miR-493-5p的检测试剂在制备食管癌检测试剂盒中的应用及食管癌检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及miR

【技术实现步骤摘要】
miR-493-5p的检测试剂在制备食管癌检测试剂盒中的应用及食管癌检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及miR-493-5p的检测试剂在制备食管癌检测试剂盒中的应用及食管癌检测试剂盒，属于生物技术和医学


技术介绍

[0002]食管癌作为消化道常见恶性肿瘤，其发病率在全球范围内位居恶性肿瘤的第8位，死亡率位居第6位。我国是食管癌的高发地区，其中约90％为食管鳞癌。近年来，尽管食管癌诊疗技术得到提升，但其预后仍然较差，5年总体生存率仅为20％左右。由于食管癌早期症状的隐蔽性和非特异性，临床上一经诊治，多数患者已属中晚期。胃镜检查是目前食管癌确诊的主要手段，但对患者的创伤较大，且对操作者技术要求较高，不适用于大规模的人群筛查。而上消化道钡餐、CT等检查，因其特异性较低，不能用于食管癌的确诊。因此，目前迫切的需要一种较为敏感的标志物，为食管癌的早期诊断提供客观依据。另一方面，淋巴结转移作为食管癌患者预后的独立危险因素，是预后不佳的主要原因之一。判断淋巴结转移的主要方法为影像学检查，而一些患者术前CT检查无明显肿大的淋巴结，术后病理却证实为淋巴结阳性。明确患者术前是否确实存在淋巴结转移，指导术前新辅助化疗，对于改善患者预后，提高患者生存质量具有重要意义。
[0003]液体活检作为新型的检测手段，具有易获取、创伤小、快捷等优点，是癌症检查发展的趋势与方向。外泌体(exosomes)是细胞在生理或病理条件下释放到细胞外的直径在40-150nm的双层囊泡结构，由细胞膜内陷后通过一系列复杂的机制形成多囊泡小体，通过与细胞膜融合，释放外泌体至细胞外。外泌体可携带一系列生物活性物质，如脂质、蛋白质和核酸(microRNA，CicroRNA及LncRNA)等。研究表明多种肿瘤细胞如：食管癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、胃癌细胞等均可分泌外泌体，并可通过不同分子机制影响肿瘤化疗耐药、肿瘤免疫、血管生成及迁移侵袭等过程，成为近年来肿瘤研究的热点。外泌体几乎在所有体液，如血液、尿液、唾液、母乳、精液、前列腺液、脑脊液、羊水和胸腔积液等中均有分布，且具有较高的组织特异性和稳定性，可用作肿瘤无创性检查。
[0004]microRNA是一类内源性的非编码RNA分子，长约17-24nt，其可通过调控靶基因的3'-UTR区域，进而调控细胞的分化、增殖、凋亡，发挥其促癌或抑癌基因的作用。研究表明，循环miRNA主要存在于血浆外泌体中，发现特异性高血浆外泌体microRNA并应用于食管癌的诊断及预后判断，对食管癌的诊疗必将起到巨大的推动作用。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了miR-493-5p的检测试剂在制备食管癌检测试剂盒中的应用及食管癌检测试剂盒。本专利技术通过研究发现，miR-493-5p可以作为一种食管癌早期诊断的标志物、食管癌淋巴结转移的标志物、以及手术前后血浆外泌体变化的标志物，利用miR-493-5p的检测试剂制备得到一种食管癌检测试剂盒，可以方便、快捷、特异性
高的进行食管癌的早期诊断、淋巴结转移的预警、以及判断食管癌患者手术治疗情况，为食管癌患者的治疗提供指导。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]miR-493-5p的检测试剂在制备食管癌检测试剂盒中的应用。
[0008]根据本专利技术优选的，所述miR-493-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0009]根据本专利技术优选的，所述食管癌为食管鳞癌。
[0010]根据本专利技术优选的，所述食管癌检测试剂盒为实时荧光定量PCR检测试剂盒。
[0011]根据本专利技术优选的，所述食管癌检测试剂盒用于检测血浆外泌体中的miR-493-5p。
[0012]一种食管癌检测试剂盒，包括miR-493-5p的逆转录反应试剂和miR-493-5p的荧光定量PCR反应试剂。
[0013]根据本专利技术优选的，所述miR-493-5p的荧光定量PCR反应试剂包括miR-493-5p的正向引物和反向引物，所正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述反向引物为通用引物。
[0014]根据本专利技术优选的，所述miR-493-5p的逆转录反应采用加尾法进行。
[0015]根据本专利技术优选的，所述食管癌检测试剂盒还包括内参体系。
[0016]进一步优选的，所述内参体系为内参基因U6的实时荧光定量PCR的检测体系，包括U6基因的正向引物和反向引物，所正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述反向引物为通用引物。
[0017]上述试剂盒中还包括用于加尾法逆转录和实时荧光定量PCR的酶液和缓冲液体系，均可为现有的市购产品。
[0018]上述试剂盒可以用于食管癌的早期诊断，可以用于预警食管癌患者的淋巴结转移，也可以用于检测食管癌患者术前术后血浆外泌体中miR-493-5p的变化，为食管癌患者的术后治疗提供指导。
[0019]本专利技术有益效果在于：
[0020]1、本专利技术首次揭示了血浆外泌体中miR-493-5p与食管癌、食管癌淋巴结转移相关，在食管癌、淋巴结转移患者中显著降低且具有统计学意义。基于此，本专利技术将miR-493-5p的检测试剂应用于制备食管癌的检测试剂盒，制备得到的试剂盒可以方便、快捷、特异性高的进行食管癌的早期诊断、淋巴结转移的预警、以及判断食管癌患者手术治疗情况，为食管癌患者的治疗提供指导。
[0021]2、本专利技术中所述血浆外泌体中的miR-493-5p作为食管癌早期诊断及预警淋巴结转移的标志物，灵敏度高，特异性好。根据miR-493-5p设计的试剂盒不仅可用于食管癌的筛查，同时可用于指导食管癌患者术前新辅助化疗，有着较高的临床使用价值及推广价值。
附图说明
[0022]图1为血浆外泌体的电镜鉴定照片。
[0023]图2为健康志愿者(Normal)与早期食管癌患者(ESCC)术前血浆外泌体中miR-493-5p的表达水平图。
[0024]图3为ROC分析血浆外泌体中的miR-493-5p对食管癌早期诊断效能的曲线图。
[0025]图4为有(LNM)、无(NLNM)淋巴结转移的食管癌患者术前血浆外泌体中的miR-493-5p的表达水平图。
[0026]图5为ROC分析血浆外泌体中的miR-493-5p对判断食管癌患者有无淋巴结转移的检验效能的曲线图。
[0027]图6为食管癌患者根治性手术前(Pre-operation)、后(Post-operation)血浆外泌体中的miR-493-5p的表达水平图。
具体实施方式
[0028]下面结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但是本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的试剂及药品，若无特殊说明，均为普通市售产品；实施例中涉及的实验步骤，若无特殊说明，均为本领域常规操作；实施例中的室温具有本领域公知的含义，一般是指25
±
2℃。
[0029]实验设计：
[0030]收集山本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miR-493-5p的检测试剂在制备食管癌检测试剂盒中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-493-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管癌为食管鳞癌。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管癌检测试剂盒为实时荧光定量PCR检测试剂盒。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管癌检测试剂盒用于检测血浆外泌体中的miR-493-5p。6.一种食管癌检测试剂盒，其特征在于，包括miR-493-5p的逆转录反应试剂和miR-493-5p的荧光定量PCR反应试剂。7.如权利要求6所述的食管癌检测试剂盒，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵小刚，肖兆华，李佩蔚，田忠献，姜宁，周洁，罗钧文，
申请(专利权)人：山东大学第二医院，
类型：发明
国别省市：