一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物和铁蛋白快速检测试纸条制造技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种铑纳米粒子

【技术实现步骤摘要】
一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物和铁蛋白快速检测试纸条


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物和铁蛋白快速检测试纸条。

技术介绍

[0002]铁蛋白是一种在体内普遍存在的金属蛋白，具有纳米级的水合氧化铁核和具有笼状结构的蛋白质壳。铁蛋白广泛存在于肝脏和脾脏组织中。肝脏中过多的铁沉积会导致肝细胞受损。通常，血清铁蛋白水平维持在相对稳定的范围内，而WHO规定男性和女性的铁蛋白正常浓度分别为30-300ng/mL和15-200ng/mL。血清铁蛋白的异常升高可能反映了多种疾病，例如肝炎，肝硬化，肝癌，肺癌，白血病等。此外，血清铁蛋白的降低可导致贫血和营养不良。因此检测血清中的铁蛋白对临床有一定指导价值。在过去的几十年中，已经建立了一些测定铁蛋白的方法，例如电化学免疫传感器，放射免疫分析和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)等。尽管这些方法是相对灵敏和有着优良的选择性，但这些仪器昂贵，操作复杂，需要特定的专业知识和训练有素的操作员。
[0003]利用免疫层析方法可以有效的提高血清铁蛋白的含量检测效率与准确性。目前，用于免疫层析试纸条标记的材料主要为胶体金纳米粒子，胶体金本身为红色，其标记物相对稳定，因而被广泛地应用于免疫层析试纸条中。但是在实际应用中可以发现，胶体金在高盐环境下容易聚沉变色，产生“死金”现象等等，影响检测效果。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物和铁蛋白快速检测试纸条，解决了现有的免疫层析试纸条中胶体金在高盐环境下容易聚沉变色，影响检测效果的问题。
[0005]其具体技术方案如下：
[0006]本专利技术提供了一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物，包括：铑纳米粒子和与所述铑纳米粒子偶联的铁蛋白多克隆抗体。
[0007]铑纳米粒子在高盐环境下稳定，耐高温，耐pH，可以有效提高免疫层析方法的使用效率，本专利技术使用的铑纳米粒子具有类辣根过氧化物酶活性，可通过催化反应提高显色信号，从而实现检测信号的放大。
[0008]本专利技术中，兔抗人铁蛋白多克隆抗体采用人源铁蛋白免疫动物，取血、离心得到。
[0009]本专利技术中，铁蛋白多克隆抗体为兔抗人铁蛋白多克隆抗体。
[0010]本专利技术中，所述铑纳米粒子与所述铁蛋白多克隆抗体的质量比为800：(5-25)，优选为800:10。
[0011]本专利技术还提供了一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物的制备方法，包括以下步骤：
[0012]步骤1：将RhCl3水溶液、十六烷基三甲基氯化铵和抗坏血酸混合，进行反应，得到铑纳米粒子；
[0013]步骤2：将所述铑纳米粒子的水溶液、碱溶液、铁蛋白多克隆抗体混合，进行反应，然后加入封闭液进行封闭，得到铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物。
[0014]本专利技术步骤1中，RhCl3、十六烷基三甲基氯化铵和抗坏血酸的用量比为(3-20)mg：(50-200)mg：(50-200)mL，优选为10mg：10mg：1mL；
[0015]所述RhCl3水溶液的浓度为0.3～5mg/mL，优选为2mg/mL。
[0016]本专利技术步骤2中，所述碱溶液优选为碳酸钾溶液，所述封闭液优选为牛血清蛋白；
[0017]所述碱溶液的浓度为0.2M，所述铁蛋白多克隆抗体的浓度为1mg/mL，所述封闭液的浓度为0.1mg/mL，铑纳米粒子的水溶液的浓度为1.5～1.6mg/mL；
[0018]所述铑纳米粒子的水溶液、碱溶液、铁蛋白多克隆抗体和所述封闭液的体积比为(1000-4000)：(0-8)：(1-10)：100。
[0019]本专利技术还提供了上述铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物或上述制备方法制得的铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物在铁蛋白检测中的应用。
[0020]本专利技术还提供了一种铁蛋白快速检测试纸条，包括：底板；
[0021]所述底板上依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
[0022]所述结合垫上包被有上述铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物或上述制备方法制得的铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物，所述硝酸纤维素膜上依次划有铁蛋白单克隆抗体的检测线和羊抗兔IgG抗体的质控线。
[0023]本专利技术中，所述铁蛋白单克隆抗体为鼠抗人铁蛋白单克隆抗体。
[0024]本专利技术中，所述铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物的浓度为5-30mg/mL，优选为20mg/mL，喷涂量为7.5-10.0μL/cm，优选为7.5μL/cm或8.5μL/cm；
[0025]所述铁蛋白单克隆抗体的浓度为0.1-1.0mg/mL，优选为0.2mg/mL，喷涂量为1μL/cm；
[0026]所述羊抗兔IgG抗体的浓度为0.1-1.0mg/mL，优选为1.0mg/mL，喷涂量为1μL/cm。
[0027]本专利技术中，所述质控线与检测线的间距为5mm。
[0028]本专利技术中，试纸条还包括：3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液(TMB)和过氧化氢溶液混合液。该混合液在待测血清测试完成后，优选滴加待测血清至样品垫15min后，向检测线滴加混合液，铑纳米粒子可以将TMB催化成氧化型TMB，显蓝色，与铑纳米粒子的颜色重叠，提高显色信号，作为铁蛋白检测的放大信号。
[0029]本专利技术中，混合液的用量为2μL，其中，TMB溶液的浓度为0.1M，过氧化氢溶液的浓度为0.1M，TMB与过氧化氢的摩尔比为1：1。
[0030]本专利技术还提供了一种血清中铁蛋白快速检测方法，包括以下步骤：
[0031]向上述铁蛋白快速检测试纸条中的样品垫上滴入待测血清，若检测线和质控线均显色，则待测血清中含铁蛋白，若检测线不显色，质控线显色，则待测血清中不含铁蛋白。
[0032]本专利技术中，所述待测血清的用量为80～150μL，优选为100μL
[0033]本专利技术中，铁蛋白快速检测试纸条的原理为：
[0034]当待测血清滴入试纸条样品垫后，样品溶液因硝酸纤维素膜载体的毛细管作用向另一端扩散。在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过铑纳米粒子的颜色显示
出来。如果待测样品溶液中含有铁蛋白，铁蛋白先和结合垫是铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体反应。当铑纳米粒子随样品溶液扩散至检测线时，铁蛋白单克隆抗体与铁蛋白再次特异性结合，显示检测印迹，而羊抗兔IgG抗体则可与再与抗体结合，质控线显色，优选地，再在检测线上滴加TMB和过氧化氢的混合液，作为检测线上铁蛋白的放大信号；相反待测血清中无铁蛋白时，铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体和铁蛋白单克隆抗体未发生抗原抗体反应，检测线不显色，质控区羊抗兔IgG抗体则可与与抗体结合，仅质控线显色；如果纤维素膜上的质控线和检测线上均不显色，则该试纸条无效。
[0035]本专利技术采用双抗夹心型免疫分析法，该方法特异性高，灵敏度好。
[0036]从以上技术方案可以看出，本专利技术具有以下优点：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物，其特征在于，包括：铑纳米粒子和与所述铑纳米粒子偶联的铁蛋白多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物，其特征在于，所述铑纳米粒子与所述铁蛋白多克隆抗体的质量比为800：(5-25)。3.一种铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将RhCl3水溶液、十六烷基三甲基氯化铵和抗坏血酸混合，进行反应，得到铑纳米粒子；步骤2：将所述铑纳米粒子的水溶液、碱溶液、抗铁蛋白多克隆抗体混合，进行反应，然后加入封闭液进行封闭，得到铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述铑纳米粒子水溶液的浓度为1.5～1.6mg/mL，所述碱溶液的浓度为0.2M，所述铁蛋白多克隆抗体的浓度为1mg/mL，所述封闭液的浓度为0.1mg/mL，所述铑纳米粒子的水溶液的浓度为1.5～1.6mg/mL；所述铑纳米粒子的水溶液、碱溶液、铁蛋白多克隆抗体和所述封闭液的体积比为(1000-4000)：(0-8)：(1-10)：100。5.权利要求1或2所述的铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物或权利要求3或4所述的制备方法制得的铑纳米粒子-铁蛋白多克隆抗体复合物在铁蛋白检测中的应用。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，何绮怡，杨慧怡，范冠浪，金晶，陈憬宏，崔锡平，李清兰，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：