腺相关病毒的肝脏特异性嗜性制造技术

本公开内容提供了用于改变或变化腺相关病毒(AAV)的组织嗜性(例如，肝脏嗜性)的组合物和方法。物和方法。物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】腺相关病毒的肝脏特异性嗜性
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年04月30日提交的美国临时申请序列号62/841,179和2018年05月11日提交的美国临时申请序列号62/670,543的优先权。
专利

[0003]本公开内容总体上涉及腺相关病毒(AAV)改变的组织嗜性，并且具体地涉及控制AAV的肝脏嗜性。

技术介绍

[0004]腺相关病毒(AAV)是属于细小病毒属的细小病毒，而细小病毒属又属于细小病毒科。该病毒是一种复制缺陷型、无包膜病毒，可感染人类和某些灵长类动物，但已知不会引起疾病。AAV能够感染分裂细胞和静止细胞，并以染色体外状态持续存在，而不会整合到宿主细胞的基因组中，尽管在天然病毒中，病毒携带的基因也可能会整合到宿主基因组中。这些特征使得AAV成为用作基因疗法中的病毒载体的候选物。然而，某些AAV血清型会表现出肝脏嗜性，这可能取决于所治疗的疾病，其可能是需要的或不需要的。
[0005]了解如何确定AAV的肝脏嗜性，并且基于该信息能够操纵AAV的嗜性，将是有益的。

技术实现思路

[0006]AAV的组织特异性(即，组织嗜性)由衣壳血清型决定，并且本文所述的方法和组合物能够改变特定AAV的组织嗜性，以改善由这些改变的AAV递送的疗法的特异性。例如，改变或变化AAV的肝脏嗜性可能是有益的，例如，当肝脏是所需靶点时，例如通过增强天然肝脏嗜性，还有当肝脏不是所需靶点时，例如通过降低天然肝脏嗜性。例如，当该病毒被更有效地递送至肝脏(或非肝器官)中的细胞并更有效地对其进行转染时，可以向该对象施用较低剂量的给定AAV。
[0007]在一个方面中，本公开内容提供了改变腺相关病毒(AAV)载体的组织嗜性的方法。这种方法通常包括定位AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置266的氨基酸位置；并且将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为甘氨酸(G)氨基酸残基，以便为所得AAV载体提供增强的肝脏嗜性，或者替代为丙氨酸(A)氨基酸残基，以降低肝脏嗜性，即为所述所得AAV提供肝脏脱靶。
[0008]在一些实施方式中，这种方法包括将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为G氨基酸残基，以便为所述所得AAV载体提供增强的肝脏嗜性(例如，肝脏富集)。在一些实施方式中，这种方法包括将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为A氨基酸残基，以提供降低的肝脏嗜性，例如通过所述所得AAV使所述肝脏脱靶。
[0009]在另一个方面中，本公开内容提供了改变腺相关病毒(AAV)载体的组织嗜性的方法。这种方法通常包括定位AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置168的氨基酸位置；并且将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为精氨酸(R)氨基酸
残基，以便为所得AAV载体提供增强的肝脏嗜性，或者替代为赖氨酸(K)氨基酸残基，以提供降低的肝脏嗜性，例如，所述所得AAV肝脏脱靶。
[0010]这种方法通常包括定位AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置168的氨基酸位置；并且将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为精氨酸(R)氨基酸残基，以便为所得AAV载体提供增强的肝脏嗜性(例如，肝脏富集)，或者替代为赖氨酸(K)氨基酸残基，以提供降低的肝脏嗜性，例如，所述所得AAV肝脏脱靶。
[0011]在一些实施方式中，这种方法包括将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为R氨基酸残基，以便为所述所得AAV载体提供肝脏富集。在一些实施方式中，这种方法可以包括将在定位的位置的天然存在的氨基酸替代为K氨基酸残基，以提供所述所得AAV降低的肝脏靶向。
[0012]在另一个方面中，提供了改变腺相关病毒(AAV)载体的组织嗜性的方法。这种方法通常包括定位AAV衣壳蛋白内如图14中所定义的肝脏切换(toggle)区；并且将天然存在的肝脏切换区替代为来自异源血清型或从头衍生的序列的肝脏切换区，以改变肝脏嗜性，例如以提供所述所得AAV载体的增强或降低的肝脏靶向。
[0013]在一些实施方式中，当所述异源或从头衍生的肝脏切换区在AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置266的位置包含G氨基酸残基时，提供了所述所得AAV载体的肝脏富集。在一些实施方式中，当所述异源或从头衍生的肝脏切换区在AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置266的位置包含A氨基酸残基时，提供了所述所得AAV载体降低的肝脏靶向。
[0014]在一些实施方式中，替代步骤使用定点诱变，通过限制性消化以及现有或从头合成的DNA连接，通过现有或从头合成的DNA的同源性介导的组装或者其组合进行。在一些实施方式中，定位步骤通过测序进行。
[0015]在另一个方面中，本公开内容提供了筛选向肝脏的转染被富集或降低的AAV的方法。这种方法通常包括对编码AAV衣壳蛋白的核酸进行测序；定位所述AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置266的氨基酸位置；并且鉴定在定位的位置具有G氨基酸残基或在定位的位置具有A氨基酸残基的AAV衣壳蛋白。在通常情况下，在定位的位置的G氨基酸残基表明AAV是向肝脏的转染被富集的AAV，而在定位的位置的A氨基酸残基表明AAV是向肝脏的转染被降低的AAV。
[0016]在另一个方面中，本公开内容提供了筛选向肝脏的转染被富集或降低的AAV的方法。这种方法通常包括对编码AAV衣壳蛋白的核酸进行测序；定位所述AAV衣壳蛋白内对应于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣壳蛋白中的位置168的氨基酸位置；并且鉴定在定位的位置具有R氨基酸残基或在定位的位置具有K氨基酸残基的AAV衣壳蛋白。在通常情况下，在定位的位置的R氨基酸残基表明AAV是向肝脏的转染被富集的AAV，而在定位的位置的K氨基酸残基表明AAV是向肝脏的转染被降低的AAV。
[0017]在又一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO:1[Anc80]中所示序列的AAV，其中在位置266的X3选自G或A。
[0018]在另一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO:1[Anc80]中所示序列的AAV，其中在位置168的X1选自R或K。
[0019]在另一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO:2[Anc80L65]中所示序列的
AAV。
[0020]在又一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO:3[Anc80L65G266A]中所示序列的AAV。
[0021]在另一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO:4[AAV9 G267A]中所示序列的AAV。
[0022]在另一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO:5[AAV9 G267A S269T]中所示序列的AAV。
[0023]在又一个方面中，本公开内容提供了具有SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:1)的所述衣壳蛋白中的位置168的所述定位的位置的K氨基酸残基表明AAV显示出极低或无肝脏嗜性。11.一种具有SEQ ID NO:1[Anc80]中所示序列的腺相关病毒(AAV)，其中在位置266的X3选自G或A，或者其中在位置168的X1选自R或K。12.一种具有选自下组的序列的腺相关病毒(AAV)：SEQ ID NO:2[Anc80L65]、SEQ ID NO:3[Anc80L65 G266A]、SEQ ID NO:4[AAV9 G267A]、SEQ ID NO:5[AAV9 G267A S269T]、SEQ ID NO:6[AAV9 Anc80L65-VRI]、SEQ ID NO:7[AAV9 Anc80L65 G266A-VRI]、SEQ ID NO:8[AAV3B A266G]、SEQ ID NO:9[AAV3B A266G S267 N268T]、SEQ ID NO:10[AAV3B G265 A266A]、SEQ ID NO:11[AAV3B G265 A266G]、SEQ ID NO:12 AAV3B G265 A266A S268T]、SEQ ID NO:13[AAV3B ...

【专利技术属性】
技术研发人员：LH范登伯格，P施密特，C蒂珀，C昂祖，E津恩，
申请(专利权)人：司科彭斯眼部研究学会，
类型：发明
国别省市：