断方法，提高诊疗水平，是目前防治结直肠癌亟待解决的问题。
[0004]KRAS属于RAS基因家族成员，编码的P21蛋白位于细胞膜内侧，属于三磷酸(GTP)鸟苷结合蛋白，是细胞内信号传导通路中重要的“开关”。正常情况下，对细胞增殖、生存和分化方面有至关重要的正向作用；但当KRAS发生突变时，其不能被水解酶水解失活，处于持续激活状态，致使RAF/MAPK的上调，从而使细胞过度生长、增殖，导致多种恶性肿瘤的产生。研究显示，大约有30％-45％的结直肠癌患者携带原癌基因KRAS的突变。
[0005]美国国家癌症综合治疗联盟(NCCN)《结直肠癌临床实践指南》(V1.2015)明确指出：(1)所有转移性结直肠癌患者都应检测KRAS基因状态；(2)只有KRAS野生型患者才建议接受EGFR抑制剂(如爱必妥和帕尼单抗)治疗。卫生部颁布的《结直肠癌诊疗规范(2010年版)》也明确指出：确定为复发或转移性结直肠癌时，检测肿瘤组织KRAS基因状态，以确定合适的治疗方案。由此可知，监测结直肠癌患者KRAS突变水平具有重要的临床意义。目前临床上广泛使用结直肠癌患者活检组织通过测序来确定KRAS基因是否突变，虽然这种方法比较准确，但受限于检测方法，无法通过这种方式进行大规模筛查。这些检测都需要针对肿瘤活检组织进行测序，并且是针对肿瘤原位进行的测序。活体检测创伤易引起肿瘤转移，且存在无法动态多次检测的问题。血清肿瘤标志物检测因其取样快速、方便、安全，已成为用于肿瘤早期诊断、鉴别及分期指导、肿瘤复发转移判断的常用手段。
[0006]人的血清中含有大量的免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)，免疫球蛋白是一种主要由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等病原体的大型Y形蛋白质，具有多种免疫球蛋白亚型；更重要的是，免疫球蛋白的不同亚型在机体遭受感染时会出现波动变化；且与其他蛋白分子相比，免疫球蛋白具有更稳定的性质及更长的半衰期，这些特点使得血浆中不同免疫球蛋白亚型表达水平在感染及肿瘤等疾病诊断应用上具有广阔的前景。
[0007]IgA是高度糖基化的蛋白质，主要由IgA1和IgA2两种形式存在。超过80％的血清IgA属于IgA1，外分泌液中IgA1占总IgA的50％-74％；IgA2在分泌性肠相关淋巴组织(gut-associated lymphoid tissue,GALT)的产生量大于非分泌淋巴样器官(脾和外周淋巴结)
产生的量，并可耐受部分相应蛋白酶的分解作用。IgA通过物理保护和免疫反应两种方式发挥保护黏膜作用。其主要作用是通过减少肠道黏膜与病原体的直接接触。IgA参与肠道生物屏障的构成，其与病原体结合后通过促进肠道蠕动、绒毛运动、肠道疏松黏液层流动等物理方式抵抗病原体的侵袭；或通过化学中和作用与肠道内的酶、肠毒素等相互中和，在空间时间上双重阻碍病原体与黏膜接触；另外，IgA激活巨噬细胞通过APC介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)机制杀灭肠道病原体。IgA是一种多效能的抗体，其含量相对稳定。当其量发生明显的变化时，提示可能与肠道的某些疾病的发生相关。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种特异性强、灵敏度高的KRAS突变的分子标志物，以及该分子标志物的诊断试剂及其应用。
[0009]本专利技术的目的还在于提供一种特异性强、灵敏度高的结直肠癌的分子标志物，以及该分子标志物的诊断试剂及其应用。
[0010]本专利技术的目的还在于提供一种特异性强、灵敏度高的KRAS突变型结直肠癌的分子标志物，以及该分子标志物的诊断试剂及其应用。
[0011]本专利技术的上述目的通过以下技术手段实现：
[0012]一方面，本专利技术提供了IgA2的检测试剂在制备KRAS突变诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0013]另一方面，本专利技术提供了IgA2的检测试剂在制备KRAS突变型结肠直肠癌诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0014]本专利技术专利技术人收集了健康人血液(优选采用血浆样本)和结直肠癌患者(KRAS野生型及突变型)的血浆样本进行检测，通过数据处理分析，得到标准化的不同血浆促/抑炎因子丰度，非显而易见地发现，免疫球蛋白亚型IgA2差异表达，可以作为KRAS突变型结直肠癌诊断生物标记物。专利技术人非显而易见地发现，IgA2显示出从健康组及结直肠癌组中更好地区分KRAS突变型结直肠癌的能力。
[0015]上述IgA2的检测试剂为检测IgA2的mRNA的表达量；或者检测IgA2蛋白的表达量，或者检测IgA2蛋白的生物活性的试剂中的一种或几种。作为本专利技术中一种优选的实施方式，所述的IgA2的检测试剂为检测IgA2蛋白的表达量。
[0016]作为优选的实施方式IgA2的表达量即表示IgA2在检测样品中的浓度；作为更优选的实施方式，表示IgA2在血浆中的浓度。
[0017]作为优选的实施方式，所述的检测试剂选自检测IgA2的抗体、抗体功能性片段或者偶联抗体中的一种或多种。
[0018]作为优选的实施方式，所述的偶联抗体选自荧光素偶联抗体或生物酶偶联抗体中的一种或两种。
[0019]其中，所述的抗体可能是单克隆抗体，多克隆抗体，多价抗体，多特异性抗体(例如：双特异性抗体)，和/或连接在蛋白酶体上的抗体片段。该抗体可以是嵌合抗体、人源化抗体、CDR移植抗体或人型抗体。抗体片段可以是，例如，Fab，Fab
’
，F(ab
’
)2，Fv，Fd，单链Fv(scFv)，具二硫键的Fv(sdFv)，或VL、VH结构域。抗体可能是一个共轭的形式，例如，结合一
个标签、一个可检测标记，或一种细胞毒性剂。
[0020]作为优选的实施方式，所述试剂盒为ELISA试剂盒，进一步地，是基于抗人IgA2偶联抗体的ELISA试剂盒，该检测试剂盒用于检测IgA2蛋白的表达量。
[0021]作为优选的实施方式，所述的检测试剂的检测方法为ELISA法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.IgA2的检测试剂在制备KRAS突变诊断试剂或试剂盒中的应用；优选地，在制备KRAS突变型结肠直肠癌诊断试剂或试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述IgA2的检测试剂选自检测IgA2的mRNA的表达量，或者检测IgA2蛋白的表达量，或者检测IgA2蛋白的生物活性的试剂中的一种或多种；优选地，所述IgA2的检测试剂选自检测IgA2蛋白表达量的试剂。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂选自检测IgA2的抗体、抗体功能性片段或者偶联抗体中的一种或多种；优选地，所述的偶联抗体选自荧光素偶联抗体或生物酶偶联抗体中的一种或两种。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒为ELISA试剂盒。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂的检测方法选自ELISA法、蛋白芯片法、液相色谱法、免疫比浊法、流式细胞法中的任意一种或几种；优选地，为蛋白芯片法、ELISA法或免疫比浊法中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂判断KRAS突变型结直肠癌高风险或低风险的IgA2蛋白表达量临界值的取值范围为1994.05pg/ml至3409.95pg/ml；优选地，所述IgA2蛋白表达量临界值取值为2194.25pg/ml；当IgA2蛋白的表达量≤2194.25pg/ml，则KRAS突变型结直肠癌高风险；所述的检测试剂的检测结果为：IgA2蛋白的表达量>2194.25pg/ml，则KRAS突变型结直肠癌低风险。7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂的检测样品为血液；优选为血浆。8.一种KRAS突变型结肠直肠癌诊断的试剂或试剂盒，所述的试剂或试剂盒含有IgA2的检测试剂；优选地，所述IgA2的检测试剂选自检测IgA2的mRNA的表达量，或者检测IgA2蛋白的表达量，或者检测IgA2蛋白的生物活性的试剂中的一种或多种；优选地，选自检测IgA2蛋白表达量的试剂；优选地，所述的试剂或试剂盒含有检测IgA2的抗体、抗体功能性片段或者偶联抗体；更优选地，所述的偶联抗体选自荧光素偶联抗体或生物酶偶联抗体中的一种或多种；优选地，所述的试剂盒为ELISA试剂盒；优选地，所述的检测试剂的检测方法选自ELISA法、蛋白芯片法、液相色谱法、免疫比浊法、流式细胞法中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘瑞贤，杨湘玲，陈骏雄，温创宇，韦丽丽，谭会柳，李伟倩，徐重，刘焕亮，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：