人抗IFN-α抗体、IFN-α结合片段、多核苷酸、组合物、试剂盒及应用和制备方法技术

本发明专利技术涉及人抗IFN

【技术实现步骤摘要】
人抗IFN-α
抗体、IFN-α
结合片段、多核苷酸、组合物、试剂盒及应用和制备方法
[0001]本申请是申请日为2014年7月3日专利技术名称为“人抗IFN-α抗体”的申请号为2014800487326(国际申请号为PCT/EP2014/064167)的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术大体上涉及结合哺乳动物(优选人)源的IFN-α的新型分子，特别是识别IFN-α的不同亚型的人单克隆抗体以及其片段、衍生物和变体。特别地，提供了重组的人患者来源的抗IFN-α抗体及其制备方法。此外，描述了包括可用于治疗和诊断失调(紊乱，disorder)的这样的结合分子、抗体以及其模拟物(mimics)的组合物。此外，本专利技术涉及在免疫治疗中用作药剂以及在自身免疫和自发炎症性失调以及恶性肿瘤(诸如全身性红斑狼疮(SLE)和1型糖尿病(T1DM))的治疗干预中用作靶的自身抗体(自体抗体)。更具体地，本专利技术涉及单克隆自身抗体，该单克隆自身抗体已经与来源于由于涉及免疫调节的基因突变而通常受已受损的中枢和/或外周耐受或自身耐受的丧失影响的受试者的B细胞分离。

技术介绍

[0003]免疫系统的不恰当反应可以引起所涉及机体的应激症状(stressful symptom)。通常对动物或人的健康没有显著影响的外来物质或物理状况的的夸张的免疫应答可能引起具有下述症状的过敏，上述症状在从温和反应(诸如皮肤刺激)到致命情形(诸如过敏性休克或各种血管炎)的范围内变动。对内源性抗原的免疫应答可以引起自身免疫失调，诸如系统性红斑狼疮(SLE)、1型或胰岛素依赖型糖尿病(T1DM或IDDM)和不同形式的关节炎。
[0004]免疫反应以协调方式发生，涉及多种细胞并且需要通过信号分子诸如所涉及的细胞之间的细胞因子进行通讯。可以通过例如信号拦截或各受体的阻断来影响或抑制这种通讯。
[0005]细胞因子是以纳摩尔至皮摩尔浓度的作为体液调节物的分泌的可溶性蛋白、肽和糖蛋白，由于它们在系统水平起作用，因此其表现出像典型荷尔蒙，并且它们在正常或病理状况下调节各个细胞和组织的功能活性。细胞因子与荷尔蒙的不同之处在于：它们并不是由组织在专门腺体中的专门细胞生成的，即不存在针对这些介体(mediator)的单一器官或细胞源，这是因为它们实质上由先天免疫和适应性免疫所涉及的所有细胞表达，上述细胞诸如为上皮细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞，并且特别是由其中主要是辅助性T(Th)淋巴细胞的T细胞表达。
[0006]根据它们各自的功能，细胞因子可以被分为三种功能类别：调节先天免疫反应、调节适应性免疫反应以及刺激造血。由于它们在所述三种类别内的例如涉及细胞活化、增殖、分化、募集或其他生理反应(例如通过靶细胞来分泌炎症特有的蛋白)的多效活性，已经发现由异常调节的细胞因子产生介导的细胞信号传导的干扰是与缺陷免疫反应相关联的许多失调(例如炎症和肿瘤)的原因。
[0007]由三种已知的蛋白家族(I型、II型和III型干扰素)组成的干扰素(IFN)构成细胞
因子的最重要种类之一。所有的人I型干扰素结合至由两种跨膜蛋白(IFNAR-1和IFNAR-2)组成的细胞表面受体(IFNα受体，IFNAR)，该细胞表面受体引起JAK-STAT活化、ISGF3的形成和随后开始的基因表达(Platanias和Fish,Exp.Hematol.(1999),1583-1592)。已经在例如Stark等人,Annu.Rev.Biochem.(1998),227
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64；Pestka S.,Biopolymers(2000),254
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87中综述了I型IFN的组合物、受体和信号通路。I型干扰素构建了在结构上相关的家族(IFN-α(α)、IFN-β(β)、IFN-κ(κ)、IFN-δ(δ)、IFN-ε(ε)、IFN-τ(τ)、IFN-ω(ω)和IFN-ζ(ζ))，其中IFN-δ和IFN-τ不会在人类中出现。人I型干扰素(IFN)基因簇集在人染色体9p21上，而小鼠基因位于小鼠4号染色体上的保守的共线性区中。迄今为止，已在小鼠中鉴定出14种IFN-α基因和3种伪基因。在人类中，已经鉴定出13种IFN-α(或IFNA)基因(IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17和IFNA21)以及1个伪基因，其中两种人IFN-α基因(IFNA1/IFN-α1和IFNA13/IFN-α13)针对相同的蛋白编码(van Pesch等人,J.Virol.(2004),8219-8228)。
[0008]IFN-γ是唯一的II型干扰素。其主要涉及通过巨噬细胞刺激诱导抗菌和抗肿瘤机制。IFN-γ受体(IFNGR)是由与两种信号转导IFNGR2链相关联的两种配体结合IFNGR1链组成的异质二聚体受体(Schroder等人,J.Leukoc.Biol.75(2004),163-189；Bach等人,Annu.Rev.Immunol.15(1997),563-591)。III型干扰素由三种亚型组成，并且还被称为IFNλ(IFNλ1或IL-29、IFNλ2或IL-28A和IFNλ3或IL-28B)，且具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性。IFN-λ受体也是由唯一的配体结合链IFN-λR1(也被指定为IL-28Rα)以及与用于IL-10相关细胞因子的受体共享的副链IL-10R2组成的异质二聚体复合物(Li等人,J.Leukoc.Biol.86(2009),23-32)。
[0009]I型干扰素是具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的多效细胞因子。根据所处环境，它们可以是抗炎的和组织保护性的或促炎的，并且促进自身免疫。IFN-β1a或1b用于治疗多种硬化症，而IFN-α 2b疗法用于多种癌症(黑素瘤、血液学、恶变)。经常在患有系统性红斑狼疮(SLE)的患者的血清中检测到升高的IFN-α活性，这表明IFN-α在SLE的发展中起核心作用(和Alm,J.Exp.Med.(2001),F59-F63；Crow MK,Arthritis Rheum.(2003),2396-2401；Crow MK.,Curr Top Microbiol.Immunol.(2007),359-386；Crow MK.Rheum Dis Clin North Am.(2010),173-186)。
[0010]另一方面，在患有各种自身免疫失调(诸如SLE、T1DM、干燥综合征、皮肌炎、多发性硬化症(MS)、银屑病和风湿性关节炎(RA)患者的患者的白细胞中显示出干扰素依赖基因的特异性表达谱(pattern)(也称为“干扰素签名”)。此外，在IFN-α治疗期间已经重复观察到炎性关节炎、MS和T1DM的发展，这表明IFN-α至少促进了那些疾病Crow MK.,Arthritis Res Ther.(2010),Suppl 1:S5)。另外的数据表明在肌炎、系统性硬皮病、慢性牛皮癣本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，所述抗体或其IFN-α结合片段：(i)结合至人IFN-α亚型IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA10和IFNA14；(ii)结合于人IFN-α亚型IFNA1/13、IFNA8、IFNA16和IFNA21中的至少一种；以及(iii)能够中和在(i)和(ii)中限定的所述人IFN-α亚型中的至少一种，以及在其可变区中包括以下互补决定区CDR：VH-CDR1：氨基酸序列为SEQ ID NO：84的第31-35位，VH-CDR2：氨基酸序列为SEQ ID NO：84的第50-66位，VH-CDR3：氨基酸序列为SEQ ID NO：84的第99-112位，VL-CDR1：氨基酸序列为SEQ ID NO：86的第24-34位，VL-CDR2：氨基酸序列为SEQ ID NO：86的第50-56位，以及VL-CDR3：氨基酸序列为SEQ ID NO：86的第89-98位。2.根据权利要求1所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，其中所述人抗IFN-α抗体为IgG1。3.根据权利要求1所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，在其可变区中包括如SEQ ID NO：84所示的VH区的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：86所示的VL区的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，包括C
H
和/或C
L
恒定区，所述C
H
和/或C
L
恒定区包括选自SEQ ID NO：88和90的氨基酸序列或具有至少91％同一性的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，其针对至少五种人IFN-α亚型具有≤10ng的IC50值。6.根据权利要求1所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，其选自由单链Fv片段、F(ab')片段、F(ab)片段、F(ab')2片段和单域抗体片段组成的组。7.根据权利要求1所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，其被可检测地标记或附着于药物。8.根据权利要求7所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，其中可检测标记选自由酶、放射性同位素、荧光团、肽和重金属组成的组。9.一种编码根据权利要求1至8中任一项所述的抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段的多核苷酸。10.一种包括根据权利要求9所述的多核苷酸的载体。11.一种包括根据权利要求9所述的多核苷酸或根据权利要求10所述的载体的宿主细胞。12.一种组合物或试剂盒，包括根据权利要求1至8中任一项所述的人抗IFN-α抗体或其IFN-α结合片段，根据权利要求9所述的多核苷酸，根据权利要求10所述的载体，和/或...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨达，
申请(专利权)人：因美诺克股份公司，
类型：发明
国别省市：